金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座

3.了解测定血清谷丙转氨酶活性临床意义

1.掌握金氏法测定血清谷丙转氨酶活性原理

2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定详细操作方法

金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第1页

将α-氨基酸氨基经过酶促作用转移到α-酮基上，生成对应酮酸与氨基酸反应。催化这一反应酶称为转氨酶。转氨作用：金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第2页也称氨基转移酶，是一组催化氨基在-氨基酸与-酮酸之间转移酶。是一个细胞内酶，当细胞膜通透性增加或细胞死亡时释放到血液中。转氨酶金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第3页转氨酶广泛存在于机体各种组织中。在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）活性均较高。在正常新陈代谢过程中，血清内两种酶维持一定水平转氨酶活性（即正常值）。金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第4页转氨作用机制：金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第5页体内主要两种转氨酶？谷丙转氨酶（GPT）又称丙氨酸转氨酶（ALT）谷草转氨酶（GOT）又称天冬氨酸转氨酶（AST）肝脏心脏金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第6页谷丙转氨酶：催化谷氨酸和丙氨酸之间转化转氨酶，其结构式反应以下：金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第7页血清谷丙转氨酶活性测定临床意义

谷丙转氨酶广泛存在于机体各组织中。正常人血清中此酶浓度活性很低，肝细胞中该酶浓度活性极高，当肝细胞受损时此酶从细胞中释放血。所以测定血清ALT活性对于一些疾病诊疗和预后判断含有主要参考价值。（1）血清ALT活性增高：肝胆疾病、药品和毒物（2）ALT活性降低：磷酸吡哆醛缺乏症。ALT在临床上主要用于肝脏疾病诊疗金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第8页

酶活性：是指在要求条件下，单位时间内底物降低许或产物生成量。即酶反应速度。酶活性影响原因样品处理测定条件溶血抗凝剂存放时间温度pH时间底物浓度酶浓度金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第9页惯用谷丙转氨酶酶活性测定方法有：

1金氏法（King法）2

赖氏法（Mohun法）3改良穆氏法（Reitman-Frankel法）共同点：原理、试剂、操作步骤和作用时间相同。不一样点：在于单位定义和标准曲线绘制方法不一样，所以测定结果单位数值不一样。

在37℃,1ml血清与底物作用60min，生成1μmol丙酮酸为1个活性单位金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第10页第一步反应：金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第11页第二步反应：520nmCH3α-丙酮酸金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第12页2

标准曲线制备1

测定酶活性金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第13页试剂试管编号测定管对照管丙氨酸氨基转移酶底物液（ml）

0.5

0.5置于37℃水浴中预温5min血清（ml）0.1

置于37℃水浴60min——2,4一二硝基苯肼溶液（ml）0.50.5血清（ml）——

0.1各管混匀后，置于37℃水浴中保温20min0.4mol/LNaOH溶液（ml）

5.0

5.0混匀，10min后，30min内在520nm处比色，以对照管调零，读取测定管吸光度值。1测定酶活性取试管2支，按下表3-13操作表3-13金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第14页试剂试管编号1234562μmol/L丙酮酸标准液（ml）——0.050.100.150.200.25谷丙转氨酶底物液（ml）0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸缓冲液(ml)相当于丙酮酸实际量（μmol）0.1000.100.100.100.200.100.300.100.400.100.50各管混匀后2,4一二硝基苯肼溶液（ml）0.50.50.50.50.50.5各管混匀后，置于37℃

水浴中保温20min。0.4mol/LNaOH溶液（ml）5.05.05.05.05.05.0混匀，10min后，30min内在520nm处比色。以第1管调零，读取各管吸光度值。2标准曲线制备取6支试管，编号，按下表3-12步骤操作：表3-12金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第15页试管编号123456吸光度（A）丙酮酸含量（μmol）试管编号对照管测定管吸光度（A）表2丙酮酸标准曲线绘制表1金氏法测定血清谷丙转氨酶活性原始数据统计金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第16页1标准曲线图绘制

1）用坐标纸绘制标准曲线2）标明操作人、时间、仪器型号和图表名称金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第17页1.标准曲线图绘制1.标准曲线要过原点2.注明标准曲线名称:金氏法测定血清谷丙转氨酶活性3.注明横纵坐标名称及单位4.注明分光光度计型号金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第18页2血清谷丙转氨酶（ALT）活性计算1）将测定管吸光度值代入求出对应丙酮酸含量（μmol）2）依据丙酮酸含量计算每毫升血清中ALT活性单位数ALT活性单位数=生成丙酮酸量×10

在37℃,1ml血清与底物作用60min，生成1μmol丙酮酸为1个活性单位金氏法测血清谷丙转氨酶活性专家讲座第19页1、加样时候平行加样，降低操作误差，使得结果愈加准确。2、标准丙酮酸溶液加样一