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文档简介
高效液相色谱维护与保养液相色谱仪器使用及保养高效液相色谱的维护和保养专家讲座第1页色谱泵保养流动相要过滤惯用缓冲液时,停泵前要用水冲洗,并用水冲洗柱塞杆清洗孔拧紧排液阀时,不要太用力,以不渗液为准更换流动相时,要确保两种溶剂互溶性,如不互溶,要用一个中间溶剂过渡.
比如:使用无机盐缓冲液时,用前和用后均须用水过渡高效液相色谱的维护和保养专家讲座第2页流动相脱气流动相脱气目标使色谱泵输液准确输液均匀准确,而且脉动减小保留时间及色谱峰面积重现性提升提升检测性能预防气泡引发尖峰基线稳定,信噪比增加溶剂紫外吸收本底降低保护色谱柱降低死体积预防填料氧化高效液相色谱的维护和保养专家讲座第3页流动相脱气方法加热简单,如同抽真空一起使用,其效果很好。但轻易造成流动相组成改变抽真空同上,普通在溶剂抽滤同时,也有脱气效果超声波简单,但效果不理想。通惰性气体(普通用氦气)可保持连续脱气,多用于低压梯度在线脱气机可保持连续脱气,多用于低压梯度高效液相色谱的维护和保养专家讲座第4页色谱泵排气操作使用前,应先确认泵头内没有气体,如有气体要按以下步骤排气:将排液阀反时针转2-3圈,用10ml注射器抽,直到出液按以下方法之一将泵后面放空将U6KC阀打开,或717设在PURGE状态或,将参比阀打开或,把色谱柱摘下打开电源开关开大流速到6~9ml/min同时用10ml注射器从排液阀注入流动相直到泵后流速稳定无气泡为止高效液相色谱的维护和保养专家讲座第5页色谱泵运行注意用外部控制器与用泵面板控制区分有些型号外部控制器与面板不能同时用如需要面板控制,需要断开控制线或关闭控制器排气后色谱泵即可运行注意∶排气后,先设流速为0恢复排气时断开部分,如∶进样器、色谱柱如需要,恢复排气时断开控制线依据色谱柱不一样,逐步提升流速到设定值高效液相色谱的维护和保养专家讲座第6页液相色谱对流动相要求除色谱柱对流动相要求外,还有∶与检测器匹配脱气防止卤素离子(不锈钢系统)溶剂粘度预防细菌生长高效液相色谱的维护和保养专家讲座第7页流动相保留有机溶剂流动相:室温下密封,避光保留缓冲盐流动相:当日现配现用低温下密封保留,普通不超出3天预防长菌有机溶剂与水(缓冲盐)混配流动相:低温密封保留预防有机相挥发选取适宜容器高效液相色谱的维护和保养专家讲座第8页2星期1天1星期1小时新鲜配制5101520250分保留于聚乙烯瓶中超纯水测试条件水样:40mltraceenrichment@2.0ml/min色谱柱:C18反相柱(Waters)梯度:线性100%水-100%乙腈波长:254nm高效液相色谱的维护和保养专家讲座第9页1天1星期新鲜配制5101520250分保留于标准棕色玻璃瓶中超纯水测试条件水样:40mltraceenrichment@2.0ml/min色谱柱:C18反相柱(Waters)梯度:线性100%水-100%乙腈波长:254nm高效液相色谱的维护和保养专家讲座第10页检测器保养 如长时间不用检测器能够关掉紫外灯在4小时以上不用时,太频繁开关也不好不要让缓冲液长久停滞在检测池内用纯水冲洗示差检测器及荧光检测器注意流动池耐压,不要在后面加压高效液相色谱的维护和保养专家讲座第11页关于自动进样器针清洗PurgeInjector与NeedleWash洗针溶剂瓶(绿色塑料管)不要放在717plus上部,应放于717plus同一水平面洗针溶剂依据流动相不一样应有不一样:异丙醇?高效液相色谱的维护和保养专家讲座第12页液相色谱系统清洗与钝化普通采取30%磷酸作为清洗剂,用6M硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化清洗目标是去除不锈钢管路及系统内污垢钝化目标是使不锈钢管路内表面形成光滑均匀氧化膜高效液相色谱的维护和保养专家讲座第13页高效液相色谱维护与保养色谱柱使用及保养高效液相色谱的维护和保养专家讲座第14页测柱效–良好色谱试验习惯拿到一根新色谱柱时,先测柱效保留在新色谱柱上测得色谱图,并统计色谱测试条件定时检测柱效定时检测仪器谱带展宽高效液相色谱的维护和保养专家讲座第15页测柱效方法色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同Waters色谱柱均附有UseandCare说明书,可按说明书所述方法测定以下是Waters反相C18柱测定方法:流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min样品:50mgAcenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600μl丙酮进样量5μl检测波长:254nm高效液相色谱的维护和保养专家讲座第16页计算色谱柱柱效N理论塔板数计算公式:W s
方法Wtan 16 切线法Wh 5.54 半峰高W3s 9 3sW4s 16 4sW5s 25 5s高效液相色谱的维护和保养专家讲座第17页色谱柱正确使用及操作流动相转换尤其是GPC柱流速(压力)改变幅度:0.1ml/min凝胶柱(GPC及糖柱)温度改变幅度专用色谱柱∶样品及溶剂要求高效液相色谱的维护和保养专家讲座第18页色谱柱与仪器联接不一样企业色谱柱接头不一样。处理不妥时会造成严重后果:色谱峰展宽(死体积)致使柱效下降或渗漏处理方法:自制对应转换接头使用“通用”型接头(锥箍及螺母)这种锥箍在不锈钢管上是活动,即stop-depth长度可调。所以能够换接不一样色谱系统及色谱柱。从WatersPhaseSeparations企业能得到一些PEEK工程塑料接头,可用在各种类型色谱柱上。高效液相色谱的维护和保养专家讲座第19页色谱柱联接各种锥箍和管路接头长度示意图:高效液相色谱的维护和保养专家讲座第20页谱带展宽连接适当连接不妥因为色谱柱连接不妥引发谱带展宽,机械问题色谱柱安装及连接机械原因连接不妥,造成漏液高效液相色谱的维护和保养专家讲座第21页色谱柱在线保护装置给色谱柱提供物理保护除去样品及流动相中颗粒给色谱柱提供化学保护预防分析柱被化学污染装置在线过滤器自装填料保护柱预装保护柱高效液相色谱的维护和保养专家讲座第22页在线过滤器In-LineFilter,部件号WAT084560预防颗粒在色谱柱头累积优点:基本不影响柱效在需要高柱效分析时中惯用(如:氨基酸分析)可更换消耗品更换滤芯,部件号WAT005139(5/pkgs)更换垫圈,部件号WAT084567(10/pkgs)高效液相色谱的维护和保养专家讲座第23页保护柱可防止化学污染新型保护柱可提升整个色谱柱柱效,甚至可作为色谱柱使用保护柱选择:选取与色谱柱相同填料真正起到保护作用确保色谱分离结果高效液相色谱的维护和保养专家讲座第24页
使用保护柱延长色谱寿命实例:磺胺药品分析相同保护柱与色谱柱:第950次进样更换新SentryGuard保护柱:第951次进样使用配SymmetryC8保护柱色谱柱:首次进样色谱柱保护高效液相色谱的维护和保养专家讲座第25页色谱柱清洗对所做样品要有充分了解用对该样品洗脱能力最强流动相清洗硅胶柱普通方法先用甲醇洗去极性杂质用干燥二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化键合相柱(烷基)普通方法20倍柱体积:甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗若使用缓冲液,需先用不含盐水溶液清洗高效液相色谱的维护和保养专家讲座第26页色谱柱存放存放前处理除去杂质、缓冲盐适当存放溶剂防止色谱柱床干涸防止机械
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