彗星试验和斑马鱼胚胎发育试验检测饮用水源水的生物毒性

彗星试验和斑马鱼胚胎发育试验检测饮用水源水的生物毒性摘要：应用人外周血淋巴细胞彗星试验，小鼠睾丸细胞彗星试验以及斑马鱼胚胎发育试验，对苏南地区代表性饮用水源水的生物毒性进行了检测。彗星试验的结果表明，各水样中有机浓集物均能对人外周血淋巴细胞和小鼠睾丸细胞产生不同程度的DNA损伤。斑马鱼胚胎试验的结果表明，在所设剂量范围内，各水样均能对斑马鱼胚胎发育产生不同程度的影响。研究表明上述三种试验方法可有效地检测水中有机污染物的生物毒性。关键词：饮用水，有机污染物，彗星试验，人外周血淋巴细胞，小鼠睾丸细胞，斑马鱼胚胎发育试验ToxicityevaluationofdrinkingwatersourcesusingthecometassayandthezebrafishembryotestAbstract：Inthisstudy,thetoxicpotentialsoforganicpollutantsinsomerepresentativedrinkingwatersourcesofJiangsuProvincewereinvestigatedusingthecometassay(inhumanperipheralbloodlymphocytesandmousetesticularcells)andthezebrafishembryotest.TheresultsofthecometassayshowedthatDNAdamagesinhumanlymphocytesandmousetesticularcellswereinducedafterexposuretotheorganicextractsfromthewatersamples.Andthewatersamplescouldaffectthedevelopmentofzebrafishembryoalso.Theresultsofthisstudydemonstratethatallthesetestscanbesuccessfullyappliedtothetoxicitymonitoringprogramofdrinkingwatersources.Keywords：Drinkingwater，Organicpollutant，Cometassay，Humanperipheralbloodlymphocyte，Mousetesticularcell，Zebrafishembryotest饮用水与人体健康直接相关。自从70年代初美国环保局首次在水中发现氯的衍生物以来，水中有机物对人体健康的影响已日益引起人们关注[1]。由于此类有机物大都呈现低剂量长期暴露的特点，常规的理化分析不足以对水质状况作全面的评价，因此，有必要建立一种有效的测试方法评价水中有机物的对生物，特别是对人的毒性，以准确直观地反映水体对人体健康的潜在危害。 彗星试验是一种快速、简便、灵敏的检测单个细胞DNA断裂的技术，近年来由于其诸多优点正越来越多地在环境监测方面得到广泛的应用[2]。与传统鱼类急性毒性试验相比，斑马鱼胚胎发育试验由于其成本低、影响因素少，敏感度高等优点，大有取代前者的可能，同时其不同发育阶段可为化合物毒理学研究提供特殊的信息，使其在分析综合污水中的毒性物质、毒物作用机理方面具有独特的优势[3]。本文采用人外周血淋巴细胞彗星试验、小鼠睾丸细胞彗星试验以及斑马鱼胚胎发育试验，研究了不同水样的生物毒性，有助于为水体安全监测提供有效的测试方法和指标。材料和方法1.1试验材料健康人外周肝素抗凝全血，采自南京市中心血库。昆明种雄性小鼠，体重30克左右，由南京大学生命科学院动物房提供。常规喂养，观察一周后，健康者供试验用。斑马鱼，购于南京市花鸟市场。饲养产卵鱼于玻璃缸内，光周期为12hr/12hr，雌雄比例为1：2，水温26±1℃，DO>7mg/L，饲料为干饲料和红虫。试验用水为标准稀释水。1.2水样的采集与处理于2003年12月采集无锡小湾里水源厂源水，常州西石桥水厂源水及长荡湖湖心水样。其中，无锡小湾里水源厂水源地为太湖梅梁湾，常州西石桥水厂水源地为长江，长荡湖为常州金坛市拟用水源地。各采样点采样量均为100L。水样静置24hr，过滤去除悬浮颗粒，通过XAD-2树脂吸附柱富集，控制流速在30-40mL/min，N2排除水分，以甲醇、丙酮、二氯甲烷洗脱，洗脱液用氮吹仪在50℃条件下浓缩，吹干，再用二甲基亚砜（DMSO）溶解，定容至2.0mL，避光保存于-18℃冰箱中备用。1.3彗星试验1.3.1人外周血淋巴细胞彗星试验1.3.1.1人外周血淋巴细胞分离和染毒明胶法分离淋巴细胞并分装于微量离心管中，加PBS0.9mL及水样浓集物0.1mL，37℃染毒1hr。每个水样设三个剂量（即相当于原水样20mL、100mL、500mL/管）。染毒后离心弃上清，沉积细胞置4℃冰箱中备用。同时作DMSO溶剂对照。用苔盼蓝染色观察细胞存活率（>90%）。陷1.3.1.吼2虑券彗星试验及结象果评价软彗星试验方法猛参见终Singh跌报道德[洋4盏]费。铺好胶层的老玻片在冷细胞工裂解液裂接解天1下hr铅后，在碱性中电泳液鹰（蔽p锈H提＝舌13.纪0姐）静置，解蛙旋识30扑min培。调节电压方为雹25蛙V童，电流粥为饶100圈mA痕，电身泳宇1悔hr郊。以上各步骤场应在红光或黄莫光下进行，以临免产生额外巩的权DN较A笛损伤。电泳后悬，经中性缓冲饰液中和，遗在垒24h殊r兼内，每张玻片先以篮50µ到L惭溴乙锭秧（磁E们B尽）染色，荧光丘显微镜下观察孕并进行损伤评贝价。盘一个典型彗星迹包括头部和尾忌部，不同程度串损伤根据可见悬荧光的尾部与谢其可见头部的童比例大小而分著为猎0浪，丢1袖，炭2坦，筐3青，酿4堂五个等级。每喇张玻片观察询100疾个左右细胞，距计算细胞损伤液专用单位黄（量A御rbitra纱ryuni厘ts疼），方法如下己：妙Arbitr哀aryun字its归＝甘×N赖i岔，环其中羞i悉：损伤等级岗(0,1,皱2,3,4)建；弄N余i肤：词i楼级的细胞数欧[防5丛]促。锻采鲁用抢SPS故S群软件，以单因践素方差分析品（崭ANOV子A驴）准比较镇各剂量组与溶海剂对照间的损糖伤差异。考虑互到高剂量的染剥毒可能造蚕成塞DN肤A种的严重损伤，句从而使大量踏的旧DN暑A欠游离断片在电债泳过程中丢失灶而引起可座测络DN陈A织损伤的降低赏[毯6轻]鱼，而剂量过低舒可能使组间差食异难以充分表遗现，所以本文够以徒100mL脸/贺管这一剂量对刮各水样间的遗霜传毒性进行多芬重比较。组间朋的多重比较采神用发Dunca残n高检验法，显著槽性水平汽为械0.0热5超。搬滨超小鼠睾丸细胞迟彗星试验疑1.3.2.道1尊布小鼠睾丸细胞益分离和染毒冈小鼠睾丸细胞斧分离参考张遵坑真目[结7呀]吼的方法。将制啊得的睾丸细胞泄分装于微量离羽心管，倦加斜DMEM0.屿9m观L柴及水样浓集弊物氏0.1m哪L领，喇3屯4告℃挽染柴毒铜1h钢r伟。剂量设定同肆人血淋巴细胞沟彗星试验。染动毒后离心，沉乒积细胞魂置答4沸℃裂冰箱中备用。愤同时村作然DMS还O杨溶剂对照。铺栏胶前用苔盼蓝性染色观察细胞叠存活率（绍>90%构）。鹿1.3.2.渔2遭钟彗星试验及结蚀果评价矿陪志同人血淋巴细忠胞彗星试验。胖1.4朗斑马鱼（命D浩anior墓erio兽）胚胎发育试抢验步纽惹斑马鱼受精卵谜的收集和染毒秤受精卵的收集非和染毒参照核OECD药的操作指南尺[碌8寄]厘。选弓用雪2果4概孔培养皿，每驻孔加扇入制2m根L怪水样浓集物，琴放一枚受精卵舰。每张多孔板通为一个实验浓井度组，其暂中职4底个孔以曝气稀岗释水作为组内甚对照。每个水贞样碧设陈5铺个剂量组，同望时设空白对照逗。试验中作为抖溶剂谋的厕DMS错O叙浓度不高锈于炸0.2侄5络％。将多孔培环养皿放置在恒粘温光照培养箱毯中孵化，培养纳条件为庭26抛±寻1佩℃逢，光照周期膊1摧2hr晓/1教2h犁r影。各水样每个劳剂量组至少们作佣3根个平行。旬夕厘观察及结果评稿价拍定时在倒置显捧微镜下观察，蚀并记录胚胎发磁育情况。以斑饰马鱼胚塔胎惧96h鼠r穷能否正常孵化横为毒理学终点扣，各水样各剂摔量组与空白水役样间的差异煮以勾χ轻2择进行显著检验扩。试验结果牛2.1极固彗星试验迎乒遍人外周血淋巴裂细胞彗星试验柿紫各骑水样中有机浓害集物对人外周扒血淋巴细胞彗秘星试验的结果宾见闪表争1列。从表中可以娱看出，杠从表中可以看援出，各水样浓棵集物均能引起闪不同程度背的径DN葡A驳损伤，与溶剂钢对照相比均有柜极显著差夸异敬(P<0.0头1离)遮。随着剂量的愤加大课，书DN究A幼受损的程度也碑加重。爷以巧100mL莲/赵管这一剂量组紧进行多重比较宰表明，积对人血淋巴细滔胞估DN完A夏损伤程度为积小湾里扰水源厂源水、予金坛长荡湖湖刘心水杰样稀>跌常州西石桥水忽厂进水。忘表湾1唇西石桥水厂进煮水、长荡湖湖影心水样标和滑小湾里必水源厂进水隶（吨2003.1鬼2当）有机浓集物章对人外周血淋鸟巴细传胞牢DN屑A斜的损伤盈水样航染毒剂量（蜜mL戏/旷管）着细胞损伤分级筑（％）滤DN怎A它损伤专用单位舒（鼓AU侨）裁0攻1档2猪3敲4罢西石桥水厂进处水异20什10.07±寿10.18咸76.74±犁8.47滩13.20±质8.63拒0丽0桨103.13院±16.87怠**兆100沫0号66.44±永13.38阻31.43±孟13.18甘2.13±1具.07凳0绵135.69察±13.64嘴**是a优500稻0爹33.75±代9.84争54.87±园12.28运10.21±看7.38家1.17±1富.43钩178.80级±12.85叔**品长荡湖湖中心吵20类29.56±嘉4.79识49.18±轨2.14眨21.25±含3.73顶0复0而91.69±宰8.32**伍100孟0匹37.34±壶12.37悉46.46±窄10.36饥16.04±李4.04张0.16±0醋.35镰179.01根±15.48筑**衫b斧500玉0其14.54±弦6.86绪40.68±渔7.39漆41.32±嗓5.16讨3.46±1猾.50茄233.71诚±9.39*伏*屑无锡小湾里水绢源厂进水快20耍0.74±1惰.27叨86.61香±姐1.91衣11.68摔±惊0.17熄0.97±0刘.69台0刘112.89浑±0.66汇**道100犯0暮42.06团±赛6.19鹰34.93仓±纪8.17秃20.00慎±惊2.36晕3.01±1坊.30园183.95睡±5.57削**b狗500怠0窄1.61±1驾.21贫51.84霉±耍3.40逢41.35障±丛4.58呆5.20±1回.81畜250.14鹅±1.95回**期溶剂对照闹0系73.02±料3.20虹25.67±予3.16绸1.30±0江.70轻0时0笼28.28±属3.39闲注旱：疏1.甜蛾数据梨以跨mean±S通D绕表示，扁*端：纱P<0.05赵,帆**碍:P丽<送0.01;量2.约趋以程100mL尽/影管进行多重比番较，相同字母咱表示无差异，何显著性水平谱为谢0.0铺5忆。补2.1.喇2画小鼠睾丸细胞过彗星试验健表刃2牌西石桥水厂进积水、长荡湖湖绢心水样以及小穗湾里水源厂进码水澡（碍2003.1壳2上）有机浓集物稼对矛小鼠睾丸细胞激DN许A漏的损伤躺水样蓄染毒剂量（否mL倦/询管）什细胞损伤分级鹊（％）只DN近A赤损伤专用单位歉（累AU响）务0送1腐2盲3斩4撑西石桥水厂进逢水虽20挂36.44泽±5.44揉51.87亏±5.81逮11.69余±1.88爪0迅0全75.26促±5.71*邮*或100铲1.91搭±1.31他52.94标±6.45摆41.33离±4.03好3.82糟±2.53喘0爹147.05雹±6.26*妻*a桑500争0社13.10±斧3.78喊43.39±天2.19夸38.89±厘6.50青4.61±2但.54候253.00壁±8.47*眉*耐长荡湖湖心烈20泛25.93耀±闪1.75勿45.02型±研6.02股28.24坦±算6.32颈0.80窜±节0.76重0击103.91理±液8.43旅**载100白5.56册±佩1.79危17.24惭±侄2.57屯37.16内±带7.27价37.14带±甲3.87多2.91显±哑1.54蚀214.61级±鼠5.89伶**b简500驶－壶－寇－蒜－颤－劫－牛小湾里水源厂问进水懂20座15.34蚀±秒1.64园48.70性±贴2.52猪35.56鬼±垂3.50及0.40孕±困0.50券0劫121.03雾±屡4.76女**桌100垂0随16.93极±桃3.19产39.38向±宫3.55垄36.20跑±死4.02阀7.49爬±更1.23恨234.25功±性5.09臂**c盏500筋－预－允－芳－短－绩－乓溶剂对照踪0车51.74歇±放5.25赢47.53叠±结5.02傅0.74胳±博1.27荣0盗0餐49.00±章5.76冒注葬：邪1.洋费数据为以亩mean±S思D茅表示党，场彩*叔：余P<0.05王,挖**饮:P妙<尝0.01;直2.黎名以新100mL乘/邮管进行多重比项较，相同字母来表示无差异，礼显著性水平忍为趁0.0格5晓。嫩各水样中有机柄浓集物对喘小鼠睾丸细胞乖彗星试验当的结果见土表艇2嘱。君其中长荡湖湖挣心、小湾里水酸源厂进水高剂由量组关（门500mL洋/铲管）罢对留DN防A台损伤极高而难筒以准确计算，剂故不列出。继从表中可以看途出，权各水样浓集物插均能引起小鼠饺睾丸细胞不同斧程度郊的士DN批A埋损伤，与溶剂踢对照相比均有矿极显著差葱异嫂(P<0.0堪1政)命。随着剂量的疗加大成，欺DN避A色受损的程度也包加重。痒以始100mL请/茶管这一剂量组狼进行多重比较的表明，对杏小鼠睾丸细胞专DN腥A吊损伤程度小湾停里水源厂源陆水蚕>剩金坛长荡湖湖叛心水冶样墨>麻常州西石桥水序厂进水。马2.2茫精斑马鱼胚胎发链育试验浇试验结果见店表蝇3蛙。从壤表银3聪中可以看出，拴与空白对照相虽比，常州西石类桥水厂进水、碍金坛长荡湖湖残心水样和无锡虾小湾里水源厂劳进水分别在浓秧缩倍婆数充12川5标、护62.猴5骑和拿7.81狱2骆时能对斑马鱼挎胚眯胎提96h浴r鄙正常孵化率产伏生极显著影响堪（纺P<0.01六）惰。所以，各水悼样有机物对斑叶马鱼胚胎的影开响程度为无锡篇小湾里水源厂样进保水星>唉金坛长荡湖湖悦心水吗样古>杨常州西石桥水侨厂进水。浙表谣3互病小湾里进水、胖长荡湖湖心、最西石桥水厂进剧水水样各剂量岗组对斑马鱼胚遗胎幻96料h冰正常孵化早率（％）的影惜响铸剂量较（浓缩倍数）码7.8125佳15.625惑31.25森62.5厦125种小湾里进水条66.67±杠6.24锐**甲65.00±桶7.07系**孝36.67±竭6.24胳**桑0.00丛**佣0.00绢**灰长荡湖湖心悬93.33±肥4.71合85.00±灌7.07框81.67±形10.27粘0.00马**飘0.00湖**疲西石桥进水通85.00±亏14.72圈78.33±掀6.24惊78.33±交11.79臂90.00±易4.08旺38.33±敞28.96澡**种空白对照伏87.73波±牙9.03隔注：孵化率（捡％）铁以灰mean±S茅D窝表示霉；再**:P<0饮.013讨论叔根堵据终2002配江苏省环境状恳况公报，长江亡江苏段状干流水质总体君较好，水质符负合地表水环境舞质量何II配类标准。太湖靠湖体水质总体仍劣框于陵Ⅴ晴类。脊长荡湖为太湖秋流域第三大湖芬泊，目前水质嘱基本满授足绒Ⅲ咏类标准，且近聪年来在逐渐变式差。从本研究罗可以看出，彗库星试验（包括旧人外周血淋巴卡细胞和小鼠睾芦丸细胞）和斑杠马鱼胚胎发育翅试验的试验结绿果均与各水源挑地的水质状况覆基本一致，证御明上述三种试扶验方法可有效饰地检测水中有饿机污染物的生溪物毒性。仓翠蕉自肚198汪8杂年蔑Sing暗h峰提出碱性电泳泳法以来，各国忘对彗星试验的跳应用研究几乎咬呈指数式增长欢，在遗传毒性医研究、临床应荡用猛、星DN抛A天修复研究、环萍境生物监测、齐人群监测等领坏域得到广泛应茅用罩[膜9咐]某。人血淋巴细非胞是彗星试验亏最常用的生物辜材料之一，应誉用也最为广泛妙。餐Rajagu三ru铺等将人血淋巴券彗星试验应用泳于受污染地表吊水的检测，表房明其在环境评屠价中有良好的划应用前景陵[愈10腿]氏。本实验室曾散利用其评价扬肢中市地表水的衔污染状况夏[填11收]哲。本研究表明秘，各水样有机喉浓集物对人血月淋巴细胞存在淡遗传毒性。犁研究有机污染概物对小鼠的毒协性可以很好地肚反映其对哺乳肤动物，特别是特对人的危害状旁况，从而及时汤地预报对人类派的危害。同时趴，研究发现生郊殖细委胞倦DN艰A矩的损伤可导致跌染色体异常、匪流蕉产、畸形、遗堵传病以及下一陵代对癌症易感收性的增加等痕[1挥2秋]绢。而小鼠睾丸柔细胞易于分离众，且具有一定缎的代谢活性作厅用，适于评价条化合物对生殖旱细胞的遗传毒魂性衫[剧7纳]羡。摇有研究臭表明，睾丸是啊有机污染物的族作用靶器官，喝有机提取物可笋通过递血马—桥睾屏障。光镜罗观察显示有机泪污染物对染色旬质有损害绘[纪13富]粗。本研究也表堪明饮用水源水荣中存在的有机公污染物能对小丹鼠睾丸细罩胞枕DN呜A侨产生损害作用三，存在遗传毒夏性。同时，在秩其中两个水样默高浓度充组限DN民A痒损伤极为严重彩，甚至出现了啦彗星头、尾部高分离的情况，壮这表明水样中艘污染物可能已扰引起睾丸细胞罩的心凋亡，存在细垦胞毒性。快研究也表明，侧与人血淋巴细钱胞相比，有机肉浓集物对小鼠州睾丸细胞造成巴的哈DN狠A雁损伤更为严重宫。这可能是因壮为睾丸细爱胞股DN符A全比人血淋巴细泳胞竹DN乔A哪对有机物更为胸敏感。吴坤等援应用小鼠整体伴试验对自来水雅中有机污染物籍潜在危害进行拉评价时发现生份殖细胞比体细谢胞更为敏感惜[拌14险]虫。另一方面，艰彗星试验结果松显示对照组细块胞按DN限A个存在着较大损修伤（相对于人湾血淋巴细胞彗叛星试验而言）锡，这可能也是煎造成其各水样肤各剂量组习其友DN找A肾损伤更为严重勿的原因，所以汽有必要改进小疾鼠睾丸细胞的塑分离和培养方鸽法。促在斑马鱼胚胎莲发育试验中，默毒理学终点的杂选择主要考虑捡以下方面：可窃衡量、毒理学绒上明显，以及发操作的简易性小。试验中我们稍选食用也96h杠r肥能否正常孵化被作为毒理学终驴点。同时，在早试验中我们观盖察到多种不同阵的发育异常，勉如与致死性相胸关的卵凝结、犯发育停止等，筐以及致畸性相壶关的如体轴的丑畸形、卵黄囊奔吸收迟缓和多备种水肿等。这蹄其中，在小湾宜里进水和长荡备湖湖心水样的旬高剂量组，发衡育异常胚胎多棉数在心脏和卵返黄囊部位有明答显水肿。一般款而言，致畸性罢毒理学终点比针致死终点更为崖敏感，有研究慌表明凑，但Europe鸭anmin卖no理w仆在毒作用下也吼显出相似的毒扩理学终点考[芦15屯]躲。讲因此，脊椎变弄形、卵黄囊吸恢收迟缓和水肿纺的形成可作为厕鱼类早期阶段恭对毒物的非特陕异性反应，值弟得进一步研究径。资在毒物暴露过护程中，胚胎的胶卵膜具有重要侵作用。卵膜随洒发育时间的改闪变以及毒物性戴质的不同其通缝透性也有较大毫的变化，同时因考虑到胚胎的筛代谢系统没有唐发育完全，所笛以毒物和酶系址统的相互作用届在实验中难以犹完全体现。条在发育生物学滩和分子遗传学灵领域，应用斑俗马鱼胚胎已有匆大量研究成果轨发表，对探讨稠污染物的致毒痕机理很有帮助狠。这一优势特我别有助于测定虏混合性工业污渐水的毒性，具烫有广阔的发展辰空间。目前，丙发达国家还是骂把主要注意力推放在测定新化幻学品的毒性方罢面，在污水方誉面的工作尚在松尝试阶段，而峡且发展较慢。须Strma库c沫等日[势15浸]疮,Gell俗ert很和专Heinri避chsdor叨ff明[鸭16杏]恩的研究都表明催斑马鱼胚胎发揭育试验是合适编的毒性监测手宝段。而解决各改种工业废水和肺生活污水所造帜成的环境问题省已经成为我国趁环保事业的当中务之急。本研限究证明，斑马外鱼胚胎发育试牢验可用于对饮记用水源有机物薄污染的监测。参考文献：播朱惠刚归.集水中有机致突锤变物综合评价兄指标探讨巧.麻上海环境科学圈，煮1995荷,赏14圆(增10悄):夺44-49锻Rojas迷E局，滚Lopez腾MC柏，烫Valver旷deM妈.Sing技lecel恩lgel糕electr殿ophore滴sisas州say:m搂ethodo惑logya辫ndapp吩licati屑ons.还JChr线omatog动rB,1总999,72寄2:22弊5鲁–向254灌朱琳，史淑洁量.链斑马鱼胚胎发味育技术在毒性系评价中的应用询.啦应用生态学报丢，侧200误2荷，删1蹄3漂（流2检）侧：谷252-25继4尺Singh芳NP,M绍cCoyM拦T,Ti扇ceRR坏,滋etal.协Asim灾plete路chniqu炉efor给quanti逃tation殊oflo芹wleve肆lsof尤DNAda制magei胖nindi雀vidual蛾cells贿.Exp床CellR汉es,19伤88,17喷5:184-类191朗Collin贸sAR,思MaA睬G,Dut幕hieS如J.The给kinet吊icsof梳repai陡rofo叠xidati牵veDNA束damag葛e(str仗andbr印eaksa伙ndoxi亮dised权pyrimi于dines)际inhu写mance叨lls.M半utatR金es,19装95,336段:69-77买Devaux葵A旱,Peso爪nenM,迫Monod烈G.Al稳kaline渔comet骡assay伴inra芝inbow路trout爸hepato垦cytes.欠Toxic剧olin溉Vitro,臣1997,武11:71~仿79畜张遵真，衡正杰昌，廖艳等．咐彗星试验检测夜间接诱变剂对宫小鼠睾丸细胞今的香DN捷A霸损伤控.划拴癌逝变舰·勉畸遵变识·贷突变叮,率2001欺,隐13婆(晌1旺):4-7刮OECD.离Fish,倘short-璃termt另oxicit凤ytest额onem瘦bryoa予ndsac使-frys栽tages.统OECD纲Guidel纱inefo聋rTest狸ingof筋Chemi脾cals,潮OECDT壳G212,飘Paris,铁1998浙TiceR歼R下，您Agurel草lE纲，看Anders业onD,绕etal倍.颂Single丝cell壶gel/co存metas役say:g箩uideli置nesfo网rinv哑itroa炸ndinv蓬ivoge厦netic会toxico发logyt泡esting旱.镇Envir宰onMol庸Mutag惭,2000帜,35:2质0嫁6惠–局221皆Rajagu录ruP,达Vidya膊L,Bas尼karase黄thupat雅hiB,烟etal旬.涌Genot宅oxicit淹yeval惕uation殖ofpo进lluted会groun半dwate移rinh粒umanp弹er