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文档简介

吲哚乙酸氧化酶活力的测定P144熟悉运用比色法测定吲哚乙酸氧化酶活力的方法,并掌握测定酶活力的基本要求。实验目的实验原理吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小,对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的作用,从而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。IAA+FeCl3→红色螯合物②处理:在试管中加入:MnCl21ml+2,4-二氯酚1ml+IAA2ml+酶液1ml+磷酸缓冲液5ml

对照:在试管中加入:MnCl21ml+2,4-二氯酚1ml+IAA2ml+磷酸缓冲液6ml①称取1g下胚轴,置于研钵中,加入预冷的磷酸缓冲液(pH=6.1)1ml,研磨成匀浆,再用9ml分2次冲洗,总体积为10ml。离心4000rpm10min,所得的上清夜即为粗酶液。IAA含量的测定方法步骤标准曲线的绘制。IAA氧化酶需要两个辅助因子:一元酚和二价离子Mn计算时间(h)IAA氧化酶活力=(μg·IAA/h·ml)对照—处理(μg/ml)

×10保温:30℃温箱中30min;显色:三支试管中分别加入处理液、对照液、蒸馏水各2ml后,再分别加入试剂A8ml,摇匀,40℃黑暗处30min(15-20min);用分光光度计在530nm波长处测A值;查标准曲线;简述IAA氧化酶活力测定的原理。制备酶液时,为何加入pH6.1的磷酸缓冲液。酶促反应时,为何要加入MnCl2和2,4-二氯酚。比色时,为何要选在530nm波长处?现有黄豆芽、绿豆芽两种材料,测定黄豆芽的吸光度值为A1,绿豆芽的吸光度值为A2,且A1>A2,试比较这两种材料下胚轴中哪个IAA氧化酶活力大,为什么?思考题结果总结培养基接种数(瓶*片)最早出愈时间(d)出愈率(%)污染率(%)愈伤生长情况MS+2,4-D1.013*31897.437.69

切口处较多出愈,黄色颗粒状,偶见灰白色愈伤

MS+2,4-D1.0+6-BA0.412*3171000切口及与培养基接触处生长愈伤,黄色透明,较湿润

MS+2,4-D1.0+6-BA1.012*3161000切口及与培养基接触处生长愈伤,黄白色,湿润

不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响结果总结I型愈伤组织Ⅱ型愈伤组织Ⅲ型愈伤组织培养基(mg/L)接种数(瓶*株)出芽时间(d)平均叶片数(个/株)增值系数MS+NAA0.0213*32022MS+NAA0.02+6-BA0.

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