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文档简介

实验一

蛋白质和氨基酸的

呈色反应

一、实验目的1、了解蛋白质和氨基酸的呈色反应原理2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。3、了解呈色反应在定性和定量分析中的应用。（一）双缩脲反应

1、原理

一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

剂i]（二）茚三酮反应

2、试剂

（1）蛋白质溶液

（新鲜蛋清：水=1:9)

100ml（2）0.5%甘氨酸溶液

（3）0.1%茚三酮水溶液

（4）0.1%茚三酮-乙醇溶液

3、操作

（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫色再变蓝。

（2）在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。剂i]剂i]

（三）黄色反应

1、原理

2、试剂（1）鸡蛋清溶液

（2）头发（3）指甲（4）0.5%苯酚溶液（5）浓硝酸

（6）0.3%色氨酸溶液

（7）0.3%酪氨酸溶液

（8）10%氢氧化钠溶液

3、操作

向6个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。剂i]

（四）乙醛酸反应1、原理紫红色剂i]

2、试剂：(1)蛋白质溶液鸡蛋清：水＝1：20(2）冰醋酸(3)浓硫酸(分析纯)3、操作向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸约1ml,倾斜试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(A．R．)约1ml，使其重叠，勿使两者混合。静置后，观察在两液界面上出现的红紫色环，于水浴中微热，可帮助颜色形成。用20%白明胶作乙醛酸反应。白明胶分子中无色氨酸，所以不呈此反应。剂i]

3、操作

取2支试管，按下表操作试剂管号蛋白质

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