环境监测培训教材

环境监测认证审评中心王金伟第一页，共七十八页。内容洁净区环境监测趋势分析和质量回顾环境监测结果超标案例分析第二页，共七十八页。一、洁净区环境监测洁净区洁净级别及标准洁净区的验证和监测洁净区环境监测方案环境监测仪器、设备、培养基第三页，共七十八页。1、洁净级别及标准-悬浮粒子注：1、摘自附录1无菌药品第九条，测试方法可参照14644-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：空气洁净度级别》2、A级洁净区空气悬浮粒子的级别为4.8，以≥5.0μm的悬浮粒子为限度标准；B洁净区（静态）的空气悬浮粒子的级别为5，同时包括两种粒径的悬浮粒子；C级洁净区（静、动态），悬浮粒子的级别分别为7和8；D级洁净区（静态）悬浮粒子的级别为8。洁净度级别悬浮粒子最大允许数/米3静态动态≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA（1）352020352020B352029

3520002900

C3520002900352000029000D352000029000不作规定不作规定第四页，共七十八页。1、洁净级别及标准-微生物注：1、A区的微生物限度，对于时可以完全执行；但对于时，需要适当考虑，因为不是无菌区，所有物料、器具等是非无菌状态，所以接触蝶、5指手套等微生物难以连续符合要求，需要灵活处理。2、单个沉降碟的暴露时间可少于4小时，同一位置使用多个沉降碟连续监测并累积计数。级别浮游菌3沉降碟（90）4小时接触碟（55）碟5指手套手套A1111B10555C1005025－D20010050－第五页，共七十八页。需要关注的技术标准14644-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：空气洁净度级别》14698-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：微生物控制》医药工业洁净厂房设计规范50457-2008洁净室施工及验收规范50591-2010-医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、沉降菌的测试方法16292/3/4-2010注：16292/3/4-2010是参考14644-1、14698-1、71-1990《洁净室施工及验收规范》而制定的第六页，共七十八页。2、洁净区验证和监测-悬浮粒子A级区确认时的采样量不少于1m3采用等动力学的取样头*级：涵盖关键操作的全过程，包括设备组装；监测频率、取样量，及时发现人为干预、偶发事件及任何系统的破坏级：类似于A级区，采样频率、采样量可以调整-C级区：质量风险管理原则确定-D级区：一般不作要求，（必要时）-自净时间：15-20分钟，静态（指导值）悬浮粒子的要求A级区级别确认级动态监测几点说明第七页，共七十八页。何为等动力学采样等动力学采样头又称等动力(学)采样。一种采集流动介质中样品的采样方法。采集气流中的悬浮颗粒物或流动水中的水样时，为使所采集的样品有代表性，必须使进入采样器的气流或水流速度与采样点附近的气流或水流的速度相同。这样才能使采集到的悬浮颗粒物浓度或水样中的组分与实际气流或水流中的完全一致。常用于采集烟道气中悬浮颗粒物(尘粒)和流动水体中的水样。

在无菌检查附录中明确显示只有在单向流系统中才会采用等动力学采样头，大家知道在悬浮粒子计数器在进行采集的过程中，是通过气泵抽气并进行检测，不同仪器有自身单位时间内的采样量。为保证在进行采样过程中不造成单向流系统的流型发生紊乱，所以采用等动力学采样头。

如果计算一个采样头是不是等动力学采样头的计算方法如下：

悬浮粒子计数器单位时间的抽气量：V（）

单向流的风速：45(0.45)

3.14*R^0.5*60*45

计算等动力学采样头的半径。

如果仪器的每分钟的采样量为28.3L

等动力学采样头半径约为1.8。

第八页，共七十八页。固定在线监测-等动力取样头示例第九页，共七十八页。A级区级别确认-悬浮粒子示例取样量取样点位置取样点数14644-1B.4.2节有明确的采样量的计算公式：采样量（升）=(20/级别中最大粒子限度）×1000A级采样量=(20/20)×1000=1米3从上式中可见，级别要求越低，取样量就越小均匀分布：详见16292-2010附录A高度：80150*取样点数：B.1.1公式=A，A为洁净区面积，例如10米×5米的区域，取样点应为7*（取整）16292-2010最少采样点数目表*取样量取样点数取样点位置注意：取样量、取样点数仅指在洁净级别确认时采用第十页，共七十八页。悬浮粒子采样点数目及布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中,某局部区域过于稀疏布置同上静态测试动态测试采样点数目不得少于最少采样点数目应根据产品的生产及工艺关键操作区设置数目第十一页，共七十八页。最少采样点数目表面积m2洁净度级别10010000100000300000＜102~3222≥10~＜204222≥20~＜408222≥40~＜10016422注：1、大于100m2的洁净区功能间不再列出，很少见。2、对于100级的单向流洁净室（区），包括100级洁净工作台，面积指的是送风口表面积；对于10000级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是房间面积。3、级参照上述100级，C级参照10000级，D级参照100000级。

第十二页，共七十八页。悬浮粒子采样点布置规则1、平面采样点布置图:第十三页，共七十八页。悬浮粒子采样点布置规则2、单向流区域:洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，气流形式可参考图2.1、2.2。图2.1水平单向流气流形式图2.2垂直单向流气流形式第十四页，共七十八页。悬浮粒子采样点次数限定16292-20105.4.2描述：对任何小洁净室（区）或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，总采样次数不得少于5次。每个采样点的采样次数可以多于1次，且不同采样点的采样次数可以不同。悬浮粒子数的检查常规做法：一个房间只有2个取样点，每个取样点取样3次；一个房间取样点超过2个的，每个取样点取样2次。第十五页，共七十八页。2、洁净区验证和监测-微生物沉降菌法被动法定量空气浮游菌采样法主动法表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）表面取样法（接触碟法）微生物监测方法浮游菌沉降菌环境表面人员1、平面采样点布置图:第十六页，共七十八页。2、洁净区验证和监测-微生物a&.Ⅰ空气沉降菌、浮游菌监测沉降菌法被动法单个沉降碟在空气中的暴露时间<4小时*只能给出定性和半定量的数据应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价定量空气浮游菌采样法主动法撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪应取一定体积的空气（取样体积应有代表性）仪器应经过校验第十七页，共七十八页。2、洁净区验证和监测-微生物a&.Ⅱ环境表面监测：表面取样法接触蝶法：适用于平整表面 取样面积252 培养基略有凸起，高于碟子边缘，便于取样 培养基中应含有中和剂/保护剂棉签擦拭法：适用于不规则表面 取样面积~252 定性或定量表面样应在无菌操作结束时取 以最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险第十八页，共七十八页。2、洁净区验证和监测-微生物a&.Ⅲ人员监测表面取样法（接触碟法），取样时间一般为：工作结束，离开洁净区前取样处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套）生产过程中随时监测特别注意：不得在刚消毒过后取样第十九页，共七十八页。2、洁净区验证和监测-微生物a&.无菌区人员更衣确认和监测图例每个手套(5只手指)胸口处衣帽结合处帽兜额头处靴子与工作裤接口处前臂第二十页，共七十八页。2、洁净区验证和监测-微生物a&.无菌区人员监测合格标准其它事项每个受训者必须经过3次更衣试验确认合格后才能进入无菌操作区。资格确认合格的操作员工每年需重复一次更衣试验。当有已确认合格的人员有违反更衣程序趋向时，须重复l～3次更衣试验。连续3次监测不合格人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。在连续10次监测中，如有4次不合格的人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。采样点参考标准（·皿）采样点参考标准（·皿）手套≤3口罩≤10胸口≤5前额≤5前臂≤5靴子—裤子接合处≤5第二十一页，共七十八页。浮游菌测试需要注意的问题最少采样量洁净度别采样量次100级100010000级500100000级100300000级1001、最少采样量16293-20105.4.2最少采样量级参照，供参考最少采样量洁净度别采样量次A级1000B级1000C级500D级100第二十二页，共七十八页。浮游菌测试需要注意的问题2、培养基选择16293-20104.7大豆酪蛋白琼脂培养基（）或沙氏培养基（）或其他用户认可并经验证了的培养基*3、培养16293-20104.10（1）培养皿倒置于培养箱中培养（2）采用大豆酪蛋白琼脂培养基（）配制的培养皿采样后，在30～35℃培养箱中培养，时间不少于２d；采用沙氏培养基（）配制的培养皿经采样后，在20～25℃培养箱中培养，时间不少于5d。*第二十三页，共七十八页。

与2010版药典微生物限度中的培养方法为何不一样，比如霉菌、酵母菌培养温度、细菌的培养时间。第二十四页，共七十八页。浮游菌测试需要注意的问题4、采样点布置（1）浮游菌的采样点位置可参照16292-2010（2）采样点离地面0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。（3）送风口采样点位置离开送风面30左右。（4）采样点布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏，应根据具体车间的平面图、房间面积、关键操作点，来确定采样点位置。（5）采样点编号管理，同一房间内不同洁净级别（无菌灌装区区域）编号不得重复。比如采用+房间号-两位数进行编号，质量检测中心313-01-039房间需要取两个点：313-01-039-01、313-01-039-02。浮游菌测试第二十五页，共七十八页。沉降菌测试需要注意的问题洁净度别最少培养皿数（Φ90）100级1410000级2100000级2300000级21、最少培养皿数16294-20105.4.2在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数最少采样量级参照，供参考洁净度别最少培养皿数（Φ90）A级14B级14C级2D级2第二十六页，共七十八页。沉降菌测试需要注意的问题2、测试时间16294-20104.4.3要求：静态测试时，培养皿暴露时间为30以上；动态测试时，培养皿暴露时间不大于4h。理解：动态测试时,生产时间小于4h培养皿暴露时间以实际生产时间计，当生产时间大于4h培养皿暴露时间4h（最低标准）。动态测试时，则需记录生产开始时间及测试时间。沉降菌监测第二十七页，共七十八页。3、环境监测方案关键项目悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物取样计划的影响因素取样点的选择产品类型、生产过程、设施/工艺设计、生产批次、人为干扰、环境监测历史数据等主要取决于洁净室的设计和生产要求洁净区应制定系统的环境监测方案，包括动态监测和静态监测第二十八页，共七十八页。环境监控整体要求洁净区监测年度洁净级别确认日常环境监测动态监测静态监测无菌生产区A/B最终灭菌C级的主要功能间C级区域D级区域第二十九页，共七十八页。美国药典微生物监测频率取样区域取样频率百级或更严1001次/班毗邻百级区如万级100(.，10，000)1次/班其它辅助区域－10万级 2次/周可能与产品/容器接触区域

2次/周10万级或以下

1次/周参考：31－1116从表中可以看出，美国药典中没有明确B级，但有100级、1万级、10万级甚至更低级别，划分比较灵活，按需要而定。第三十页，共七十八页。环境监测案例-1监控区（洁净度级别）监控频率监控项目最终灭菌产品

生产区域称量配料、配液

（C级区）每周一次空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌[1]表面微生物灌封间

（级区）每周两次空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌[1]表面微生物操作者手套表面微生物轧盖间、洗塞间

（级区）每周一次空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌[1]表面微生物操作者手套表面微生物容器精洗区

（D级区）两周一次空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌[1]表面微生物[1].每月一次第三十一页，共七十八页。环境监测案例-2监控区（洁净度级别）监控频率监控项目非最终灭菌产品

生产区域称量配料、配液

（级区）每周两次空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌[1]表面微生物无菌灌封辅助区

（C级区）每周两次空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌[1]表面微生物无菌灌封间

(级区)每班一次

每批一次空气悬浮粒子空气浮游菌空气沉降菌表面微生物操作者手套和操作服表面微生物[1].每月一次第三十二页，共七十八页。环境监测案例-3监控区（洁净度级别）监控频率监控项目取样间

(级区)每周一次

每次取样空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌表面微生物微生物实验室无菌实验室

(级区)每次实验空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌表面微生物操作者手套表面微生物限度检查实验室

（级区）每次实验空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌[1]表面微生物操作者手套表面微生物抗生素效价测定室

（D级区）每周一次空气悬浮粒子[1]空气浮游菌空气沉降菌表面微生物[1].每月一次第三十三页，共七十八页。监控频率在规定的监控频率内，应选取多个时间点取样，不应集中在某个时间点完成全部取样。比如一个季度内有3个空调系统需要取样，则这三个系统应分别在一月、二月和三月取样。第三十四页，共七十八页。洁净区监测的位置取样位置选择时考虑因素：哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？在生产过程中，什么地点最容易长菌？哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难奏效的部位？什么活动会导致污染的扩散？在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？第三十五页，共七十八页。洁净区监测的位置应符合“16292-2010”~“16294-2010”的要求基于风险的设计监测点设置在潜在风险最大的位置药品容器连接处人流和物流经过的地方监测点靠近“工作高度”第三十六页，共七十八页。洁净区监测的位置系统取样点环境空气（灌装线）接近敞开和/或者已灌装的容器洁净室空气最接近工作区域水使用点表面（厂房）地面、门把手、墙、帘子表面（设备）灌装线、控制面板、供胶塞的料斗压缩空气离开压缩机最远点无菌检查系统最接近真空源的接口灌装线操作人员至少要检手指印单向流（例如，单向流罩）靠近活动最多的区域示例1第三十七页，共七十八页。洁净区监测的位置示例2：无菌灌装线取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如：在灌装针头处将产品装载入冻干腔室处胶塞供料桶无菌部件进行连接操作的部位操作人员频繁活动处（不影响生产过程）靠近产品，但不接触产品的位置第三十八页，共七十八页。粒子在线监测布置图例-1123第三十九页，共七十八页。粒子在线监测布置图例-2传感器低于机器，采样管伸入灌装操作区内灌装后冻干前监测点位置：药瓶是半封闭状态（敞口）保证灌装后，冻干前的环境区域是受控的。正确的取样点位置：靠近传送带。第四十页，共七十八页。浮游菌、沉降菌取样点示例沉降菌、浮游菌：监控点位置，高度一般为离地80左右，或操作台面。浮游菌、沉降菌监控点的设置根据生产工艺及污染风险综合考虑。第四十一页，共七十八页。洁净区表面微生物取样点C级区取样点：一般为地面、墙面及操作人员十指手套。对C级下的局部A级区取样宜在生产结束后进行，避免造成污染。地面取样墙面取样灌装机（A级）产品转移（A级）第四十二页，共七十八页。洁净区表面微生物取样点B级区接触碟取样位置应能及时发现潜在污染风险，在受污染可能性较高的位置布点。无菌分装设备门进出B级区门把手仪器、设备操作键、触摸屏等传递窗门把手第四十三页，共七十八页。4、环境监测常用仪器/设备/培养基沉降菌/浮游菌监测直径：90mm浮游菌监测AirIDEAL3P100升/分悬浮粒子监测PMSLasairⅡ28.3升/分表面微生物监测直径：55mm第四十四页，共七十八页。粒子在线监测仪2500模块化控制器

真空泵5104-20信号6180欧陆显示器第四十五页，共七十八页。预制培养基-特殊预制平板适用于圆弧表面取样外盖带锁扣表面带有锁扣，可以避免因取样结束后平皿意外跌落等问题具有一定的韧性，可以进行适当弯曲，适合不规则表面或圆弧取样第四十六页，共七十八页。预制培养基-无菌擦拭棒 使用前 擦拭后培养基颈部保护套拭子使用方法：1、拔除下端保护套，取出拭子用无菌液体润湿

2、擦拭取样表面（一般为252）3、取样结束后将拭子放回保护套

4、将擦拭棒颈部掰断，上端培养基流入保护套中并浸没拭子5、将整个擦拭棒放入培养箱培养培养基第四十七页，共七十八页。预制培养基-无菌试验预制培养基一般配制后会有氧化层，中国药典规定在无菌试验前其氧化层高度不得高于培养基高度的1/5，培养结束后其氧化层高度不得高于培养基高度的1/2。*图中培养基瓶中充入保护性气体（抗氧化），有利于试验结果的判断。第四十八页，共七十八页。预制培养平板包装无菌区使用预制平板：一般采用三层包装形式：55接触平板90预制平板第四十九页，共七十八页。预制平板进入洁净区预制平板进入无菌区，须避免对监控区域的污染去除最外层包装

放入传递窗开启紫外灯消毒外表面消毒处理第五十页，共七十八页。预制平板脱包装经传递窗进入洁净区的预制培养平板继续脱去外面两层包装就可以使用。脱出第二层包装脱出第三层包装脱包装后单个平板第五十一页，共七十八页。预制平板使用示意图-1接触碟表面取样示意图：1，取样点采样2，取样位置消毒

3，用无尘布清洁4，标明取样点编号5，平板入无菌保管袋6，保管袋密封待培养第五十二页，共七十八页。预制平板使用示意图-2使用前喷酒精进行消毒，开启至少5分钟消毒完成，放入90mm平板装上无菌采样托盘设置采样量，启动采样采样完成取出平板（有明显凹坑）盖上培养皿盖，装入无菌保管袋待培养未经采样空白平板第五十三页，共七十八页。二、趋势分析和质量回顾警戒限和纠偏限的设定趋势分析质量回顾第五十四页，共七十八页。1、警戒限和纠偏限的设定法定标准运行设定标准运行通常值管理设计目标纠偏限ActionLevel纠偏限ActionLevel警戒限AlertLevel警戒限AlertLevel第五十五页，共七十八页。第五十六页，共七十八页。警戒限和纠偏限的设定应设定在法定标准值以下根据验证数据；根据历史监测数据并进行趋势分析后制定参考法规要求；根据历史监测数据并进行趋势分析后制定原则纠偏限警戒限设定的基准值不只是用来判定合格与否，而且用于过程控制的设定值。若监测结果显示超过基准值，根据各个基准值的定义采取相应的处理措施。关键项目应年度趋势分析，根据趋势分析的结果制定警戒限和纠偏限。第五十七页，共七十八页。警戒限和纠偏限的设定示例示例1洁净度级别尘埃粒子数（≦0.5m）浮游菌警戒限(m3)纠偏限(m3)警告限(3)纠偏限(3)A1,7603,520－<1B1,7603,5205≦10C176,000352,00050≦100第五十八页，共七十八页。警戒限和纠偏限的设定示例示例2洁净度级别表面微生物设备/器具地面警戒限(252)纠偏限(252)警戒限(252)纠偏限(252)A-<13≦5B3≦55≦10C13≦2515≦30第五十九页，共七十八页。2、趋势分析Titleinhere新版GMPTitleinhereEUGMPTitleinhereICH-Q10确定分析目标用警戒/纠偏值来确定监测数据确认现行的警戒/纠偏限度及标准是否恰当采取的“纠偏措施”定期报告来更新管理。年度报告中包括数据的总结和对纠偏限度的回顾数据处理趋势分析第六十页，共七十八页。3、质量回顾要求，第十章<质量控制和质量保证>第八节产品质量回顾分析第二百六十六条应当按照操作规程，每年对所有生产的药品按品种进行产品质量回顾分析，以确认工艺稳定可靠，以及原辅料、成品现行质量标准的适用性，及时发现不良趋势，确定产品及工艺改进的方向。应当考虑以往回顾分析的历史数据，还应当对产品质量回顾分析的有效性进行自检。…..企业至少应当对下列情形进行回顾分析：（十一）相关设备和设施，如空调净化系统、水系统、压缩空气等的确认状态；第六十一页，共七十八页。空调净化系统质量回顾示例冻干车间百级、万级区悬浮粒子、沉降菌、浮游菌回顾示例针对全年车间各区域百级层流、万级洁净区沉降菌、浮游菌、尘埃粒子（≥0.5μm、≥5μm）进行分析，数据均在警戒限以内，表明车间空调系统处理受控状态，能充分满足产品生产的需要。以百级区为例第六十二页，共七十八页。空调净化系统质量回顾示例第六十三页，共七十八页。空调净化系统质量回顾示例第六十四页，共七十八页。空调净化系统质量回顾示例第六十五页，共七十八页。空调净化系统质量回顾示例第六十六页，共七十八页。四，环境监测结果超标调查 A级区（无菌灌装）悬浮粒子在线监测超标1、偶发情况调查，评估2、连续有规律的情况调查，评估，放行/报废3、连续的无规律的情况调查，报废

第六十七页，共七十八页。四，环境监测结果超标调查附录1：无菌药品第十条第2点“……灌装或分装时，由于产品本身产生粒子或液滴，允许灌装点≥5.0的悬浮粒子出现不符合标准的情况。”第6条“在A洁净区和B级洁净区，连续或有规律地出现少量≥5.0的悬浮粒子时，应当进行调查。”

第六十八页，共七十八页。四，环境监测结果超标调查过程：1、怀疑在线微粒子检测器故障2、进入洁净区