生物灭菌与空气净化

生物灭菌与空气净化第1页/共72页灭菌与空气净化第一节灭菌

第二节空气净化

第2页/共72页第一节灭菌

一、常见灭菌方法灭菌是指利用物理或化学方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程，比消毒的要求更加严格。在发酵工业生产中，为保证纯种培养，在接种之前，要对培养基、空气系统、补料或流加系统、设备和管道等进行灭菌，还要对生产环境进行消毒，防止杂菌或噬菌体的大量繁殖。常用的灭菌方法有以下几种：

1．化学灭菌一些化学药剂能与微生物的细胞发生反应而具有杀菌的作用。常用的化学药剂有甲醛、氯（或次氯酸钠）、高锰酸钾、环氧乙烷、季铵盐（或新洁尔灭）、臭氧等。由于化学药剂也会与培养基中的一些成分作用，而且加入培养基后不易去除，所以化学灭菌法一般不用于培养基的灭菌，适用于车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等。第3页/共72页第一节灭菌化学药剂的使用，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。2．射线灭菌射线灭菌就是利用紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的γ射线等进行灭菌的方法，以紫外线最为常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力较强。紫外线的穿透力较低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养室等空间的灭菌，对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。250～270nm之间杀菌效率高，以波长在260nm左右杀菌效率最高。除紫外线外，也可利用0.6～14nm的X射线或由Co60产生的γ射线进行灭菌。今年来，微波灭菌设备的兴起，为灭菌提供了新的选择。第4页/共72页第一节灭菌3．干热灭菌干热灭菌是指利用高温，导致微生物细胞发生氧化，微生物体内蛋白质发生变性和电解质浓缩引起中毒等作用，氧化作用导致微生物死亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受能力比对湿热强得多，所以干热灭菌与湿热相比所需的温度要高，时间要更长，一般为160～170℃，1～1.5h。实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料（如培养皿、接种针、固定化细胞用的载体等）可以用干热灭菌。第5页/共72页第一节灭菌4．湿热灭菌湿热灭菌就是指利用饱和水蒸汽进行灭菌。由于蒸汽具有很强的穿透能力，而且在冷凝时能释放出大量的热能，易使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆转的变性，导致微生物死亡。其灭菌效果远远好于干热灭菌。同时，蒸汽的价格便宜，来源方便，灭菌效果可靠，是目前最常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条件是121℃，30min。第6页/共72页第一节灭菌5．过滤除菌过滤除菌就是利用过滤方法截留微生物，达到除菌的目的。此法只适用于澄清流体和气体的除菌。工业上常用过滤除菌方法大量制备无菌空气，供好氧微生物的深层培养适用。对于热敏性培养基也采用过滤方法实验除菌。在产品过程中，也可利用无菌过滤方法来处理料液，以获得无菌产品。以上的一些灭菌方法，有时也可根据需要结合适用。如动物细胞了离体培养的培养基中通常含有血清、多种氨基酸、维生素等热敏性物质，在制备这类培养基时，可将其中的热敏性溶液用无菌过滤的方法除菌，其他物质的溶液则用湿热灭菌，也可将热敏性物质在较低温度或较短时间内灭菌，再与其他部分合并使用。第7页/共72页第一节灭菌二、培养基的灭菌由于培养基的灭菌大多数采用湿热方法灭菌，所以这里介绍培养基的湿热灭菌。1．微生物的死亡速率与理论灭菌时间（1）微生物的热阻每一种微生物都有一定的最适生长温度范围，存在一个最低限和最高限，当微生物处于最低限温度以下时，处于休眠状态。而当温度高于最高限，细胞的蛋白质就易发生凝固变性，导致微生物在短时间内死亡。一般无芽孢的细菌，在60℃下10min即可全部杀死。而芽孢细菌的芽孢能经受较高的温度，在100℃下要经过数分钟甚至数小时才能杀死。某些嗜热菌芽孢能在120℃下耐受20～30min，但这种菌在培养基中出现的机率较低。一般认为灭菌的彻底与否以能否杀死芽孢细菌为标准。第8页/共72页第一节灭菌杀死微生物的极限温度称致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需要的时间称为致死时间。在致死温度以上，温度越高，致死时间越短。由于一般细胞、芽孢细菌、微生物细胞和微生物孢子，对热的抵抗力不同，因此它们的致死温度和致死时间也有差别。微生物对热的抵抗能力通常用“热阻”表示。热阻是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值，表4-1是几种微生物对湿热的相对抵抗力。可见，细菌的芽孢比大肠杆菌对湿热抵抗力约高3000000倍。第9页/共72页第一节灭菌

（2）微生物的热死规律——对数残留定律微生物热死是指微生物受热失活直到死亡。微生物受热死亡主要是由微生物细胞内酶蛋白受热凝固变性所致。在一定温度下，微生物受热后其死亡细胞的个数的变化如化学反应的浓度变化一样，遵循一定的规律。在微生物受热失活的过程中，微生物不断被杀死，活细胞不断减少。表4-1微生物对湿热的相对抵抗力微生物名称大肠杆菌细菌芽孢霉菌孢子病毒相对抵抗力130000002～101～5第10页/共72页第一节灭菌因此，微生物受热死亡的速率与微生物存活细胞数目有关，即微生物受热死亡的速率与任一瞬间残存的微生物活细胞数成正比：（4-1）式中N——培养基中残存的活细胞数t——受热时间，mink——反应速率常数，又称比死亡速率常数，min-1第11页/共72页第一节灭菌若开始灭菌时（t=0），培养基中活微生物数为N0，经过t时间后活微生物数变成Nt，将式（4-1）积分得到：

（4-2）或（4-3）式（4-3）称为对数残留定律，可以根据残留菌数Nt的要求计算所需的灭菌时间t。将存活率Nt/N0对时间t在半对数坐标上绘图，可得到一条直线，其斜率的绝对值就是比死亡速率常数k。图4-1是大肠杆菌在不同温度下的残留曲线，可以看出温度越高，k值（斜率的绝对值）越大，微生物越容易死亡。第12页/共72页第一节灭菌

某些微生物受热死亡的速率不完全符合对数残留定律，将存活率Nt/N0对时间t在半对数坐标上绘图，得到的不是直线（图4-2）。这主要是这类微生物中既存活着营养细胞，也存活着耐热的芽孢，但温度越高，k值（斜率的绝对值）越大，微生物越容易死亡这个规律不变。第13页/共72页第一节灭菌上述式中的反应速率常数k是微生物耐热性的一种特征，它随微生物的种类和灭菌温度的变化而变化。在相同的温度下，k值越小，则此微生物越耐热。一般情况下，微生物芽孢的k值远小于其营养细胞；不同细菌的芽孢的k值也不相同，表4-2是121℃下几种芽孢细菌的k值。同一种微生物在不同的灭菌温度下，k值也不同，灭菌温度越低，k值越小；温度越高，k值越大，微生物死亡的越快。如硬脂嗜热芽孢杆菌FS1518在104℃下k值为0.0342min-1，121℃时k值为0.77min-1，而131℃时k值则为15min-1，可见提高灭菌温度，k值增大，灭菌时间显著缩短。第14页/共72页第一节灭菌表4-2121℃下几种芽孢细菌的k值细菌名称k值/min-1细菌名称k值/min-1枯草芽孢杆菌3.8～2.6硬脂嗜热芽孢杆菌FS6172.9硬脂嗜热芽孢杆菌FS15180.77产气梭状芽孢杆菌PA36791.8第15页/共72页第一节灭菌随着时间的延长，加热后的残留菌数呈对数减少，且温度越高，死亡越快。但培养基灭菌时并不时始终符合对数残留定律，特别是在受热后很短的时间内，培养基中油脂、糖类及一定浓度的蛋白质会增加微生物的耐热性；高浓度盐类、色素能降低其耐热性。同时随着灭菌条件的加强，培养基的成分可能也会受到破坏，如糖溶液会焦化变色、蛋白质变性、维生素失活、醛糖与氨基化合物反应、不饱和醛聚合、一些化合物发生水解等。因此培养基的灭菌一般都采用高温短时间加热的方式，这样可以达到彻底灭菌和把营养成分的破坏减少到最低限度的目的。表4-3是不同灭菌条件下培养基营养成分的破坏情况。第16页/共72页第一节灭菌表4-3不同灭菌条件下培养基营养成分的破坏情况温度/℃灭菌时间/min营养成分破坏/%温度/℃灭菌时间/min营养成分破坏/%10040099.31300.5811030671400.08211515501500.01<1120427

第17页/共72页第一节灭菌从式（4-3）可得：或（4-4）从式（4-4）可见，灭菌时间取决于培养基中所含的原始微生物数（N0），灭菌的程度（Nt）和k值。在培养基中有各种各样的微生物，不可能逐一加以考虑。如果将全部微生物作为耐热的细菌芽孢来考虑，虽然会延长灭菌时间或提高灭菌温度，但灭菌效果得到了保证。另一个问题是灭菌的程度，如果要达到彻底灭菌，即Nt=0，则t要为∞，实际操作中这显然不可能。因此，在设计时常采用Nt=0.001（即灭菌1000次有一次失败的机会）最后要注意的是通过式（4-4）计算得到的是理论灭菌时间，实际的设计和操作时可做适当的延长或缩短。第18页/共72页第一节灭菌2．培养基的分批灭菌培养基的分批灭菌就是指将配制好的培养基放在发酵罐或其他容器中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起灭菌的操作过程，也称实罐灭菌。在实验室，由于培养基量较少而采用的灭菌锅灭菌也是分批灭菌。在工业上，培养基的分批灭菌不需要专门的灭菌设备，设备投资少，灭菌效果可靠，对灭菌用蒸汽要求低（0.2～0.3Mpa表压），但因其灭菌温度低、时间长而对培养基成分破坏大，其操作难于实现自动控制。分批灭菌是中小型发酵罐经常采用的一种培养基灭菌方法。第19页/共72页第一节灭菌

（1）分批灭菌的操作分批灭菌在所用的发酵罐中进行。将培养基在配料罐中配制好，通过专用管道用泵输送到发酵罐，开始灭菌。图4-3是通用式发酵罐常见的管路配备。一般有空气管路和排气管路，取样用的取样管道，放料用的出料管道，接种管道，消沫剂管道，补料管道等。发酵罐传热用的夹套或蛇管，因采用间壁传热而与发酵罐内部不相通。第20页/共72页第一节灭菌在进行培养基灭菌之前，通常先把发酵罐的空气分过滤器灭菌并用空气吹干。进料完毕后，开动搅拌以防料液沉淀。然后开启夹套蒸汽阀，缓慢引进蒸汽，使料液预热升温至80℃左右后关闭夹套蒸汽阀门。开3路（空气、出料、取样）进汽阀，开排气阀，包括小辫子（进料管、补料管、接种管排气阀）。当升温至110℃左右，控制进出汽阀门直至121℃（表压0.lMPa）开始保温，保温一般为30min。保温结束后，关闭过滤器排气阀、排汽阀、进汽阀。关闭夹套下水道阀，开启冷却水进回水阀。待罐压低于过滤器压力时，开启空气进气阀引入无菌空气。随后引人冷却水，将培养基温度降至培养温度。第21页/共72页第一节灭菌

（2）分批灭菌的计算分批灭菌的过程包括升温、保温和降温三个阶段，如图4-4所示。灭菌主要是在保温过程中实现，在升温段后期，也有一定的灭菌作用。第22页/共72页第一节灭菌培养基的升温，可以在夹套或蛇管内通入蒸汽间壁加热，也可直接将蒸汽通人培养基中，或兼用。但直接通蒸汽会因冷凝水的加入改变培养基的消后体积。培养基的保温阶段，是灭菌的主要时段。习惯上，把保温时间看为灭菌时间。降温是培养基灭菌后用冷却水间壁将培养基冷却至培养所要求温度的过程。随着发酵罐容积的加大，分批灭菌的升温和降温时间就延长，由此造成培养基成分的破坏。同时，发酵罐的设备利用率也有所降低。分批灭菌中，如果不计升温阶段所杀灭的菌数，把培养基中所有的菌都看作是在保温阶段（灭菌温度）被杀灭，这样可以简单的利用式（4-4）粗略计算灭菌所需要的时间。第23页/共72页第一节灭菌例4-1有一发酵罐内装40m3培养基，在121℃温度下进行实罐灭菌。原污染程度为每1ml有2×105个耐热细菌芽孢，121℃时灭菌速度常数为1.8min-1。求灭菌失败机率为0.001时所需要的灭菌时间。解No=40×106×2×105=8×1012（个）

Nt=0.001（个）k=1.8（min-1）灭菌时间：（min）但是实际上，培养基在加热升温时（即升温阶段）就有部分被杀灭，特别是当培养基加热至100℃以上，这个作用较为显著。因此，保温灭菌时间实际上比上述计算的时间要短。严格地讲，在降温阶段也有杀菌作用，但降温时间较短，在计算时一般不考虑。第24页/共72页第一节灭菌在升温阶段，培养基温度不断升高，菌死亡速率常数也不断增大，反应速率常数与温度有一定关系。

（4-5）式中A为系数，S-1；ΔE为活化能，J/mol；R为气体常数，8.314J/（mol·K）；T为绝对温度，K上式也可改写成（4-6）当以某耐热杆菌的芽孢为灭菌对象时，此时A=1.34×1036S-1，ΔE=2.84×104J/mol，因此，式（4-6）可写成（4-7）利用式（4-7）可以求得不同温度下的反应速率常数。第25页/共72页第一节灭菌考虑到升温阶段对灭菌的贡献，实际上保温开始时培养基中活微生物数不是N0，而是Np，得：(4-8)式中tp为升温阶段时间，可从100℃开始算起，可从经验值或通过热量恒算取得该数值。

km为这一温度段内的灭菌常数之平均值

(4-9)式（4-9）中的积分可以通过图解积分法求得。第26页/共72页第一节灭菌例4-2在例4-1中，灭菌过程的升温阶段，培养基从100℃上升到121℃，共需15min。求升温阶段结束时，培养基中芽孢数和保温所需时间。解T1=273+100=373KT2=273+121=394K

先通过式（4-7）求得不同温度下的k值，再用图解积分法求得

S-1培养基中芽孢数为（个）保温所需时间为min第27页/共72页第一节灭菌由此可见，考虑升温段的灭菌作用后，保温时间比不考虑减少了15%。所以发酵罐体积越大，其分批灭菌的升温时间长，就更应该考虑升温段的灭菌作用，其保温时间应该更短。3．培养基的连续灭菌培养基分批灭菌的显著缺点是对培养基成分破坏大、升降温时间长，尤其是在发酵罐体积越来越大的今天，其在高温下持续的时间更长，其培养基成分遭受破坏也越严重。而以“高温、快速”为特点的连续灭菌，就是将配制好的培养基再通入发酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程，也称为连消。图4-5是连续灭菌的设备流程图。连续灭菌时，培养基在短时间内被加热到灭菌温度（一般高于分批灭菌温度，130～160℃），短时间保温（一般为5～8min）后，被快速冷却，再进入早已灭菌完毕的发酵罐。第28页/共72页第一节灭菌第29页/共72页第一节灭菌培养基采用连续灭菌时，发酵罐应再连续灭菌开始前先进行空罐灭菌（空罐灭菌的方法基本和分批灭菌相同）。加热器、维持罐及冷却器也应事先灭菌。组成培养基的不同成分（耐热与不耐热、糖与氮源）可再不同温度下分开灭菌，以减少培养基受热破坏的程度。培养基的连续灭菌具有对培养基破坏小、可以实现自动控制、提高发酵罐的设备利用率、蒸汽用量平稳等优点而被广泛应用，尤其在培养基体积较大时。但对加热蒸汽的压力要求较高，一般不小于0.45MPa。同时连续灭菌需要一组附加设备，设备投资大。连续灭菌时，配料罐用于培养基的配制。然后将培养基用泵打入预热桶中。第30页/共72页第一节灭菌预热桶的作用是定容与预热。预热的目的是使培养基在后续的加热过程中能迅速升温到指定的灭菌温度，同时可避免太多的冷凝水带入培养基，还可减少震动和噪声。一般可以将培养基预热到70～90℃。预热好的培养基由连消泵打入加热器。加热器又称连消塔，使培养基与蒸汽混合并迅速达到灭菌温度。加热采用的蒸汽压力一般为0.45～0.8Mpa，其目的是使培养基在较短的时间（20～60s）里快速升温。加热器常用的有塔式和喷射式两种。第31页/共72页第一节灭菌加热后通过保温将培养基维持灭菌温度一段时间，这是杀灭微生物的主要过程。其设备有维持罐和管式维持器两种。保温设备一般用保温材料包裹，但不直接通入蒸汽。管式维持器的优是管的直径较小，物料可一直沿管子向前流动，先进先出，不会返混；而维持罐由于直径远大于进料管，培养基在罐内混合，不能作到先进先出，返混现象严重，因而延长了保温时间。保温结束以后，必须迅速降温至接近培养温度（40～45℃），避免培养基营养成分的破坏。国内大多数采用喷淋冷却器，也有采用螺旋版换热器、板式换热器、真空冷却器等。第32页/共72页第一节灭菌连续灭菌的理论灭菌时间计算可沿用对数残留定律，如忽略升温的灭菌作用，保温时间为或（4-10）式中C0、Ct分别式单位体积培养基在灭菌前后的或菌数，个/ml

例4-3若将例4-1中的培养基采用连续灭菌，灭菌温度为131℃，求灭菌所需的维持时间。解k=0.237s-1=14.23min-1C0=2×105个/mlCt=0.001/（40×106）=2.5×10-11

个/ml

min

第33页/共72页第一节灭菌可见，灭菌温度升高10℃后采用连续灭菌则保温时间大为缩短。如果采用维持罐保温的还必须考虑返混的情况，为确保灭菌效果，实际维持时间常取理论灭菌时间的3～5倍。

4．影响培养基灭菌的因素影响培养基灭菌的因素除了所污染杂菌的种类、数量、灭菌温度和时间外，培养基成分、pH值、培养基中颗粒、泡沫等对培养基灭菌也有影响。（1）培养基成分油脂、糖类及一定浓度的蛋白质增加微生物的耐热性，高浓度有机物会包于细胞的周围形成一层薄膜，影响热的传递，因此在固形物含量高的情况下，灭菌温度可高些。例如，大肠杆菌在水中加热60～65℃便死亡；在10％糖液中，需70℃4～6min；在30％糖液中需70℃30min。第34页/共72页第一节灭菌低质量分数(1％～2％)的NaCl溶液对微生物有保护作用，随着质量分数的增加，保护作用减弱，当质量分数达8％～10％以上则减弱微生物的耐热性。（2）pH值pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值6.0～8.0，微生物最耐热；pH＜6.0，氢离子易渗入微生物细胞内，从而改变细胞的生理反应促使其死亡。所以培养基pH值愈低，灭菌所需的时间愈短，见表4-4。第35页/共72页第一节灭菌表4-4pH值对灭菌时间的影响温度/℃孢子数/（个/ml）灭菌时间/minpH值6.1pH值5.3pH值5.0pH值4.7pH值4.5120100008753311510000252512131311010000706535302410010000740720180150150第36页/共72页第一节灭菌（3）培养基中的颗粒培养基中的颗粒小，灭菌容易，颗粒大，灭菌难。一般含有小于lmm的颗粒对培养基灭菌影响不大，但颗粒大时，影响灭菌效果，应过滤除去。（4）泡沫培养基的泡沫对灭菌极为不利，因为泡沫中的空气形成隔热层，使传热困难，热难以穿透，难以杀灭微生物。对易产生泡沫的培养基在灭菌时，可加入少量消泡剂。对有泡沫的培养基进行连续灭菌时更应注意。第37页/共72页第一节灭菌

5．分批灭菌和连续灭菌比较连续灭菌与分批灭菌比较有很多优点尤其式生产规模大时，优点更为显著。主要体现在以下几方面：①可采用高温短时灭菌，培养基受热时间短，营养成分破坏少，有利于提高发酵产率；②发酵罐利用率高；③蒸汽负荷均匀；④采用板式换热器时，可节约大量能量；⑤适宜采用自动控制，劳动强度小。但当培养基中含有固体颗粒或培养基中有较多泡沫时，以采用分批灭菌为好，因为在这种情况下用连续灭菌容易导致灭菌不彻底。对于容积小的发酵罐，连续灭菌的优点不明显，而采用分批灭菌比较方便。第38页/共72页第一节灭菌三、培养基与设备、管道灭菌条件（1）杀菌锅内灭菌固体培养基灭菌蒸汽压力0.098MPa，维持20～30min；液体培养基灭菌蒸汽压力0.098MPa，维持15～20min；玻璃器皿及用具灭菌，压力0.098MPa，30～60min。（2）种子罐、发酵罐、计量罐、补料罐等的空罐灭菌及管道灭菌从有关管道通入蒸汽，使罐内蒸汽压力达0.147MPa，维持45min，灭菌过程从阀门、边阀排出空气，并使蒸汽通过达到死角灭菌。灭菌完毕，关闭蒸汽后，待罐内压力低于空气过滤器压力时，通入无菌空气保持罐压0．098MPa。第39页/共72页第一节灭菌（3）空气总过滤器和分过滤器灭菌排出过滤器中的空气，从过滤器上部通人蒸汽，并从上、下排气口排气，维持压力0.174MPa灭菌2h。灭菌完毕，通人压缩空气吹干。（4）种子培养基实罐灭菌从夹层通入蒸汽间接加热至80℃，再从取样管、进风管、接种管进蒸汽，进行直接加热，同时关闭夹层蒸汽进口阀门，升温至121℃，维持30min。谷氨酸发酵的种子培养基实罐灭菌为110℃，维持l0min。第40页/共72页第一节灭菌第（5）发酵培养基实罐实菌从夹层或盘管进入蒸汽，间接加热至90℃，关闭夹层蒸汽，从取样管、进风管、放料管三路进蒸汽，直接加热至121℃，维持30min。谷氨酸发酵培养基实罐灭菌为105℃，维持5min。（6）发酵培养基连续灭菌一般培养基为130℃，维持5min，谷氨酸发酵培养基为115℃6～8min。（7）消泡剂灭菌直接加热至121℃，维持30min。（8）补料实罐灭菌根据料液不同而异。淀粉料液为121℃，维持5min。（9）尿素溶液灭菌105℃，维持5min。第41页/共72页第二节空气净化大多数微生物为好氧微生物，在培养时需要提供氧气，最常用的氧源就是空气。而空气中除了含有氧气外，还含有其他多种成分，其中有一些是不能进入培养系统的，因此必须对空气进行净化。一、空气的除菌空气是气态物质的混合物，主要成分为氮气和氧气，还含有惰性气体、二氧化碳或水蒸气等。此外，在空气中悬浮有很多灰尘，主要是由无机物微粒、烟灰、花粉和种类繁多的微生物所组成。空气中常见的微生物主要是细菌、酵母菌、霉菌和病毒。第42页/共72页第二节空气净化第空气中微生物的数量和环境有着密切的关系。一般干燥寒冷的北方，空气中含微生物较少，而潮湿温暖的南方空气中含微生物较多，城市空气中的微生物比人口稀少的农村多，地平面空气中的微生物比高空中多。工程设计中常以微生物浓度104个/m3作为空气的污染指标。

1．发酵用无菌空气的质量标准发酵用的无菌空气，就是将自然界的空气经过压缩、冷却、减湿、过滤等过程，达到以下标准：①连续提供一定流量的压缩空气。发酵用无菌空气的设计和操作中常以通气比或VVM来计算空气的用量。VVM的意义是单位时间（min）单位体积（m3）培养基中通入标准状况下的空气的体积（m3），一般为0.1～2.0。第43页/共72页第二节空气净化②空气的压强（表压）为0.2～0.4Mpa。压强过低不利于克服发酵罐中的下游阻力，压强过高则不必要。③进入过滤器之前，空气的相对湿度φ≤70%。这是为了防止空气过滤介质的受潮。④进入发酵罐的空气温度可比培养温度高10～30℃。虽然对于发酵而言，空气的温度低较好，但太低的温度需要消耗过多的能量。⑤压缩空气的洁净度，在设计空气过滤器时，一般取失败概率为10-3为指标。也可以把100级作为无菌空气的洁净指标。100级指每立方米空气中，尘埃粒子数最大允许值≥0.5μm的为3500，≥5μm的为0；微生物最大允许数为5个浮游菌/m3，1个沉降菌/m3。第44页/共72页第二节空气净化2．空气预处理第45页/共72页第二节空气净化第图4-6是空气设备净化系统流程图。一般我们把这个流程中空气过滤器以前的部分称为空气预处理阶段。在预处理阶段的设备简单介绍如下：（1）采风塔采风塔应建在工厂的上风处，远离烟囱。采风塔可采用铁皮或混凝土建造，要求越高越好，至少10m，设计的气体流速在8m/s左右。有时可把采风塔建成采风室，直接建在空压机房上面，以节省地方和利用空间。第46页/共72页第二节空气净化（2）粗过滤器粗过滤器安装在空压机吸入口前，又称前置过滤器。其主要作用是拦截空气中较大的灰尘以保护空气压缩机，同时也起到一定的除菌作用，减轻总过滤器的负担。粗过滤器应具有阻力小、灰尘容量大的特点，否则会成为阻力而影响压缩机吸气。过滤介质可采用泡沫塑料（平板式）或者无纺布（折叠式），设计流速为0.1～0.5m/s。（3）空气压缩机空气压缩机的作用是提供动力，以克服随后的各个设备的阻力。目前国内常用的空压机有往复式空压机、螺杆式和涡轮式空压机。空压机的选用应根据空气用量、结合本地实际及空压机的特点合理使用。为保证连续供气，一般不提倡单台空压机。第47页/共72页第二节空气净化第（4）空气贮罐空气贮罐的作用是消除空气压缩机的脉动，这对于往复式空压机特别重要。如果选用螺杆式或涡轮式空压机，由于其排气是均匀而连续的，则压缩空气贮罐可以省去。（5）冷却器空压机出口温度一般在120℃左右，必须冷却。另外在潮湿季节或地区，空气中含水量较高，为避免过滤介质受潮而失效，冷却还可以达到除湿的目的。空气冷却器可采用列管式换热器，空气走壳程，管内走冷却水。一般中小型工厂采用两级空气冷却器串联来冷却压缩空气。在夏天第一级冷却器可用循环水来冷却空气，第二级冷却器要采用9℃左右的低温水来冷却压缩空气。由于空气被冷到露点以下会有凝结水析出，故冷却水的下部应设置排除凝结水的接管口。第48页/共72页第二节空气净化第（6）气液分离设备冷却后的压缩空气，会有来自空压机的润滑油，尤其是往复式空压机。如果冷却温度低于露点，空气中还会有水。所以在冷却器后面安装了气液分离设备，除去空气中的油和水，以保护过滤介质。用在这里的气液分离设备一般有两类，一是利用离心力沉降的旋风分离器，主要除去空气中绝大多数的20μm的液滴；二是利用惯性拦截的介质分离器，如丝网除沫器，它可去除1μm以上的雾滴，去除率约为98%。第49页/共72页第二节空气净化第（7）空气加热设备压缩空气经过气液分离设备把夹带在空气中的液滴、雾沫除去后，其相对湿度仍为100%（如果冷却到露点以下）。在进入总过滤器之前为了把空气的相对湿度从100%降到70%以下，应该再将空气加热。3．空气的过滤除菌各种不同的培养过程，鉴于其所用菌种的生长能力强弱、生长速度的快慢、培养周期的长短以及培养基的差异，对空气灭菌的要求也不相同。所以，对空气灭菌的要求应根据具体情况而定，但一般仍可按10-3的染菌概率考虑。空气净化的方法有热灭菌法、静电除菌、介质过滤除菌法。第50页/共72页第二节空气净化第过滤除菌法，是让含菌空气通过过滤介质，以阻截空气中所有微生物，而取得无菌空气，按除菌机制不同，可分为绝对过滤和深层介质过滤两类。绝对过滤所用过滤介质的滤孔小于细胞和孢子，从而能将微生物阻留在介质的一侧，例如将多孔的聚乙烯醇缩甲醛树脂（PVF）经过热处理制成孔径小于0.3μm的滤膜。悬浮于空气中的菌体大小一般为0.5～5μm，因而这种材料有很好的除菌效果。纤维素、硅酸硼纤维、聚四氟乙烯等都可作为过滤介质。由于孔隙小于微生物，空气中即使有液滴也不会影响其除菌效果。为了使过滤介质有较长的使用寿命，要求空气在进行过滤前，先经过粗滤器除去较大的颗粒。该方法主要应用于医疗及特种发酵。第51页/共72页第二节空气净化第52页/共72页第二节空气净化深层介质过滤所用介质的孔隙一般大于微生物细胞，为了达到所需的除菌效果，介质必须有一定的厚度。这种介质的除菌机理比较复杂，主要是依靠气流通过滤层时，基于滤层纤维网格的层层阻碍，迫使气体在流动过程中产生无数次改变气速大小和方向的绕流运动，而菌体微粒由于具有一定的质量，在以一定速度运动时具有惯性，碰到介质时，由于惯性作用而离开气流，在摩擦、粘附作用下被滞留在介质表面上，这种捕集微粒的作用叫做惯性撞击截留作用。目前工厂和实验室多采用深层介质过滤。第53页/共72页第二节空气净化

深层过滤介质又分为两类，第一类过滤介质有棉花、玻璃纤维、合成纤维和颗粒状活性炭，图4-7是用这类介质填充的过滤器。第二类是将过滤材料做成纤维滤纸、金属烧结板等，图4-8是超细玻璃纤维纸过滤器，这些材料除菌效率高，无需填充得很厚，如果用超细纤维玻璃纸只需要少量几张就可以了。在实验室或中试规模，空气过滤器只设一级，而大发酵工厂大多采用两级甚至三级过滤。第一级过滤器常称为总过滤器，二、三级过滤器称为分过滤器。第54页/共72页第二节空气净化过滤器在使用前，也需要进行灭菌，一般是使用蒸汽灭菌，灭菌后用压缩空气吹干。总过滤器约每月灭菌一次，为了使总过滤器不间断地进行工作，一般应有备用，以便在灭菌时替换使用。二、空气净化流程空气净化的一般流程是把吸气口吸入的空气先经过压缩前的过滤，再进入压缩机。从空压机出来的空气（一般高温高压），先冷却到适当的温度，并通过气液分离设备除去油和水，再加热到一定温度，最后通过总过滤器和分过滤器除菌，从而获得洁净度、压力、温度和流量都符合要求的无菌空气。第55页/共72页第二节空气净化第具有一定压力的无菌空气可以克服空气在预处理、过滤除菌及有关设备、管道、阀门、过滤介质等的压力损失，并在培养过程中能维持一定的罐压。因此过滤除菌的流程必须有供气设备——空气压缩机，对空气提供足够能量，同时还要具有高效的过滤除菌设备以除去空气中的微生物颗粒。对于其他附属设备则要求尽量采用新技术以提高效率，精简设备流程，降低设备投资、运转费用和动力消耗，并简化操作。但流程的制订要根据具体所在地的地理、气候环境和设备条件来考虑。如在环境污染比较严重的地方要改变吸风的条件（如采用高空吸风），以降低过滤器的负荷，提高空气的无菌程度；而在温暖潮湿的地方则要加强除水设施以确保和发挥过滤器的最大除菌效率。第56页/共72页第二节空气净化要保持过滤器在比较高的效率下进行过滤，并维持一定的气流速度和不受油、水的干扰，则要有一系列的加热、冷却及分离和除杂设备来保证。空气净化的一般流程如下。空气吸气口→粗过滤器→空气压缩机→一级空气冷却器→二级空气冷却器→分水器→空气贮罐→旋风分离器→丝网除沫器→空气加热器→总空气过滤器→分空气过滤器→无菌空气空气过滤除菌有多种工艺流程，下面介绍几种较典型的流程。第57页/共72页第二节空气净化第1．两级冷却、加热除菌流程图4-6即为两级冷却、加热除菌流程示意图。它是一个比较完善的空气除菌流程，可适应各种气候条件。它能充分地分离油水，使空气达到较低的相对湿度后进人过滤器，以提高过滤效率。该流程的特点是两次冷却、两次分离、适当加热。两次冷却、两次分离油水的好处是能提高传热系数，节约冷却用水，油水分离得比较完全。经第一冷却器冷却后，大部分的水、油都已结成较大的雾粒，且雾粒浓度较大，故适宜用旋风分离器分离。第二冷却器使空气进一步冷却后析出一部分较小雾粒，宜采用丝网分离器分离，这样发挥丝网能够分离较小直径的雾粒和分离效果高的作用。通常，第一级冷却到30～35℃，第二级冷却到20～25℃。除水后，空气的相对湿度仍是100%，须用丝网分离器后的加热器加热将空气中的相对湿度降低至50%～60%，以保证过滤器的正常运行。第58页/共72页第二节空气净化第两级冷却、加热除菌流程尤其适用于潮湿的地区，其他地区可根据当地的情况，对流程中的设备作适当的增减。2．冷热空气直接混合式空气除菌流程图4-9为冷热空气直接混合式空气除菌流程示意。第59页/共72页第二节空气净化第从流程图可以看出，压缩空气从贮罐出来后分成两部分，一部分进入冷却器，冷却到较低温度，经分离器分离水、油雾后与另一部分未处理过的高温压缩空气混合，此时混合空气已达到温度为30～35℃，相对湿度为50%～60%的要求，再进入过滤器过滤。该流程的特点是可省去第二冷却后的分离设备和空气再加热设备，流程比较简单，利用压缩空气来加热析水后的空气，冷却水用量少。该流程适用于中等湿含量地区，但不适合于空气湿含量高的地区。第60页/共72页第二节空气净化第3．高效前置过滤空气除菌流程图4-10为高效前置过滤空气除菌的流程示意图。它采用了高效率的前置过滤设备，利用压缩机的抽吸作用，使空气先经中、高效过滤后，再进入空气压缩机，这样就降低了主过滤器的负荷。经高效前置过滤后，空气的无菌程度已经相当高，再经冷却、分离，入主过滤器过滤，就可获得无菌程度很高的空气。此流程的特点是采用了高效率的前置过滤设备，使空气经多次过滤，因而所得的空气无菌程度很高。第61页/共72页第二节空气净化第62页/共72页第二节空气净化

4．利用热空气加热冷空气的流程图4-11为利用热空气加热冷空气的流程示意。它利用压缩后的热空气和冷却后的冷空气进行热交换，使冷空气的温度升高，降低相对湿度。此流程对热能的利用比较合理，热交换器还可兼做贮气罐，但由于气-气换热的传热系数很小，加热面积要足够大才能满足要求。第63页/共72页第二节空气净化

三、无菌检测及发酵废气废物的安全处理1．无菌检测工业生产中，为明确责任、跟踪生产进程、及早发现染菌等问题，一般在菌种制备、发酵罐接种前后和培养过程种都按时采样、尽情无菌检测。对发酵液的无菌检测有三种方式：无菌试验、镜检、试剂盒检验。无菌试验有肉汤培养法、双蝶法、斜面培养法等。肉汤法是直接用装有酚红肉汤的无菌试管取样，37℃培养，观察培养基颜色的变化，确定是否染菌。双蝶法是取样在双蝶培养基上划线，取样培养6h后反复划线，培养24h后观察有无菌落。斜面培养法是接种于斜面上，培养24h后观察有无菌落。第64页/共72页第二节空气净化镜检采用显微镜直接观察取样中有无杂菌，明显的优势是快速，但染菌初期或杂菌少时无法确定，一般与肉汤法配合使用。试剂盒是近几年出现的快速、高效检测灭菌效果和染菌的新手段。空气系统的无菌检测主要考察过滤器是否失效。过滤器失效的检测方法一是检测过滤器两侧的压降，压降大说明过滤介质被堵塞；二是用粒子计数器测定空气中的粒子数是否超标，有无达到洁净度要求。第65页/共72页第二节空气净化第2．发酵废气废物的安全处理发酵过程中，发酵罐不断排出废气，其中夹带部分发酵液和微生物。中小型试验发酵罐厂采用在排气口接装冷凝器的方法回流部分发酵液，以避免发酵液体积的大幅下降。大型发酵罐的排气处理一般接到车间外经沉积液体后从“烟囱”排出。当发生染菌事故后，尤其发生噬菌体污染后，废气中夹带的微生物一旦排向大气将成为新的污染源，所以必须将发酵尾气进行处理。第66页/共72页我劝一个草率结婚的朋友离婚。她平静的告诉我，如果说当初鲁莽结婚是个错误。那么，现在草率离婚是一错再错。这位朋友后来还是离婚了，大家一致认为她的行为很理性。

同样的故事正在互联网搜索巨头谷歌身上发生，但是谷歌选择了草率“离婚”。

饮鸩止渴

由于急于抑制苹果iphone手机翻天覆地的产业冲击，谷歌采取急功近利的粗糙型开放策略。饮鸩止渴的策略一时取得了成果。市场研究公司尼尔森最近公布的数据显示，在通过VerizonWireless、AT&T和SprintNextel三大运营商经销后，谷歌Android手机在美国市场上的销售量已经超过iPhone。另一家市场研究公司iSuppli甚至认为，全球范围内使用Android操作系统的手机数量将在2012年超过苹果iPhone。

表面繁华的背后，是Android生态系统的一团糟，谷歌正在为自己的粗放型开放策略买单。

用户对谷歌手机的态度从开始的好奇、后来的犹豫，变成强烈的批评。“大多Android手机程序都是垃圾，乱七八糟的”，一位手机发烧友迅速投奔了iphone的阵营：“同样的植物人大战僵尸游戏，在谷歌手机和iphone手机上的体验简直没法比”

混乱，还是混乱。一切一切的乱象，折射出谷歌已经失去对Android生态系统的控制。这一切的根源，我的判断是开放策略初期过于宽松，导致失去控制权。混乱的生态系统表现在用户手机上，就是应用程序的混乱和粗燥。

一错再错

为此，谷歌开始采取对策。最近，有国内厂商称新的Android3.0开始关闭应用程序的API(应用程序编程接口)，统一Android界面。这意味着，谷歌将放弃其初始开放策略，开始封闭管理。

粗看之下，谷歌认识到自己的错误。既然是过度开放导致的错误，那么收紧开放尺度是很自然的逻辑，无懈可击。但我认为，谷歌仓促收紧开放策略仍然是个错误。打个比喻。如果过度开放的政策是草率结婚，那么草率的封闭就是草率离婚。这么判断的原因很简单，谷歌把Android开放出去的那一天，Android已经不属于谷歌。谷歌没有认识到这一点，还以为Android只是自己的。

合作伙伴对谷歌封闭政策的反应加强了我的判断结论。经济观察报报道，国内第一家生产基于Android平台手机的设计公司创杨通信，近日已经被迫出售。创杨通信负责人给出的出售理由是，“因为不愿意甘当炮灰而选择放弃。”

按照目前Android3.0将统一界面的想法，未来的手机市场将出现毫无差异化的产品。这对于企业来说，几乎意味着不可避免的价格战。利润空间的微薄，导致合作伙伴生存环境恶劣。于是大量退出几乎是一种必然。

除了为合作伙伴找到新的利益空间，谷歌还将面临开放阵营精神层面的声讨，这对谷歌的挑战会更大。如果说谷歌为了自己竞争的私利利用了开放，赢得了名声。那么，谷歌不能一脚把开放踢开，他现在还需要为这种名声买单。

如果只顾自己收网，谷歌会被面临铺天盖地的道德谴责。谷歌，希望你准备好了，三思而行。

木桶效应就是指一个水桶无论有多高，它盛水的高度取决于其中最低的那块木板。这在选购手机的时候也同样适用。尤其是很多用户在购买手机的时候，都会专注于某一个参数，比如要求处理器主频要高达1GHz，但一部手机的整机表现是由多个因素组成，所以在购买手机的时候一定要从整体的角度上来看一部手机的性除了处理器主频以外，其实还有很多影响整机表现的元素，比如运行内存(RAM)、机身内存(ROM)、操作系统、厂商对系统的优化都会有所影响。不过在很多用户眼中，这几项却远没有处理器主频重要。而如果忽略这几项的话，可能买到一个主频很高，但整机性能却仍然不令人满意的机型。

用户在选机过程中切勿只关注一个硬件参数，这样很可能并不能买到一款理想的机型，就算买的手机主频再高，运行内存低的话仍然无法同时运行数个程序、机身内存小的话则无法把太多的软件安装到机器上，这对整机耗电和运行速度方面都有所影响、而厂商优化更是决定着一部手机的稳定性和部分运行速度。综上所述，大家在选购手机的时候一定要综合考虑一款手机的硬件规格。除此之外，也不要把硬件看的太过重要，就比如苹果iPhone3GS在硬件配置上并不出众，但却在操控手感以及软件资源上目前难有机型企及。更高分辨率能获得更为逼真细腻的显示效果，所以对于屏幕的分辨率绝大多数人都会偏向于分辨率更高的机型。但对于笔者所说的高分辨率未必是好事会有所怀疑。其实这里说的高分辨率“不好”更多是指采用非主流的高分辨率机型。在此前，就有几款“悲情”机型在分辨率上吃了不小的亏。

大名鼎鼎的HTCDiamond就是一款颇具代表意义的机型，Diamond上市的手机市场还处于QVGA时代、只有少数旗舰机皇采用WVGA这样级别的屏幕，由于HTCDiamond却采用了VGA这一过渡型的分辨率，而也正是因为这一点，Diamond很多软件都未有支持或无法完美运行，可谓是一个不小的遗憾。除此之外，曾经非常经典的

第67页/共72页附赠人生心语人生太短，聪明太晚人生太短，聪明太晚(1)

我们都老得太快

却聪明得太迟把钱省下来，等待退休后再去享受结果退休后，因为年纪大，身体差，行动不方便，哪里也去不成。钱存下来等养老，结果孩子长大了，要出国留学，要创业做生意，要花钱娶老婆，自己的退休金都被拗走了。人生太短，聪明太晚(2)

当自己有足够的能力善待自己时，就立刻去做，老年人有时候是无法做中年人或是青少年人可以做的事，年纪和健康就是一大因素。小孩子从小就告诉他，养你到高中，大学以后就要自立更生，要留学，创业，娶老婆，自己想办法，自己要留多一点钱，不要为了小孩子而活我们都老得太快却聪明得太迟，我的学长去年丧妻。这突如其来的事故，实在叫人难以接受，但是死亡的到来不总是如此。学长说他太太最希望他能送鲜花给他，但是他觉得太浪费，总推说等到下次再买，结果却是在她死后，用鲜花布置她的灵堂。这不是太蠢愚了吗？！等到......、等到.....，似乎我们所有的生命，都用在等待。人生太短，聪明太晚(3)

「等到我大学毕业以后，我就会如何如何」我们对自己说「等到我买房子以后！」「等我最小的孩子结婚之后！」「等我把这笔生意谈成之后！」「等到我死了以后」人人都很愿意牺牲当下，去换取未知的等待；牺牲今生今世的辛苦钱，去购买后世的安逸在台湾只要往有山的道路上走一走，就随处都可看到「农舍」变「精舍」，山坡地变灵塔，无非也是为了等到死后，能图个保障，不必再受苦。许多人认为必须等到某时或某事完成之后再采取行动。明天我就开始运动，明天我就会对他好一点，下星期我们就找时间出去走走；退休后，我们就要好好享受一下。人生太短，聪明太晚(4)

然而，生活总是一直变动，环境总是不可预知，现实生活中，各种突发状况总是层出不穷。身为一个医生，我所见过的死人，比一般人要来得多。这些人早上醒来时，原本预期过的是另一个平凡无奇的日子，没想到一个意料之外的事；交通意外、脑溢血、心脏病发作等等。剎那间生命的巨轮倾覆离轨，突然闯进一片黑暗之中。那么我们要如何面对生命呢？我们毋需等到生活完美无瑕，也毋需等到一切都平稳，想做什么，现在就可以开始做起。

一个人永远也无法预料未来，所以不要延缓想过的生活，不要吝于表达心中的话，

因为生命只在一瞬间。人生太短，聪明太晚(5)

记住！给活人送一朵鲜花，强过给死人送贵重的花圈，每个人的生命都有尽头，许多人经常在生命即将结束时，才发现自己还有很多事没有做，有许多话来不及说，这实在是人生最大的遗憾。别让自己徒留「为时已晚」的空余恨。逝者不可追，来者犹未卜，最珍贵、最需要实时掌握的「当下」，往往在这两者蹉跎间，转眼错失。人生太短，聪明太晚(6)

人生短暂飘忽，包得有一首小诗这样写：高天与原地，悠悠人生路；行行向何方，转眼即长暮。正是道尽了人生如寄，转眼即逝的惶恐。有许多事，在你还不懂得珍惜之前已成旧事；有许多人，在你还来不及用心之前

已成旧人。

遗憾的事一再发生，但过后再追悔「早知道如何如何」是没有用的，「那时候」已经过去，你追念的人也已走过了你。人生太短，聪明太晚(7)

一句瑞典格言说：「我们老得太快，却聪明得太迟。」不管你是否察觉，生命都一直在前进。人生并未售来回票，失去的便永远不再得到。将希望寄予「等到方便的时间才享受」人生太短，聪明太晚(8)

我们不知失去了多少可能的幸福不要再等待有一天你「可以松口气」，或是「麻烦都过去了」。生命中大部分的美好事物都是短暂易逝的，享受它们、品尝它们，

善待你周围的每一个人，别把时间浪费在等待所有难题的「完满结局」上。­找回迷失的生命­死亡也许是免费的─但是，却要付出生命的代价。­劝大家一句话：把握当下，莫等待。成功人生的十堂课

人生成功第1课

做一个终生学习的人，离开学校并不意味着学习就结束了。

学习可以成为一种生活方式，帮助你发挥最大的潜能。

我们从未停止学习，总会有新的，有趣的东西等待我们去发现。

学习新的技能可能让人感到有一点恐惧，但每当我们在个人学习上停滞不前时，我们都需要去学习新的东西。

积极地寻求支援和建议，突破停滞期。

第68页/共72页【大学课件】出品

版权归原作者所有!参加一些培训，进修，夜校－任何新的兴趣都将会有助于发展你的优势。

多看，多听，让你的头脑保持活跃。活到老，学到老。人生成功第2课

令自己感到沮丧的秘诀就是用空闲时间去烦恼自己是否快乐。所以不要费事去想它！摩拳擦掌干起来吧。你将热血沸腾，你会头脑清醒。很快，在你身体中的这种高涨的积极人生观将把烦恼从你的头脑中赶出去。

行动起来，忙碌起来。这是世界上最便宜的一种药，也是最好的一种。

人生成功第3课

在困境中寻找成功的希望

逆境是一所最好的学校。每一次失败，每一次打击，每一次损失，都蕴育着成功的萌芽，都教会我在下一次有更出色的表现。我再也不会逃避现实，也不会拒绝从以往的错误中获取经验，我不再因此而促成自己的失败。因为我知道，宝玉不经磨砺就不能发光，没有，我也不能完善自我。

现在我知道，灵魂倍受煎熬的时刻，也正是生命中最多选择与机会的时刻。任何事情的成败取决于我在寻求帮助时是抬起头还是低下头。无论何时，当我被可怕的失败击倒，在最初的阵痛过去之后，我都要想方设法将苦难变成好事。伟大的机遇就在这一刻闪现－这苦涩的根必将迎来满园芬芳！我将一直在困境中寻找成功的希望。人生成功第4课

没有人可以使你感到自卑

我选择自我感觉良好，这样我能更加开放地学习。如果人们给我负面的回应或是批评我做的事情，我不会认为他们所说的就表明我是一个“差劲的”人。我坚信自尊由我掌控，这让我毫无戒心地去听取别人的反馈，想看看是否有我可以学习的东西。

我们每天都有两种选择。我们可以感到自己很棒，也可以感到自己很差劲。难道有人会选择后者吗？

人生成功第5课

紧紧抓住梦想

我们每个人都有梦想。我们每个人都希望能发自内心地相信自已有一种特殊的天赋，相信自己能发挥重要的作用，相信自己能以一种特殊的方式感动他人，相信自己能够把世界变得更加美好。

在一生中，我们都曾经对自己渴望并追求的生活品质抱有憧憬。然而，对我们大多数人来说，这些憧憬在日常生活的成规和挫败中已经变得如此渺茫，以到于我们甚至不再努力去实现它们。对太多人来说，梦想已经远离，随之远离的还有塑造我们命运的意愿。很多人已经推动了坚定的信念，而正是坚定的信念为胜利者创造了优势。

我们所要做的就是重拴梦想，并实现梦想，让我们每个人都记住，并去运用深藏在自己身上的无限潜能。

人生成功第6课

毅力无法替代

世界上没有任何东西可以替代毅力。才干不可以，无所作为的能人十分普遍；天分不可以，碌碌无为的天才尽人皆知;教育不可以，受过良好教育的没落者更是随处可见。只要有毅力和决心，就是无所不能的。

毅力并不总是意味着永远坚持做同一件事。它意味着无论你做任何事情，你都要立刻全心投入，竭尽全力；它意味着先做艰苦的工作，再去期待随之而来的满足和回报。它意味着开心地工作，渴望更多的知识和进步。它意味着多打几个电话，多夏装几里路，多除草，早起床，意味着总是寻求更好的方式去做你在做的事情。毅力就是经历考验和过失的成功。人生成功第7课

驻足片刻闻花香

在现代生活的忙忙碌碌中，人们很少会停下来欣赏自然的美。

问问自己，你有多少次倾听过鸟儿的歌唱。你最近一次抬头仰望闪耀的星空又是在什么时候？

时光飞逝，人生苦短。不要忘记驻足闻闻花香。我们在急于谋生的过程中，往往忽视了我们生活的品质。多少次，你听见人们为这为那说“我忙死了。”多可惜啊！有一天，当他们真的找到时间能够驻足片刻闻花香时，可能已经太迟了。人生成功第8课

加入到微笑者和赞美者的行列来

当你对别人，别人也会对你报以，你自然会感觉很棒。即使他有对你报以，你也会感觉很棒，因为你认识到世界上最贫穷的人就是从不微笑的人，当你对那个人微笑，你立刻变得更加富有。

赞美也是这个道理。当你真诚地毛病抑或恭维一个人时，他将立刻受益，更喜欢自己。当你让别人感觉更好时，你自己也会感觉更好。

人生成功第9课让自己快乐。

调查表明，我们当中70%的人在生活中时间有临床性的抑郁现象。

如今我们有这么多的机遇，为什么我们还这么不快乐呢？

人们尝试各种东西：金钱，权利，事业，婚姻，离婚，酒精，摇滚甚至毒品，但我们大多数人只是想要得到一样东西－快乐。

快乐是人的一种自然的身心状态；我们只要去相信快乐，让自己感受快乐。

要宣称：我应当得到快乐。说出来，唱出来，喊出来。

优先考虑快乐，让快乐成为你最重要的事情。

对你所拥有的一切抱以感激之情吧。人生成功第10课我拥有无与伦比的想象力

现在我将通过这种神奇的力量得到我想要的。如果我害怕发表演讲，我就想象自己在公众场合无所畏惧，充满信心；如果我在病魔的煎熬，我就想象我以前健康的样子；如果我感到贫穷，我就想象我将要富有。

现在我明白了：人类惟一的限制就是想象力。我之所以没有成功，原因就在于我不知道如何使用我的想象力。现在，我精通这个技巧，我将从中受益。最大的回报将是成功和愈加快乐。你会管理时间吗?

如何让自己一天的时间不止24小时呢?这里有一些总结:你会管理时间吗?

（1）1.对目标、任务、会议等事件分别按优先级进行排序；2.从优先级最高的事物着手；3.和拖延做斗争，如果事情重要，从现在开始做；4.把大的、艰难的任务细分为小的、容易的部分；5.为自己创造一小时的宁静，哪怕这需要很强的意志力，或者有时不起作用；你会管理时间吗?

（2）6.找到一个隐蔽的地方，如图书馆或空闲的办公室；7.当你有重要的事情要处理时，学会对别人说“不”；8.学会委派别人做事；9.归纳相似的事情，把它们放在一起处理；10.减少例行事务：它们不值得花费过多时间。缩短低价值的事件。抛开没有价值的信件和文书工作。委派别人完成、减少或推迟优先级很低的任务；你会管理时间吗?

（3）11.避免完美主义。记住80/20定律；12.避免做出过多许诺。对你在有限时间内能完成的工作持现实态度；13.不要把时间表排得满满的，为自己留下一定机动时间应付突发事件；14.设置时间限制。例如，做某些决定时，不应超过3分钟；15.聚精会神地做手头的事情；你会管理时间吗?

（4）16.处理重要事情时，使用大块的时间；17.迅速处理困难的事情，等待和拖延不会使它们变容易；18.文书工作争取只处理一次；19.在行动以前，彻底地思索整件工作；20.第一次就做好。成功是一种习惯，习惯是需要培养的

成功是一种习惯，习惯是需要培养的（1）

1：找方法，不找借口。

2：遇到挫折时，对自己说“太棒了”。

3：不说消极的话，不落入消极的情绪，一旦出现立即正面处理。

4：随时用零碎时间做零碎的事。

5：写下来，不要太依靠脑袋记忆。

6：随时记录灵感。

7：守时

8：把重要的观念方法写下来，并随时提醒自己。

9：走路时，比平时快30%，肢体语言要健康，有力，不懒惰，不萎靡。

10：每天自我反省一次。

11：每天坚持一次运动。

12：开会坐在前排。

13：微笑。

14：说话时，声音有力。

15：说话之前，先考虑对方的感受

16：每天有意识或真诚地赞美别人3次

17:不要用训斥指责的口吻跟别人说话.

18:每天做一件分外事.

19:节俭.

20:恪守诚信,说到做到.成功是一种习惯，习惯是需要培养的（2）“好的习惯让人立于不败之地，坏的习惯则让人从成功的宝座上跌下来”。拿破仑希尔认为，

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联系QQ：910670854保罗·盖蒂的这句话很有道理。有一段时期，盖蒂抽烟抽得很凶。一天，他去法国度假的途中，在一个小旅馆投宿。晚上下起了大雨，地面特别泥泞，开了好几个钟头的车之后，盖蒂实在是累极了。吃过晚饭，他就回到自己的房间里，睡着了。但是清晨时分盖蒂突然醒了过来，他很想抽支烟，于是他就打开了灯，很自然的伸手去摸他一般都会放在床头的烟，但是没有。他下了床，到衣服的口袋里去找，也没有。于是他又在行李袋里找，结果他又一次失望了。他知道这个时候旅馆的酒吧和餐厅早就关门了。他想，这个时候把不耐烦的门房叫过来，实在是不可能。现在他唯一能得到香烟的方法就是穿好衣服，到火车站去，但是那还在6条街之外呢。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（3）看来情形并不乐观，外面还下着雨。他的汽车也停在离旅馆还有一段距离的车房里。而且，在他住店的时候，别人也提醒过他了。车房的门是午夜关，第二天早上6点才开门，现在能叫到出租车的机率也相当于零。显然，要是他真的迫切地需要一支烟，那么他只能在雨里走到黑暗中。抽烟的欲望不断地折磨着他。于是，他下了床，脱下睡衣，穿好衣服，准备出去。正在他伸手拿雨衣的时候，他突然笑了起来，笑自己傻。他突然觉得，自己的行为多荒唐可笑。盖蒂站在那里，心里不停地想着，一个所谓的知识分子，一个商人，一个认为自己有足够的智慧可以对别人下命令的人，居然在三更半夜要离开舒适的旅馆，冒着大雨走上好几条街去买香烟。盖蒂也是生平第一次注意到，他现在早就养成了一个坏习惯，那就是为了一个不好的习惯，他可以放弃极大的舒适。看来，这个习惯对他并没有什么好处，于是，他的头脑立刻就清醒了过来，很快他就做出了决定。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（4）他已经决定好了，就走到桌子旁边把那个烟盒团起来扔出去，然后重新换上睡衣，回到舒服的床上。心里怀着一种解脱，甚至是一种胜利的感觉，很满足地关上灯，合上了眼睛。在窗外的雨声里，他进入了一个从来没有过的深沉的睡眠。自从那个晚上之后，他再也没抽过一根烟，也再没有想过要抽烟。盖蒂说，他并不是想用这件事来指责那些有抽烟习惯的人。但是他经常回忆那天晚上的情形，他只是为了表示，按照他当时的情况，他差点被一种恶习俘虏。经常做一件事就会形成习惯，而习惯的力量是难以抗拒的。但是人类还有一种潜藏的缓冲能力，也不容小觑。既然人有可能养成一种习惯，那肯定他也有能力改掉这种习惯。还有些人说，奇怪的是，养成好习惯很难，但是一个坏习惯却在不知不觉中就已经形成了。但是，事实并非如此，这还要看一个人的毅力。不管怎么说，习惯终归是习惯，并没有合理的理论说坏习惯要比好习惯更容易养成。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（5）动作敏捷或迟缓只是个时间的问题，一个人要么习惯了准时，要么他就会习惯迟到。一个准时的人，总会体会到这种习惯给他带来的好处，无论是约会，会议，还是什么别的方面的承诺。如果别人请你吃饭，你迟到了，那就会给主人和其他的客人造成不便。你可能会因此而变得很不受欢迎，以后人家都不会再请你吃饭了。拿破仑希尔认为，对商人来说，准时是一项特别宝贵的资产。俗话说得好，“时间就是金钱”，这句话永远是正确的，现在这个时代里，这个原则比以前更加重要。现代企业的步调是一日千里，分秒必争。主管和高级职员的每日安排都是满满的，因为他们可没有多余的时间可以浪费，就像生产线不能耽搁一样。守信对生意人来说，是个难得的品德，最有希望成功的商人和公司，他们一定是准时接受定单，准时回复并交货，提供服务，准时付款，准时还债。如果等时间已过去了，订货还没到，那顾客下次可能就不找你了。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（6）节俭是另外一种可以养成的习惯，对天生节俭的人来说，这个习惯给他带来的成功的机会要比别人多。而习惯了节俭的人，他只知道在乎时就要注意节减开支和成本。受用一生的教诲：职场10只魔戒N条箴言

第１只魔戒第一条箴言：习惯仿佛像一根缆绳，我们每天给它缠上一股新索，要不了多久，它就会变得牢不可破。第二条箴言：人类所有优点都要变成习惯才有价值，即使"爱"这样一个永恒的主题，你也必须通过不断的修炼，变成你的习惯，才真正会化为你的行动。第三条箴言：很多好的观念、原则，我们"知道"是一回事，但知道了是否能"做到"是另一码事。这中间必须架起一座桥，这桥便是习惯。第四条箴言：科学家研究发现，一个习惯的养成需要２１天的时间，这２１天是个平均数，但习惯一旦养成就将终生受用。第五条箴言：任何一个习惯的培养都不会是轻而易举的，因此一定要遵循循序渐进、由浅入深、由近及远、由渐变到突变的原则。第２只魔戒第一条箴言：人生来是简单的，和文明打交道之后变得复杂了，陷入了某种复杂的旋涡中无法自拔，这些羁绊使人忘记人性的最终追求是平静、简单、自由。

第二条箴言：不经过复杂的简单是一种苍白，我曾经很人为地把金钱放在一边它却不安分，但今天当我驾驭了金钱，它就能很安分地呆在一边。第三条箴言：要锻炼一个人的财商，让他具有富人心态，首先他确实要学会放弃，同时也要学会克服，要学会走出很多障碍和阴影。第四条箴言：财商教育的根本目的是让人们获得自由，增加收入、减少财务问题的初衷是减少人们在金钱上的虚荣心和攀比风。第五条箴言：财商教育要解决人类面对金钱的两大问题：恐惧与贪婪。而为了生活稳定这个假象，人们常常沦为金钱的奴隶。第六条箴言：对于金钱，不是说你要成为它的主人，而是要做到与之和谐、平等，因为它反映的是你自己，所以对它要多一分宽容。第３只魔戒第一条箴言：成功的实质就是获得自由度，就是当你想当的人，做你想做的事，去你想去的地方，说你想说的话。第二条箴言：世上没有懒惰的人，只有没有目标的人。世界上最贫穷的人就是没有目标的人，因为连"梦想"都没有，还会拥有什么？第三条箴言：只有明确而具体的目标才可衡量，而只有可衡量的目标才可能达到。第四条箴言：付出就表示富有，索取就是贫穷，快行动起来，用行动表现你的"富有"。第五条箴言：心态、目标、时间管理三者的集中点就是在行动上，三者的表现特征也是"行动"。它们共同形成"知行合一"的统一体。第４只魔戒第一条箴言：人的一生就是不断地闯入一个又一个圈子并不断争取承认的过程。第二条箴言：在西方社会，特别是在北美，只有那些树立自我推销和成功意识的人，才有可能赢得机会与成功。第三条箴言：国际化人才不是一个地理意义上的概念，而是文化、心理层面的概念。是否是国际化人才取决于一个人的涵养、知识构成和思维模式。第四条箴言：创业的失败率是非常高的，在美国，每年有几十万人开公司，每年也有几十万家公司倒闭，所以创业只适合一部分人。第五条箴言：我时常摸着跳动的心口，数着那一下一下的脉搏，计算着我的生命长河究竟能卷起多少浪花。我要让短暂的生命，爆发出火花。第六条箴言：命运不是机遇，而是一种选择。命运从来都不是一种可以等到的东西，而是一件需要去完成的事情。第５只魔戒第一条箴言：不管你对成功如何定义，积极总是有价值的。积极不一定成功，但消极肯定失败。第二条箴言：成功学的最大的特征就是强调标准化和量化，把认为说不清楚、不可琢磨