流式细胞术应用概述分析解析

流式细胞术应用概述分析解析第1页/共103页流式细胞术应用概述流式细胞术系列讲座之——概述第2页/共103页流式细胞术的一般介绍流式细胞术在临床检测和科研中的应用免疫学检测和科研应用肿瘤学检测和科研应用凋亡分析血液学检测和科研应用其它应用主要内容第3页/共103页

流式细胞术的一般介绍第一部分第4页/共103页什么是流式细胞术？

流式细胞仪(FlowCytometer):

是集合光电子物理，光电测量技术，液流技术，计算机技术等现代高科技技术为一体的细胞测量和分析仪器。流式细胞术(FlowCytometry，FCM):是应用流式细胞仪，对处于快速流动液体中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速测量和定量分析，以及分选的技术。第5页/共103页流式细胞仪特点多参数测量和分析（散射光和荧光）；快速测量和分析每秒可达1000-10000个细胞分选纯度可达99%以上。获取的数据分析结果更具有统计学意义；通常测量的对象如各种细胞细胞必须处在单个细胞悬液中。此外，也可测量微生物等生物颗粒，或者工合成微球非生物颗粒第6页/共103页FACSCalibur特点：光路调节系统固定自动化程度高操作简便使用寿命长配备1-2根激光细胞分选速度慢，主要用于细胞分析临床型（台式机）第7页/共103页流式细胞仪可检测的细胞参数细胞结构细胞大小细胞颗粒性程度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量细胞功能细胞表面蛋白抗原细胞胞浆内蛋白性抗原细胞内细胞因子细胞增殖细胞内钙离子浓度第8页/共103页流式细胞仪分析数据常见图形：

（二维）点阵图(DotPlot)适用于：双参数分析第9页/共103页流式细胞仪分析数据常见图形：

直方图(HistogramPlot)适用于：单参数分析仅需要观察某个荧光强度的变化第10页/共103页流式细胞仪分析图谱SSC（侧向散射光）--反应细胞内颗粒多少FSC（前向散射光）--反应细胞大小散射光信号第11页/共103页

特征信息－荧光（Fluorescence）信号FL1（第一荧光）-FITC(异硫氰酸荧光素）FL2（第二荧光）-PE（藻红蛋白）FL3（第三荧光）-PerCP,PeCy5等PL4（第四荧光）-APC（藻青蛋白）流式细胞仪分析图谱双色直接染色第12页/共103页设门：选择要分析的细胞群体设定阴性、阳性范围第13页/共103页

流式细胞术在临床检测和科研中的应用第二部分一、免疫学检测和科研应用第14页/共103页1、细胞表面分子标记

（以淋巴细胞亚群检测为例）第15页/共103页原理人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为三大类：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK自然杀伤细胞。T淋巴细胞特异性标志为CD3，包括CD4＋和CD8＋T细胞两个亚群；B淋巴细胞特异性标志为CD19；NK自然杀伤细胞表达CD56或CD16，并且不表达CD3利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，即可以把淋巴细胞区分为各种亚型。进而得到各亚群的比例。第16页/共103页

T淋巴细胞淋巴细胞亚群检测：

Tcells,Tsubsets,NKcells,Bcells第17页/共103页淋巴细胞亚群及功能T淋巴细胞(CD3+)名称功能CD3+CD4+辅助性/诱导性T细胞(Th/Ti)辅助和诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD4+CD29+CD3+CD4+CD29-辅助性T细胞(Th)诱导性T细胞(Ti)辅助细胞免疫和体液免疫诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD8+抑制性/杀伤性T细胞(Ts/Tc)抑制免疫反应/杀伤异源细胞CD3+CD8+CD28-CD3+CD4+CD29-抑制性T细胞(Ts)杀伤性T细胞(Tc)抑制细胞和体液免疫细胞毒性T细胞CD3+CD4+CD8+活化的T细胞在T细胞恶性增生时升高CD3+CD4-CD8-表达/T细胞受体(TCR/)CD4+/CD8+比值CD45RA+CD45RO-幼稚的/静止的T淋巴细胞当免疫系统没有能力更新辅助性或抑制性/细胞毒性淋巴细胞的祖细胞时此细胞亚群较低CD45RA-CD45RO+记忆性T淋巴细胞病菌感染时升高,但在慢性病毒感染,如HIV患者中降低CD45RA+CD45RO+活化的T细胞,感染时升高感染时升高CD4+CD25+CD127-/FoxP3+调节性T细胞（Treg)具有免疫抑制作用第18页/共103页CD4+CD25+CD127-Treg检测第19页/共103页活化T淋巴细胞名称功能CD3+HLA-DR+活化T细胞CD4+HLA-DR+活化的辅助性/诱导性T细胞CD8+HLA-DR+活化的抑制性/杀伤性T细胞CD4+CD25+活化的辅助性/诱导性T细胞CD8+CD25+CD8+CD38+HLA-DR+活化的抑制性/杀伤性T细胞在病毒感染的患者中增加;其增加意味着HIV患者的预后较差B淋巴细胞(19+)CD19+CD23+活化的B细胞过敏患者中升高CD19+CD5+在自身免疫性疾病中升高CD19+CD5+CD23+慢性B细胞白血病及单克隆B淋巴细胞NK细胞CD3+CD(16+56)+自身免疫性疾病时降低,而病毒感染时升高CD3+CD57+CMV(巨细胞病毒)感染的强烈征兆淋巴细胞亚群及功能第20页/共103页淋巴细胞亚群与疾病疾病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫性疾病系统性红斑狼疮类风湿性关节炎自身免疫性溶血性贫血重症肌无力免疫缺陷病爱滋病病毒感染传染性单核细胞增多症慢性活动性肝炎活动性肝硬化肿瘤消化道癌,肝癌,肺癌再生障碍性贫血粒细胞减少症第21页/共103页淋巴细胞亚群检测意义疾病机理研究

疾病辅助诊断移植后免疫检测治疗方案的确定及疗效评价CD25高于正常值5-10%,表明即将或已发生排斥CD4/CD8比值下降提示并发凶险感染

<0.2时,必须停用免疫抑制剂CD2+HLA-DR+增加5-10%,且不伴有CD25的增加,提示巨细胞病毒感染慢性疲劳,感染后综合征,纤维肌痛,类风湿性关节炎,过敏等

疾病预防第22页/共103页淋巴细胞亚群检测意义

Control（n=20)ActiveSLE(n=17)StableSLE(n=13)CD370.4±5.8765.8±10.968.5±8.95CD435.0±5.7022.1±4.15**34.5±4.23CD827.9±5.7345.7±9.58**32.7±9.01CD4/CD81.27±0.140.43±0.12**1.05±0.26*NK17.8±5.484.37±3.31**7.59±5.01**鉴别活动期和非活动期SLE第23页/共103页2、胞内分子流式细胞术检测

（以Th1/Th2细胞因子检测为例）第24页/共103页Th1/Th2细胞第25页/共103页Th1/Th2细胞Th1型细胞因子介导细胞免疫反应引起迟发型过敏反应、巨噬细胞活化、局部炎症刺激来源：病毒、某些细菌Th2型介导体液免疫反应引起B细胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、促进I型变态反应（过敏反应）刺激来源：多细胞寄生虫、过敏原第26页/共103页Th1/Th2细胞PMA+Ionomycin刺激4-6hr第27页/共103页流式细胞术检测胞内细胞因子

新鲜分离PBMC

加PMA＋Io刺激后6h测定胞内细胞因子IL-4和IFN-g

第28页/共103页Th1/Th2失衡相关疾病－胞内寄生的病原生物感染性疾病

Th1细胞及其细胞因子⇑－保护性免疫Th2细胞及其细胞因子⇑－发病，如结核病，或慢性感染－变态反应性疾病Th2细胞及其细胞因子⇑－过敏性哮喘等（IgE⇑）－自身免疫性疾病Th1细胞及其细胞因子－常为炎性增强的标志

Th2细胞及其细胞因子－免疫耐受/抑制有关

－肿瘤免疫Th2细胞及其细胞因子⇑－肿瘤发病，第29页/共103页Th1/Th2细胞检测意义疾病治疗发病机制研究使用Th1和Th2相关的细胞因子

IFN-治疗麻疯病

用抗Th1和Th2相关细胞因子或其受体的抗体

抗IL-4抗体治疗真菌和寄生虫感染

使用调节Th2/Th2细胞因子平衡的药物:

萨力多胺(Thaliodomide)治疗巨细胞动脉炎疾病治疗监测第30页/共103页二、流式细胞术在肿瘤学中的应用肿瘤发生发展第31页/共103页1、DNA倍体和细胞周期分析第32页/共103页细胞周期和DNA倍体分析的原理G0/G1期DNA含量为2CS期细胞,DNA含量开始增加,>2CG2/M期细胞,DNA含量开始增加至4C1、正常细胞DNA含量稳定在2C水平2、性细胞DNA含量为1C3、处于增殖期至分裂期细胞由

2C增加至4C4、凋亡细胞DNA断裂,含量<2C第33页/共103页细胞经荧光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式细胞仪测定细胞DNA含量，可得到细胞周期三个时相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（％），可以反映细胞的增殖状态和非二倍体（异倍体）的DNA含量Diploid:100.00%DipG1:54.38%at46.90DipG2:15.91%at91.61DipS:29.71%G2/G1:1.95%CV:5.23G0/G1SG2/M第34页/共103页Diploid:64.50%DipG1:92.45%at49.24DipG2:2.30%at98.48DipS:5.26%G2/G1:2.00%CV:3.21Aneuploid1:35.50%

An1G1:97.69%at58.53An1G2:0.00%at123.89

An1S:2.31%G2/G1:2.12%CV:3.14DI:1.19第35页/共103页可检测标本新鲜的血液、骨髓、体液、灌洗液、手术活检、细针穿刺物等。冰冻或固定（酒精或甲醛）保存的组织常规固定/包埋用于组织检查的样本（蜡块）。通常最好的结果来自新鲜或冰冻的标本。蜡块包埋的标本需进行特殊处理第36页/共103页意义70%人类癌症中存在着异倍体或细胞周期的改变1.RossJS.DNAPloidyandCellCycleAnalysisinPathology.NewYork:Igaku-Shoin;1996:47-60DNA倍体和S期比例--指导治疗[2]卵巢癌，乳腺癌，结肠癌，子宫内膜癌，原发部位不明的癌症--早期(I/II期)DNA倍体和DNA指数--预后长期和无病生存期[2]卵巢癌--晚期2.TheRecommendMedicareNationalCoveragePolicyforFlowCytometry.HCFAWebsite,1999第37页/共103页2、肿瘤相关基因编码蛋白检测第38页/共103页P53乳腺癌

与病理学分级有关,并与乳腺癌的淋巴结转移显著相关大肠肿瘤

早期发现大肠癌胃癌

与预后相关肝细胞癌

与组织分级,肿瘤预后,转移及肿瘤大小密切相关第39页/共103页Bcl-2Bcl-2在正常组织中的表达

造血系统细胞—淋巴,单核细胞等受激素或生长因子调节的腺上皮—前列腺上皮,子宫内膜等干细胞或增值细胞—皮肤的基底细胞,肠上皮寿命长的分裂细胞—神经元胚胎组织Bcl-2在肿瘤组织中的表达

肾脏肿瘤—肾癌,肾盂乳头瘤,Wilms瘤,肾嗜酸细胞瘤前列腺癌

B细胞性淋巴瘤乳腺癌(43%)

甲状腺癌第40页/共103页nm23nm23与多种肿瘤的转移及预后相关

肝细胞癌甲状腺肿瘤乳腺癌结肠癌肉瘤第41页/共103页CD44(CD44s/CD44v)第42页/共103页3、Cyclin(细胞周期蛋白)检测第43页/共103页P-gp在肿瘤组织中的表达

乳腺癌,膀胱癌,胃癌,食管癌,卵巢癌,前列腺癌等化疗前高表达化疗后高表达

肾细胞癌,结肠癌,肝癌,肾上腺皮质癌,胰腺癌等化疗前低表达

非何杰金氏淋巴瘤,成神经细胞瘤,急性髓白血病等化疗不敏感化疗敏感化疗不敏感4、肿瘤多药耐药性(MDR)检测第44页/共103页4、凋亡检测详见下一部分第45页/共103页三、流式细胞术分析凋亡第46页/共103页

细胞凋亡与疾病的关系——

该“死”的细胞不死，不该“死”的细胞却死了，也就是说无论凋亡过度或凋亡不足都可以导致疾病的发生。细胞凋亡不足：肿瘤，自身免疫病细胞凋亡过度：心肌缺血，心力衰竭，神经元退行性疾病，病毒感染不足与过度并存：动脉粥样硬化凋亡与疾病第47页/共103页细胞凋亡过程在凋亡诱导因素的作用下线粒体的膜电位改变caspase家族激活磷脂酰丝氨酸外翻DNA断裂形成凋亡小体第48页/共103页凋亡的检测方法1.形态学检测光学显微镜

荧光显微镜(Hoechst33342，Hoechst33258,DAPI)电子显微镜

2.磷脂酰丝氨酸外翻分析（可用FCM）3.线粒体膜势能的检测（可用FCM）4.DNA片断化检测（可用FCM）5.TUNEL法（可用FCM）6.Caspase-3活性的检测（可用FCM）7.凋亡相关分子的检测（可用FCM）促凋亡分子:Bax,Bcl-Xs,Bak,Bad,Bid等抑凋亡分子:Bcl-2,Bcl-XL和bcr/ablkinase等8.相关信号通路分子的检测（可用FCM）第49页/共103页1.磷脂酰丝氨酸外翻分析

(ANNEXINV标记法)【原理】细胞凋亡的早期，磷脂酰丝氨酸（PS）外翻；Annexin-V能与PS高亲和力特异性结合；碘化丙啶(propidineiodide,PI)可以区分活细胞和死细胞。第50页/共103页结果分析第51页/共103页结果分析-优第52页/共103页结果分析-差第53页/共103页如何获得好的结果细胞状态要好；细胞处理的火候问题：药物浓度、时间需要摸索；染色后，不能固定细胞，应尽快检测。第54页/共103页2.线粒体膜势能的检测【原理】线粒体跨膜电位的下降，是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡则不可逆转。线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。常用染料有：Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6（3）]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazolcarbocyanineiodide[JC-1]、Tetramethylrhodaminemethylester(TMRM)等

第55页/共103页结果分析第56页/共103页3.DNA片断化检测通过PI染色，分析亚二倍体峰（凋亡峰），方法同“DNA倍体分析和细胞周期分析”第57页/共103页4.TUNEL法流式也能进行TUNEl检测，其检测原理与经典TUNEl原理基本一致。利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端，从而使凋亡的细胞具有荧光。流式检测后，可以进行精确的计算凋亡百分比。这一点，经典TUNEl是做不到的。经典TUNEL法原理第58页/共103页结果分析第59页/共103页结果分析结合细胞DNA含量分析效果更佳第60页/共103页5.Caspase-3活性的检测Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。用荧光标记的抗活化Caspase-3的抗体进行胞内染色，可以通过流式细胞术分析其活性在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降第61页/共103页四、流式细胞术在血液学中的应用第62页/共103页1、流式细胞术白血病免疫分型第63页/共103页白血病细胞起源、分化和生物学行为不同，构成了白血病的异质性，因此急性白血病的全面、正确分型是准确、及时治疗的前提。

急性白血病的分型基本上分三个阶段：FAB分型(1976)(morphology，M)MIC分型（1986）(morphology，M)(immunology，I)

(cytogenetics，C)

WHO分型(2001)（MICM）(morphology，M)(immunology，I)

(cytogenetics，C)(molecularbiology,M)

急性白血病分型历史第64页/共103页急淋（ALL）急性白细胞FAB分型急非淋（ANLL）急性髓细胞白血病(AML)

L1型L2型L3型M0:微分化型髓系白血病；

M1：未分化的原粒细胞白血病；M2：部分分化的原粒细胞白血病；M3：急性早幼粒细胞白血病；M4：急性粒、单核细胞白血病；M5：急性单核细胞白血病；M6：急性红血病或红白血病；M7：急性巨核细胞白血病。第65页/共103页MIC分型以形态学为基础、免疫学和细胞遗传学作补充，相互结合，使分型更趋精确。其中免疫学分型是另外两种方法的重要补充。MIC分型形态学

(morphology，M)：传统的骨髓片检查免疫学

(immunology，I)：免疫组化流式细胞术细胞遗传学

(cytogenetics，C)：染色体分型第66页/共103页利用荧光素标记的单克隆抗体鉴定细胞表面或细胞内的免疫标志，可准确反映白血病细胞的所属系列（T\B\髓）及分化程度。检测分析时，首先根据CD45表达强弱和细胞颗粒度，在CD45-SSC图中确定幼稚或异常的细胞群体。然后分析检测各种标志的表达情况及其阳性率。白血病免疫分型原理第67页/共103页流式细胞术白血病免疫分型优点

细胞形态学，免疫学和细胞遗传学三者相结合是当今公认的白血病分型方案，其中免疫学分型是另外两种方法的重要补充。流式细胞仪可方便、快速、准确地完成白血病的免疫学分型，其意义在于：准确寻找和计数幼稚或异常的细胞群体；用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病；形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL），但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记；混合性白血病；帮助确定髓系白血病所属类型；慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤；微小残留白血病。

第68页/共103页第69页/共103页CD4、CD8、CD61、CD56、CD38本实验室现有的白血病免疫分型抗体组合CD3\CD79a\MPO可以确定白血病分别属于T/B/髓系表面染色胞内染色T系：CD2、CD5、CD7B系：CD10、CD19、CD20髓系：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33非系列特异的抗体：CD34、HLA-DR全套进一步细分其它必要时可以加用泛白细胞标志：CD45第70页/共103页标本来源（1）外周血（2）骨髓穿刺液，（3）骨髓活检标本（4）淋巴组织穿刺第71页/共103页样本保存

要求：室温条件(16℃-28℃)存放；如非液态标本，则要在标本中加入足量的等渗液体（如生理盐水或组织培养液）。第72页/共103页保存时间肝素抗凝的外周血和骨髓标本，存放时限为48～72小时；EDTA抗凝标本，存放时限只有12～24小时，因为髓细胞在此条件下会裂解；柠檬酸（ACD）抗凝的外周血标本可存放72小时以上。但此方法不推荐用于骨髓穿刺标本，因为高浓度的ACD会引起pH值变化而导致骨髓细胞死亡第73页/共103页正常骨髓流式分析图CD45/SSC图中可见：CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞(褐色细胞群体)中等强度的CD45表达SSC信号最强的细胞群体为粒细胞(蓝色及红色细胞群体)CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体(绿色细胞群体)CD45阴性SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片第74页/共103页根据骨髓细胞CD45/SSC图中分布情况设门圈定各类细胞R1门为成熟淋巴细胞R2门为正常单核细胞位置R3门正常粒细胞位置R4门为幼稚淋巴细胞出现位置R5门为有核红细胞或细胞碎片位置R6门为幼稚髓细胞出现位置白血病细胞通常会在R4R6两门位置处出现第75页/共103页举例B-ALLCD19、CD20、CD10、cCD72、CD34、HLA-DR阳性第76页/共103页M3:CD13和/或CD33阳性，CD15阳性，CD34、HLA-DR、CD14阴性，偶尔表达CD2。MPO阳性。第77页/共103页混合表型第78页/共103页目前急性白血病的分类仍较复杂，流式细胞术免疫分型能提高分型的准确性，但不是疾病的诊断。理想分类法应该以形态学为基础，结合免疫学和细胞遗传学、分子生物学提供信息。国际血液学家及血液病理学家2001年3月里昂会议上的造血和淋巴组织肿瘤的WHO分类法，应用MICM分类技术力求反映疾病本质，成为国际上一种新的分类标准。白血病免疫分型总结第79页/共103页2、流式细胞术多发性骨髓瘤免疫检测正常浆细胞与骨髓瘤细胞在免疫表型上存在明显差异，前者为CD38++CD19+CD56-，而后者则为CD38++CD19-CD56+/-。此外，B系的其他标志（如CD10、CD20等），非B系标志（如CD2、CD5、CD7、CD13、CD33、CD34、HLA-DR、CD14等）在骨髓瘤细胞中也可能有异常表达。因此，通过多参数流式细胞术，进行多种表面标志标记，可以很方便地区分正常浆细胞和骨髓瘤细胞，对MM的诊断和预后判断有重要价值。【原理】第80页/共103页第81页/共103页3、网织红细胞血小板检测计数外周血中检测网织红细胞和网织血小板第82页/共103页4、血小板自身抗体检测血小板自身抗体检测：血小板自身抗体识别人血小板抗原，会引起各种临床相关症状，如新生儿自免性血小板减少症、输血后紫癜、难治性血小板减少。第83页/共103页血小板活化实验活化标志：CD62P（P选择素）、PAC-1（IIbIIIa复合物）血小板特异性标志：CD615、血小板功能分析第84页/共103页6、夜间阵发性血红蛋白尿正常人CD55和CD59表达完全阳性。

PNH表达分三型（以CD59为例）：

I型，CD59表达完全阳性，荧光强度同正常人；

II型，CD59表达部分阳性，荧光强度介于I和III型之间；

III型，CD59表达完全阴性。第85页/共103页7、造血干细胞检测干细胞的特征细胞特征祖细胞的流式细胞仪特征CD34表达对CD34的反应性：强CD45表达对CD45的反应性：弱→阴性DNA/RNA含量，核酸染料摄取量祖细胞DNA/RNA含量较多，染色性较强大小（前向散射光）祖细胞直径约8～10μm，与大淋巴细胞前向散射光位置相同，也可能伸入单核细胞区域。粒度（侧向散射光）祖细胞的侧向散射光弱，与淋巴细胞、大淋巴细胞相似。第86页/共103页CD34、CD45与核酸染料联合应用，通过合理的设门策略才能够准确检测CD34+干细胞比例；也可以用相关试剂盒进行绝对计数第87页/共103页五、流式细胞术在科研中的其它应用第88页/共103页1、流式细胞术检测吞噬细胞的吞噬活性吞噬细胞小吞噬细胞大吞噬细胞中性粒细胞单核细胞单核细胞巨噬细胞中性粒细胞第89页/共103页举例

流式细胞术检测中性粒细胞吞噬功能◆荧光素标记细菌◆中性粒细胞吞噬荧光素标记的细菌快速、客观、重复性好

第90页/共103页大肠埃希菌

金葡菌85.5445.6154.9593.6440.4553.1088.7593.865min10min15min20min

表示表示37℃吞噬率----------表示0℃15min吞噬率。人PMN吞噬荧光素标记细菌的时间动力学流式分析图第91页/共103页Cayman吞噬功能检测试剂盒（可采用流式细胞仪或荧光显微镜等检测）◆分析PMA刺激增加THP-1细胞株的细胞吞噬功能◆方便！直观！快速！◆细胞吞噬功能涉及多发性硬化、Alzheimer、动脉粥样硬化，细菌，霉菌等众多疾病的研究，是细胞功能变化的一个重要方面。pHrodo™噬菌作用流式分析试剂盒（100assays）快速标记生物微粒，用于细菌和全血的噬菌作检测。第92页/共103页2、免疫细胞细胞毒活性流式检测细胞毒活性检测方法MTT法3H-TdR摄入法

流式法CFSE/PI双标记法第93页/共103页实验原理1.羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE、CFSE)

是一种膜通透性