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©2008Bio-RadLaboratories,Inc.Bio-RadLaboratories,Inc.，严禁以任何印刷或电子形式进行。Excel、、、Windows和WindowsVista是Corporation的商标。Adobe和Reader是AdobeSystemsIncorporated的商标。Cy是GEHealthcare公司的商标。Fluor和Quasar是Biosearch,Inc.的商标，SYBR和TexasRed是InvitrogenCorporation的商标。InvitrogenCorporation授予Bio-RadLaboratories,Inc.对包含用于实时PCR的SYBRGreenI在内的试剂的销售，但对者Bio-Rad实时热循环仪CFX96或CFX34是根据Appra的专利号684341予用。CFX96或CFX384检测模块在与C1000热循环仪（其适用的实时热循环仪版税已支付）结合使用时，将组成一种实时热循环仪，该热循环仪已根据专利号6,814,934和由AppleraCorporation拥有的任何同等专利中的相应张权利的任何专利。有关权限的信息，请联系证签发官，地址是AppliedBiosystems,850LincolnCentreDrive,FosterCity,California,94404,USA。本产品受以下EppendorfAG所拥有的一个或多个专利、其外国同等专利或中的外国专利的保护：专利号Bio-Rad的Hard-S®反应板受以下EppendorfAG所拥有的一个或多个专利、中的专利或其外国同等专利的保护：专利号7,347,977、6,340,589、6,528,302和专利申请号 20030180192和20060120927。Bio-RadBio-Rad可为科学家提供多种资源。以下包含关于运行PCR和实时PCR实验的有用信息•表达网关 该站点可提供丰富的技术资源，内容涉及大量与PCR、实时 和表达相关的不同方法和应用程序LifeScienceResearch（生命科学研究） 表1列出了其他Bio-Rad资源以及如何查找所需资源：表1Bio-Rad资资联系当地Bio-Rad代请通过在Bio-Rad 的主页( )选择国家／ 技术说明和文转到Bio-Rad )或表达网 omics/)。在“搜索”框中输入搜索术语然后选择文献来查找技术说明、手册以及其他文献的技术 查找当地的技术支持，请与最近的Bio-Rad办事处联系。要在和寻求技术支持，请拨打1-（免费）并选择技术支持选项本手册采用的编写本手册说明了如何安全地安装和操作CFX96系统或CFX384系统。本手册采用表2中列出的编写规范。表2.本手册采用的规范规含提示注意警告说明可能会研究人员、毁坏设备或导致数据丢失等情况的重要信息X>从、菜单或软件窗口中选择X，然后选择Y有关本手册中使用的安全标记以及CFX96系统或CFX384系统的信息，请参阅第iii页的“安全与符合性”安全与符合为安全操作CFX96系统或CFX384系统，我们强烈建议您严格遵守本部分及整本手册中列出的安全规参见表3。表3.安全警示标志的：表面高温！此标志用以标识在处理不当的情况下可能会由于过热而导致人身的组件表4中显示的警示标志还会显示在设备上，其直接涉及CFX96系统或CFX384系统的安全使用。表4.设备安全警示标志图含警告损害人身或设备的在未阅读本手册的情况下操作CFX96或CFX384实时PCR检测系统可能构成人身。为安全起的合格人员才能操作此设备。请始终处理本系统的所有组件，并确保双手清洁干燥警告灼伤警告样品反应模块在正常操作过程中会变得很热，足以导致液体沸腾和注意：有关C1000™热循环仪的信息，请参阅《C1000热循环仪说明手册》表5列出了CFX96系统或CFX384系统的安全使用规范。本装置必须使用的缆线（已提供），以确保符合ClassAFCC的限制。表5.安全使用规安全使用要规温室内环境温度15–31oC。最大相对湿度80%（非冷凝高最高海拔2,000符合本设备经测试证实符合以下安全和电磁标准的所有适用要求要求-第1部分：通用要求》IEC61010-2-010:2005，EN61010-2-010:2003。《测量、控制和用电气设备的安全要求（2-010部分：材料加热用设备的特殊要求Bio-Rad资 本手册采用的编写规 安全与符合 第1章系统安 解包光学反应模 系统要 系统概 设置系 安装CFXManager软 运行实 第2章CFXManager软件简 软件主窗 启 “检测到的设备”窗 “设备属性”窗 软件文 提示与窍 第3章运行实 “实验设置”窗 “扩增程序”选项 “反应板”选项 “启动运行”选项 “运行详细信息”窗 “设 ”窗 第4章扩增程 “扩增程序编辑器”窗 扩增程序编辑器控 温度控制模 扩增程序自动编写 v第5章反应 “反应板编辑器”窗 “选择荧光基团”窗 “实验设置”窗 “反应孔编组管理器”窗 “反应板电子表格视图”窗 第6章独立运 控制面 主菜 实验设 导出用于分析的数 创建数据文 设置电子邮 第7章数据分析概 “数据分析”窗 “数据分析”菜单 “定量”选项 数据分析设 反应孔选择 图 电子表 第8章“数据分析”窗 “定量”选项 “定量数据”选项 “熔解曲线”选项 “熔解曲线数据”选项 “终点”选项 “等位分型”选项 “QC”选项 数据文件报 第9 表达分 表 表达分析的反应板设 “表达”选项 “实验设置”窗 研 研究数据电子表 “”窗 常见问 表达计 第10章用户和首选 登录或选择用 “用户首选项”窗 “电子邮件”选项 “文件”选项 “扩增程序”选项 “反应板”选项 “数据分析”选项 “表达”选项 “QC”选项 用户管 第11章资 校准向 设备应用程序日 软件帮助工 疑难解 设备、部件和附 参考书 索 本章提供有关设置CFX96或CFX384系统的信息解包光学反应模块（如下所示系统要求（第1页系统概述（第2页设置系统（第3页安装CFXManager软件（第6页运行实验（第9页解包光学反应交付的CFX96或CFX384光学反应模块包含以下组件光学反应模USB缆CFXManager软件安装说明关于系统安装、扩增程序、反应板、数据分析和表达分析的CFXManager软件快速指系统要操作CFX96或CFX384系统，请使用以下电源和室内使用。环境温度15–31oC。最大相对湿度80%（非冷凝）USBB缆线由计算机来控制CFX96BoRad分的缆线。注意：有关本设备安全及符合性要求的完整陈述，请参阅第iii页的“安全与符合性”1系统安系统CFX96系统或CFX384系统包含以下两个组件注意：CFX96或CFX384模块的序列号标注在背面。C1000™热循环仪基座。C1000 指示灯开启带加热器板的内反应模图1.CFX96系统的正面视图。开启时，将看到CFX96或带加热器板的内反应模关闭图2.CFX96系统的内部视图。2反应模块。运行前在此反应模块中加载样品关闭按钮。在盖内侧按此按钮可关闭电动盖清洁和的信息，请参阅“设备”（第133页）。C1000机箱的背面板包含下列组件（图电源开关。按此电源开关即可打开系统电源电源输入。在此插入电以太网端口。连接以太网缆线后，可以通过电子邮件发送运行日志和独立数据USB连接。使用这些端口可以将CFX96系统或CFX384系统连接到计算机或连接S1000™热电源开 电源输

USB连图3C1000热循环仪的背面板。警告！在操作期间接触C1000的背面板。设置要将CFX96或CFX384光学反应模块插入C1000机箱的反应模块基座中，请按照以下说明将C1000机箱放置在适当的位置，并拉下锁定条。卸下以前安装的任何反应3系统安使用侧通风孔上方的手柄凹槽提起光学反应模块（图4）C1000C1000热环仪CFX96光反应图4.提起光学反应模块，将其插入C1000机箱将模块放入C1000机箱的反应模块基座中，面保留约2厘米的空隙。位于机箱基座中时，光学模块应覆盖C1000机箱基座前面的Bio-Rad徽标。到位（图5）。图5.将光学模块锁定到位4空检检 空空图6.检查模块和基座之间的空隙是否均衡果模块和C1000基座之间的空隙不均衡，请从2（第4页）开始重新安装将电源线插入C1000基座的背面（第3页的图3），另一端插入适用的三相电源插座按 热循环仪背面板上的电源开关以启动系统图7.卸下固定螺丝的说明5系统安注意：如果未在本步骤卸下固定螺丝，则CFXManager软件将会检测到该螺丝。请按照软件中的说明卸下螺丝（第19页）。从热循环仪反应模块上取下板，以便操作安装 Manager软CFXManager软件可以在安装WindowsXP或WindowsVista操作系统的PC计算机上运行，需要使用该软件分析来自CFX96系统或CFX384系统的实时PCR数据。该软件还可用于在软件控制模式下控制CFX96系统或CFX384系统。表6列出了软件的计算机系统要求（包括WindowsXP和Windows表6CFXManager软件的计算机要系最推操作更高版本或WindowsVistaHomePremium以及更高版本WindowsXPProfessionalSP2以及更高版本或WindowsVistaHomePremium以及更高版本CD-ROM驱动硬盘驱动1020处理器速2.02.022GB屏幕分辨1024x768真彩色模USB2.0高速端USB2.0高速端Internet浏览InternetInternet软Office套注意：由于USB驱动程序不兼容，不支持在安装Windows64位操作系统的PC计算机上使用CFXManager软件运行CFX96或CFX384系统。支持在32位Windows操作系统上使用64位处理器（例如In）的PC计算机。安装CFXManager软件该软件必须由具有管理员权限的用户安装在计算机上。请确保使用管理员权限将CFXManager软件CD放入计算机的CD驱动器中6将自动显示软件启动页面。双击软件启动页面上的安装软件（图8）图8.软件安装屏幕提示：单击文档按钮可以查找设备手册和其他文档的可搜索 副本按照屏幕上的说明完成安装。完成后，计算机桌面上将出现Bio-RadCFXManager软件图标并按照其中的说明操作。请参阅第136页的“手动安装软件”。如果要在软件控制模式下运行CFX96系统或CFX384系统，则必须在计算机上安装驱动程序。仅使用所提供的已进行充分的USB缆线，这些缆线可以防止数据丢失。安装系统驱动程序将C1000机箱连接到计算机，方法是将USB缆线插入位于机箱背面的USB2.0A端口（第3页的图3），然后将缆线的另一端连接到计算机上的USB2.0B端口。007系统安件（图9）。单击下一步。图9.找到新的硬件向导指示向导“自动安装软件”。单击下一步继续安装驱动程序（图10）图10软件（驱动程序）安装屏幕驱动程序安装完毕后，请在软件安装完成屏幕中单击完成8运行在CFX384系统中仅运行384孔板。为获得最佳结果，Bio-Rad建议在CFX384系统中使用下列耗 号以粗体显示 。薄 孔Hard-S®板，透明外壳，白色反应孔 。薄 孔Hard- 板，黑色外壳，白色反应孔MicroseaCFX96系统接受薄型0.2ml板和联管。为获得最佳结果，Bio-Rad建议使用下列耗材MLL-9601。薄型96孔不带裙边板，透明反应孔MLL-9651。薄型96孔不带裙边板，白色反应孔HSP-9601。Hard- 96孔带裙边板，白色外壳，透明反应孔HSP-9655。Hard- 96孔带裙边板，白色外壳，白色反应孔TLS-0801。薄型0.2ml8个联管，无盖，透明反应孔TLS-0851。薄型0.2ml8个联管，无盖，白色反应孔TCS-0803。光学平面8个联管，用于0.2ml联管和反应板Microsea要在反应模块中加载反应，请按照以下建或按系统前面的盖按钮（图1），以打开电动盖。警告！盖在打开或关闭时首先会很慢，然后再加快速度得最佳结果，请为CFX96系统加载10–25μl的样品体积，为CFX384系统加载5–20μl的样将导致软件在反应孔H3的读板上显示空的A10反应孔。9系统安反应孔（180o旋转反应孔（正确图11.显示反应板方向的“反应板编辑器警告！运行CFX96系统时，请始终平衡反应孔中的联管或切割微孔板（图12）。例如，如填满的联 用以平衡联图12.平衡反应模块中的联管或切割微孔板警告确保在盖关闭时没有任何阻碍。尽管系统的安全机制可以防止盖在感应到CFXManager软件简本章提供有关CFXManager软件的信息软件主窗口（如下所示启导（第15页“检测到的设备”窗格（第16页“设备属性”窗口（第18页软件文件（第20页提示与窍门（第20页软件主有关运行系统的说明，请参阅系统附带的CFXManager软件快速指南之一安装快速指扩增程序快速指反应板快数据分析快速指表达分析快速指通过使用下列功能，可在软件主窗口中开始使用软件（图状态栏。查看当前软件和设备状态（第12页）菜单栏。选择软件命令（第12页），如创建或打开文件口（第21页）。“检测到的设备”窗格。查看连接的设备列表（第15页）CFXManager软件“启导”窗口。通用软件命令（第16页）图13.软件主窗口状态栏位于软件主窗口的底部，显示软件的状态。查看状态栏的左侧（图14）可了解设备的当前状态图14软件主窗口中状态栏的左侧。查看状态栏的右侧（图15）可了解当前的用户名、日期和时间。图15软件主窗口中状态栏的右侧。软件主窗口的菜单栏提供图16中列出图16.软件主窗口中的菜单可选择菜单栏中显示令（表7）。表7.软件主窗口中的菜单栏项命功文新创建新的扩增程序、反应板、实验或研打打开现有文件，包括扩增程序(.prcl)、反应板 )、数(.pcrd)、研究(.mgxd)文件以及独立运行文件(.zpcr)最近的数据文查看最近查看过的十个数据文件的列表，并选择其中一在“数据分析”窗口中打开重复使用已完成运行中的扩增程序和反应板打开“实验设置”口，以快速重复该运退退出软件程视应用程序显示软件的应用程序日运行从列表中选择要查看的运行报启打开“启导实验打开“实验设置”窗设打开“设 ”窗检测到的显示或隐藏“检测到的设备”窗显示或隐藏软件主窗口状态显示或隐藏软件主窗口的状态用选择打开“选择用户”窗口以更改软件用更更改用打开“用户首选项”窗用户在“用户管理”窗口中管理用工校准打开“校准”窗口校准设备，以便用于新荧光基团扩增程序自动编写打开“扩增程序自动编写器”窗口以创建新扩增程Ta计算打开“Ta计算器”窗口，以计算引物的退火温度查看反应模块状态日查看热循环仪反应模块的日应用程序数据文件打开“应用程序数据”文件夹以查看软件文用户数据文件打开“数据”文件夹以查看扩增程序、反应板和数据文所有设备查看所有检测到的设备的属性，包括序列号压缩数据和日志文选择文件并将选定的文件压缩到压缩文件以便进行或发电子邮选配置软件电子邮件设CFXManager软件表7.软件主窗口中的菜单栏项（续命功窗层将软件窗口排列在彼此顶垂直从上到下排列软件窗水平从右到左排列软件窗全部关闭所有打开的软件窗帮内打开软件帮助，以获取关于运行PCR和实时PCR的详细信息索查看软件帮助中的索搜搜索软件帮表达网关打开，以查找有关运行PCR和实时PCR实验的信息PCR试剂查看列出用于PCR和实时PCR试剂的Bio-Rad耗材的PCR塑料耗材查看列出用于PCR和实时PCR实验的Bio-Rad耗材的软件查看Bio-Rad提供的软件更关打开一个窗口，以查看软件版本注意：要显示或隐藏，请选择菜单栏中的查看>表8.软件主窗口中的按按按钮名功打开数据据分析”窗口（第69页）中打开它。打开研“研究”窗口（第101页）中打开它。新建研打开“研究”窗口（第101页），以添加文件并创建新研究打打印当前的软件窗启打开“启导”，以到常用软件功能（第16页）表8.软件主窗口中的按钮（续按按钮名功实验设打开“实验设置”窗口以运行实验（第21页扩增程序自动编写打开“扩增程序自动编写器”窗口以创建新扩增程序（第37页选择用用户首打开“用户首选项”窗口（第121页帮启第一次打开CFXManager软件时，“启导”会自动显示（图17）。如果未显示，请在软件主窗口的图17.“启导”窗口CFXManager软件“启导”中包括下列选项创建新实验（第21页）。设置扩增程序和反应板以开始新实注意：请在下拉列表中选择合适的设备，以确保默认反应板设置与要用于实验的设备相匹打开数据文件（第69页）。打开数据文件以分析结果打开用户首选项（第121页）。打开“用户首选项”窗口以自定义软件设置“检测到的设CFXManager软件运行下列1000系列设备CFX96和CFX384实时PCR系统。系统包括一台C1000热循环仪和一个光学反应模块C1000热循环仪。由CFXManager软件运行的用途最广泛的设备。几秒钟内即可在C1000机箱中添加和卸载以下PCR反应模块：96孔快速反应模块，支持梯度384孔反应模块双48/48孔快速反应模块，支持梯度连接到C1000热循环仪上的S1000热循环仪。有关详细信息，请参阅《S1000和C1000热循环提示：可以通过打开 Manager软件安装CD的“文档”文件夹来查找说明手册的副本使用CFXManager软件最多可以同时运行四台设备，包括CFX96系统和CFX384系统的组合，或者是实时PCR系统和热循环仪的混合。序号对其命名（默认）。该设备列表还显示每个双模块的反应模块的单个模块（模块A和模块B）图18显示所检测到的四台设备一台具有双48/48孔反应模块的C1000热循环仪一台具有96孔反应模块的S1000热循环仪(S96FEM01)，它连接到名为C48FSIM00C1000热循环仪上一个CFX384系统一个CFX96系统图18.“检测到的设备”窗格顶部列出的设备。查看状态。打开“运行详细信息”窗口，以查看选定设备反应模模块运行指示灯。使设备上的指示灯LED闪烁打开盖。打开选定设备反应模块上的电动盖关闭盖。关闭选定设备反应模块上的电动盖重命名。更改设备的名称属性。打开“设备属性”窗口全部折叠。在“检测到的设备”窗格中折叠设备列表全部展开。在“检测到的设备”窗格中展开设备列表的设备”窗格中单击按钮（图19）。图19.“检测到的设备”窗格底部的按钮单击查看状态可打开“运行详细信息”窗口，以查看选定设备反应模块的状态单击打开盖可打开选定设备上的电动盖单击关闭盖可关闭选定设备上的电动盖单击查 可打开“设 ”窗口CFXManager软件 ”窗口，请选择查看设 “设备属性属性。查看序列号和C1000热循环仪名固定螺丝。卸下固定螺丝以运行设备，或在需要设备时安装固定螺丝已校准。查看已校准的荧光基团的列表图20.“设备属性”窗口设备的默认名称为C1000热循环仪的序列号，该序列号在多个位置显示，包括“检测到的设备”窗（图18）要重命名设备以便进行标识，请按照以下说明操作“任何时候CFX96系统或CFX384系统都应该安装固定螺丝。到选示。请单击安装固定螺丝按钮，然后按照选项卡中的说明操作（图21）。图21.安装固定螺丝的说明图22.“设备属性”窗口中的“已校准”选项卡CFXManager软件软件CFXManager软件将有关实验的信息在特定文件中（表9）：表9.使用CFXManager软件打开这些类型的文件文件扩展如何查看和编辑文扩增在“实验设置”中选择，在“扩增程序编辑器”中编辑在“实验设置”中选择，在“反应板编辑器”中编辑数在“数据分析”窗口中查看和分析研在“研究”窗口中查看和分析独立数据包含转换到一个数据文件中的独立运行的荧光读数提示与以下列出了使用CFXManager软件的提示与窍门可以右键单击图表、电子表格或反应孔选择器，从而打印或导出多个窗口中显示的信息可以通过单击并拖动边缘的方式更改任意窗口的大小打开“用户首选项”窗口可选择默认设置，每次登录软件时都将会激活这些设可以将数据文件从文件夹拖到打开的“研究”窗口，从而将这些文件添加到研究可同时打开多个数据分析和研究文件单击设置或工具菜单可查找高级功能户数据文件夹，然后在ExpressLoad文件夹中添加或删除文件（扩展名为.prcl和 ）要查看加载到反应板的一个反应孔中的所有信息，请双击该反应打开“反应孔信息”窗口。右键单击任何图或图表均可更改查看和数据分析选项可以在运行之前、期间或之后编辑反本章提供有关使用CFXManager软件运行实验的“实验设置”窗口（如下所示“扩增程序”选项卡（第22页终点唯一运行（第22页“反应板”选项卡（第23页“启动运行”选项卡（第24页“运行详细信息”窗口（第26页“设 ”窗口（第28页“实验设置单击“启导”中的创建新实验选项（第16页单击软件主中的实验设置按钮（第14页在软件主菜单栏中选择文件新建实验（第12页）器”窗口中创建新的扩增程序（第31页）。新的反应板（第41页）。添加“读板”（第34页）。运行实图23.“实验设置”窗口，包含“扩增程序”、“反应板”和“启动运行”选项卡“扩增程序选项通过选择下列选项之一，可以选择现有的扩增程序、创建新的扩增程序或编辑当前选定的扩增程序“新建”按钮。打开“扩增程序编辑器”以创建新扩增程序“快速载入”下拉菜单。快速选择一个扩增程序，以将其加载到“扩增程序”选项卡中除文件（扩展名为.prcl）。要查找此文件夹，请选择软件主窗口菜单栏中的工具>用户数据文“编辑选定项”按钮。在“扩增程序编辑器”中打开当前选定的扩增程序图24显示了默认的终点扩增程序图24.终点唯一扩增程序要更改终点唯一运行的步骤温度或样品体积，请单击启动运行选项卡，然后编辑步骤温度或样品体5显示步骤温度更改为5°C。图25.在“启动运行”选项卡上更改样品体积“反应选项文件包含对每个反应孔的内容、扫描模式和反应板类型的说明。CFXManager软件将这些说明用于数据通过选择下列选项之一，可以选择现有的反应板、创建新的反应板或编辑当前选定的反应“新建”按钮。打开“反应板编辑器”以创建新反“快速载入”下拉菜单。快速选择一个反应板，以将其加载到“反应板”选项卡中运行实“编辑选定项”按钮。在“反应板编辑器”中打开当前选定的反图26.“反应板”选项卡窗口“启动运行选项框中输入有关实验的可选注释。图27.“启动运行”选项卡表10.“在选定的反应模块上启动运行”右键单击菜单选项右键单击功选定的文为图“在选定的反应模块上启动运行”窗格的图打印打印选定的反应模块列表的当前视打印选择打印当前选定的导出到将反应模块列表导出到Excel电子表格导出为文本文件将反应模块列表导出到文本文查找在反应模块列表中查找文排序在反应模块列表中对最多三列进行排单击“启动运行”选项卡中的下列按钮可操作选定的设备启动运行。在选定的设备反应模块上模块运行指示灯。使选定的设备反应模块上的指示灯LED打开盖。打开选定设备反应模块上的电动盖关闭盖。关闭选定设备反应模块上的电动盖“运行详细信单击启动运行按钮时，CFXManager软件将提示您保存数据文件的名称，然后将打开“运行详细信息”窗口。通过查看此窗口中的信息可运行进度。“实时状态”选项卡。查看所收集的实时PCR荧光数据“时间状态”选项卡。查看扩增程序的全屏倒计时计时器运行实图28显示了“运行详细信息”窗口的功能图28.“运行详细信息”窗制盖和更改正在进行的运行的按钮（第26页）。“运行状态”按钮。单击其中一个按钮可操作设备，或中断当前扩增程序“运行信息”窗格。显示实验详细信息单击表 中列出的一个按钮可从软件操作设备，或更改正在进行的运行表11.“运行状态”按钮及其功按功打开选定设备上的电动盖关闭选定设备上的电动盖表11.“运行状态”按钮及其功能（续按功使选定设备上的LED闪烁，以标识选定的反应模块暂停扩增程序注意：此操作将记录在运行日志中恢复暂停的扩增程序在扩增程序结束前停止运行，此操作将更改数据“实时状态”选项卡（图29）显示前两个反应板后在扩增程序中的每个循环收集的实时PCR数据。图29.“实时状态”选项卡可显示运行期间的数据运行实CFXManager软件将检查反应板文件的扫描模式和反应板大小，这些设置必须与实验期间启动的运行设置一致。提示：如果使用ExpressLoad文件夹中的快速反应板文件启动运行，则替换反应板文件“时间状态”选项卡可显示当前运行的倒计时计时器（图30）图 “时间状态”选项卡可显示当前运行的倒计时计时器“设 窗 （第17页的图19）即可打开“设 图31显示了“设备 图31.“设 ”窗口 ”包含表12中列出的按钮和功能。表12.“设备 按按钮名功设置实停停止选定反应模块上的当前运暂暂停选定反应模块上的当前运恢恢复选定反应模块上的运模块运行指示使选定反应模块盖子上的指示灯LED打开选定反应模块的电动关闭选定反应模块的电动隐藏选定的反应模在“设 ”列表中隐藏选定的反应模显示所有反应模在“设 ”列表中显示选定的反应模显的一个选项，可显示所有检测到的反应模在“设 ”窗口中右键单击可更改显示的选项列表反应模块名称。查看反应模块的名称类型。查看反应模块的大小和类型状态。查看反应模块的当前状态用户。查看登录软件的当前用户剩余。查看当前运行的剩余时间运行实。整个列表为图像。将列表为图像文件打印。打印列表打印选择。仅打印列表中选定的单元格导出到Excel。将列表导出为Excel格式的文件导出为文本文件。将列表导出为文本查找。在列表中查找文本排序。通过在“排序”窗口中最多选择三列数据来对列表进行排本章提供有关创建和编辑扩增程序文件的信息“扩增程序编辑器”窗口（如下所示扩增程序编辑器控件（第33页温度控制模式（第37页扩增程序自动编写器（第37页“扩增程序编辑要打开“扩增程序编辑器”，请按照下列选项之一操作要打开现有的扩增程序，请选择文件扩增程序，或单击“扩增程序”选项卡（第页）中的打开现有项按钮（第22页）编辑选定项按钮。“扩增程序编辑器”窗口（图32）包含下列功能菜单栏。选择扩增程序的设置。选择用于编辑扩增程序的选项（顶部（底部视图查看选定的扩增程序。在任何步骤的图形或文本视图中单击温度或停滞时间均可输入新值。扩增程“扩增程序编辑器”按钮。通过单击文本视图左侧的按钮之一可以编辑扩增程图 带有用于编辑扩增程序的按钮的“扩增程序编辑器”窗口“扩增程序编辑器”窗口中的菜单栏可提供表13 表13.“扩增程序编辑器”菜单栏命功文保保存当前扩增程另存使用新名称保存当前扩增程序，或将其保存到新位置关关闭扩增程序编辑设盖设打开“盖设置”窗口以更改或设置“盖温工梯度计选择梯度步骤的反应模块类型。可选择96孔或384运行时间计算选择设备和扫描模式，用以计算“实验设置”窗口中的预计运时间“扩增程序编辑器”窗口中的（图33）提供对重要功能的快速图33.“扩增程序编辑表14列出了“扩增程序编辑器”按钮的功能：表14.“扩增程序编辑器”按钮按钮和菜名功保保存当前的扩增程序文打打印选定的窗插入步选择之后或之前，可在当前显示的步骤相对位置插入样品体输入0和50之间（96孔反应模块）或0和30间（384孔反应模块）的样品体积（以μl为单样品体积将决定温度控制模式（第37页）(0可选择“反应模块”模式运行时查看根据扩增程序步骤和变温速率估计的时帮打开软件“帮助”，以获取有关扩增程序的详信息扩增程序编辑器在当前选定的步骤之前或之后插入温度步骤单击插入步骤按钮通过在图形或文本视图中单击默认值并输入新值，可编辑温度或扩增程（可选）单击步骤选项按钮，可为步骤输入“升温”或“延长”选项（第36页）。图34显示在步2之后插入的新步骤图34.带有插入步骤的扩增程添加读板到步骤或从步骤删除读板通过在图形或文本视图中单击步骤来选择该步骤请注意，在图34中，图形视图（顶部）中的照相机图标显示步骤4包含读板在当前选定的步骤之前或之后插入梯度步骤通过单击插入梯度按钮插入温度梯度请确保梯度的反应板大小与设备的反应模块类型（96384孔）相匹配。通过选择“扩增程序编辑器”菜单栏中的工具梯度计算器，可选择梯度的反应板大小。步骤选项按钮，在“步骤选项”窗口（第36页）中输入梯度范围。通过在图形或文本视图中单击默认时间并输入新时间，可编辑保持时间图 显示插入的梯度步骤。在窗口右侧输入的梯度中的每行温度将反映到图表中图35.带有插入的梯度步骤的扩增程序在选定步骤之前或之后插入跳转步单击插入跳转按钮图35显示在扩增程序末端插入的跳转步骤。请注意，此跳转循环包括步骤2-4在选定步骤之前或之后插入熔解曲线单击插入熔解曲线按钮注意：不能在跳转循环中插入熔解曲线步骤注意：熔解曲线步骤在扩增程序中未显示的步骤开端包括一个 秒的保持扩增程图36显示在步骤6之后添加的熔解曲线步骤图36.带有插入的熔解曲线步骤的扩增程更改选定步骤的步骤选项通过在图形或文本视图中单击步骤来选择该步骤单击步骤选项按钮，打通过输入数字、编辑数字或单击复选框来添加或删除选项提示：要永久保持某个步骤（无限保持），请将时间输入为零(0.00)图37.梯度的步骤选项步骤选项窗口列出以下选项，可以在步骤中添加或删除读板。选中该框以包括温度。输入选定步骤的目标温度梯度范围。输入步骤的梯度范围升温。输入要对选定步骤提升的温度；升温量将添加到每个循环的目标温度上变温速率。输入选定步骤的变温速率；其范围取决于反应模块大时间。输入选定步骤的保持时间延长。输入选定步骤的延长时间。延长量将添加到每次循环的保持时间上蜂鸣。选中该框可在步骤结束时发出蜂鸣声提示：如果输入的数字在选项范围之外，软件会将该数字更改为范围内最接近的项要删除扩增程序中的步骤，请执行下列操作在图形或文本视图中选择步骤温度控制模设备使用两种温度控制模式之一来确定样品何时达到扩增程序中的目标温在扩增程序编辑器中输入样品体积，可选择温度控制模式反应模块模式。如果输入的样品体积为零(0)μl，热循环仪会将样品温度记录为与测量的反应模块扩增程序自动编打开“扩增程序自动编写器”可快速编写用于PCRPCR实验的扩增程序。要打开“扩增程序自在软件主窗口的中单击扩增程序自动编写器按从软件主窗口的菜单栏中选择工具 扩增程序自动编写扩增程图38显示由扩增程序自动编写器编写的扩增程序（窗口底部）图38.包含新扩增程序的“扩增程序自动编写器”窗口 扩增子长度(bp)。输入PCR产品的预期长度酶。选择DNA聚合酶（iTaq、iProof或其他）（iTag™DNA聚合酶、iProofTM高保真DNA聚合运行时间和类型。输入速度（标准、快速、超快速），以调整总运行时间，并选择PCR类型（PCR或PCR）减少扩增程序总步骤减少跳转重复的次将每个温度步骤中的保持时间降至最通过减少从某一步骤到下一步骤的温度变化将步骤之间的变温时间降至最例如，典型的PCR扩增程序包含下列三组步骤，总运行时间为1.5到2.0小时最初模板变性和酶激活（在3-10分钟内为95°C）三个温度步骤的循环（3040次循环板变性（15-30秒内为94-95°C）、引物退火（15-30秒内退火）和产品延长（在15-60秒内为72°C）最后延长（10分钟内为72°C）“扩增程序自动编写器”可进行下列修改以缩短典型的扩增程序将最初模板变性和酶激活步骤从3分钟内95°C更改为30秒内将每次循环的变性步骤从30秒内95°C更改为1秒内将退火和延长步骤组合到20秒内70°C的单个步骤定2到3个碱基对(bp使用扩增程序自动编写器创建新扩增程序时，请遵单击上的扩增程序自动编写器按钮，打开“扩增程序自动编写器”窗口)请单击退火温度计算器按钮，输入引物序列并计算退火温度。有关退火温度计算器中所用计算的信esreta.(18)。从选项列表（iTaq、iProof或其他）中选择酶类型如果要在扩增程序中添加“梯度范围”、“热启动激活温度”或“最后延伸时间”，请在附加参（可选）窗格中添加参数查看“预览”窗格中的扩增程序和总运行时间。根据需要进行更改体积（请参阅第24页的““启动运行”选项卡”）。单击确定保存新扩增程序，或单击取消关闭窗口而不保存扩增程提示：要编辑使用扩增程序自动编写器编写的扩增程序，请在“扩增程序编辑器（第31页）中打开扩增程序文件（扩展名为.prcl）序一定能够生成PCR产品。扩增程本章提供有关创建和编辑反应板文件的信息“反应板编辑器”窗口（下一部分反应板大小和类型（第44页扫描模式（第45页“选择荧光基团”窗口（第45页反应孔加载控件（第46页“反应孔编组管理器”窗口（第50页“反应板编辑要打开“反应板编辑器”窗口（图39），请按照下列选要创建新反应板，请选择文件>新建>（第23页）中的新建要打开现有的反应板，请选择文件>打开>反应板，或单击“反应板”选项卡第23页）图39.“反应板编辑器”窗“反应板编辑器”窗口包含下列功能菜单栏。选择反应板大小、反应板类型、数字范例和单位的设置（第43页）96孔板最多可收集5个通道的数据（全通道扫描）。384孔板最多可收集4个通道的。。选择“扫描模式”（第45页）或“反应孔编组”（第50页）反应板加载指南。从打开“反应板加载指南”窗口即可快速概览有关加载反应板的说（第42页）应孔（图39）。反应孔加载控件。从反应板视图右侧的控件可以选择要在反应孔中加载的内容（第46页）“反应板编辑器”窗口中的菜单栏提供表15中所示的菜单项。表15.“反应板编辑器”中的菜单栏项命功文保保存反应板文另存使用新文件名保存反应板文退退出反应板编辑设反应板选择反映设备反应模块中的反应孔数的反应板大小。对于CFX384，选择384孔；对于CFX96，选择96孔反应板选择包含样品的反应板中反应孔的类型，包括“BR白”和注意：必须对新反应板类型进行校准（第131页）数字选择或取消选择科学单工显示电子表格视以电子表格视图显示反应板信息，以便导出或打印反应板加载指显示有关如何设置反应板并加载反应孔的快速指显示反应孔注显示收集名帮帮助打开“帮助”以获得有关反应板的信“反应板编辑器”中的可提供对重要的反应板加载功能的快速表16列出了“反应板编辑器”中的可用功能。表16.“反应板编辑器”中的项项名功保保存当前反应板文打打印选定的窗缩增加或减少反应板视图中的放大扫描选择一种扫描模式，以指示设备在运行期间从哪些通道收集荧数据。选择全通道（默认值）、仅限SYBR/FAM或FRET反应孔打开“反应孔编组管理器”窗口并设置当前反应板的反应孔编帮打开软件“帮助”，以获取有关反应板的信息反应板指显示有关如何设置反应板并加载反应孔的快速指软件将下列反应板设置应用于实验期间的所有反应孔择设备类型（CFX96或CFX384）将更改“实验设置”窗口的“反应板”选项卡中加载的默认反注意：CFX96和CFX384设备针对许多荧光和反应板组合进行了预先校准。校准需指定设备、和反应板类型。要对设备上的和反应板类型的新组合进行校准，请选择工具校准向导（参阅第131页的“校准向导”）。CFX96系统可在6CX34系统可在5个通道中激发和检测荧光基团。两个系统都使用多源扫描模式在运行期间收集荧光数据。从“反应板编辑器”窗口的中选择下列一种扫描模式全通道。包括CFX96系统上的通道1-5或CFX384系统上的通道1-4仅限SYBR/FAM。仅包括通道1，并提供快速扫描FRET。仅包括FRET通道，并提供快速扫描“选择荧光基窗口中仅显示通道1的荧光基团。此示例从可用荧光基团列表中选用了SYBR（图40）。图40.“选择荧光基团”窗反应板文件包含有关使用实验样品加载的每个反应孔内容的信息。运行后，软件将反应孔内容到在设置表达实验时，请遵守以下关于反应孔内容的原则样品名称。每个加载的反应孔中与样品对应的标识符或条件，如“0hr”、“1hr”或“2hr。口（第125页）中“反应板”选项卡的目标和样品名称库中输入名称。在反应板视图中使用鼠标左键单击即可选择要加载内容的反应孔。按住鼠标按键并拖动可以选择多个（表表17.用于在“反应板编辑器”中加载反应板和反应孔的选选功要进行表达分析或区分多个目标，请从目标名称下拉菜单中选择一个名称，然后按ntr键将该目标名称加载到反应孔中。要删除目标名称，请选中它，然后按eter键。在下拉框中输入名称，然后按Enter键。表17.用于在“反应板编辑器”中加载反应板和反应孔的选项（续选功要进行表达分析或区分多个样品，请从下拉菜单中选择样品名称，以在选定的反应加载该样品名称。要删除样品名称，请从菜单中选中它，然后按键盘上的Delete键，再按。下拉框中输入新名称，然后按Enter键。单击加载框可将“重复#”添加到选定的反应孔。单击清除重#按钮可从选定的单元格清除重复编号通过选择一个数字来表示每组重复编号中的样品（反应孔）数，可输入重复组大小。选择起始重复可添加重复编号。型的选定反应孔的浓度。要将浓度应用于反应的荧光基基团。要删除浓度，请选中它，然后按键盘BackSpace选择具有标准样品类型的多个反应激活稀释系列按钮表17.用于在“反应板编辑器”中加载反应板和反应孔的选项（续选功选择工具>显示反应孔注释可显示此窗格。通过选择反应孔并在下拉菜单中输入注释，可输入有关一个或多个反应孔的注释。您添加的任何注释将显示在“定量数据”选项卡（第78页）选择工具显示收集名称可显示此窗格。通过选择反应孔并在单击清除重复 按钮可清除选定反应的重复编号单击清除反应孔按钮可清除选定反应的所有内容注意：单击清除反应孔按钮将永久删除反应的内容“实验设置要打开“实验设置”窗口，请按照下列选项之一操作在反应板编辑器中，单击实验设置按钮在“数据分析”窗口中分析数据时，单击“表达”选项卡中的实验设置按钮如果已将收集名称添加到反应孔，则打开“实验设置”窗口则可以查看或更改“目标”和“样品”列（图41），或设置要分析的表达分析样品组样品。表示目标来源的样品名称列表，如在1小时获取的样品(1hr)，或从某特定获取的样图41是显示分析设置的“目标”选项卡。图41.“实验设置”窗口中的“目标”选项卡图42是显示分析设置的“样品”选项图42“实验设置”窗口中的“样品”选项卡。添加目标或样品名称，方法是在新建框中输入一个名称，然后单选择目标作为表达数据分析的参考，方法是单击该目标的名称旁边参考列中的框选择样品作为表达数据分析的对照样品，方法是单击该样品的名称旁边对照列中的框在颜色列中单击一个单元格，可更改在表达图表中绘制的目标的颜色在“样品”选项卡中调整样品的设置在颜色列中单击一种颜色，可更改在表达图表中绘制的样品的颜色单击显示图表列中的框，可使用在颜色列中选定的颜色显示表达图表中的样品目标与目标与目标与样目标与收“反应孔编组管理注意：默认反应孔编组为全部反应孔要在“反应孔编组管理器”窗口中创建反应孔编组，请按照以下说明操作在“反应板编辑器”的中单击反应孔编组按钮单击添加以创建新组。下拉菜单将第一组的组名显示为组1应孔的颜色将变为蓝色（图43）。（可选）通过在下拉菜单中选择组名称或输入新名称来更改组名称（可选）通过重复步骤1和2创建反应孔编组（可选）通过在下拉列表中选择组名称并单击删除按钮来删除反应孔编组单击确定完成操作并关闭窗口，或单击取消关闭窗口而不进行更图43.“反应孔编组管理器”窗口中的反应孔颜色“反应板电子表格视栏中的工具显示电子表格视图即可打开“反应板电子表格视图”窗口（图44）。图44.“反应板电子表格视图”窗打开电子表格视图后，可以按照 或其他制表符分隔的格式导入或导出反应孔内容单击导入模板，可从逗号分隔的文件导入反应孔内容通过单击列名称旁边的菱形图标，可根据该列中的数据对电子表格排序通过单击每个反应孔并在其中输入内容，可编辑顶部带有星号 的列的内容照在电子表格上单击右键，可从右击菜单中选择下列选项之一。整个电子表格为图像。将电子表格为图像文件打印。打印电子表格打印选择。仅打印选定的单元格导出到Excel。将文件导出为Excel格式的文件导出为文本文件。将文件导出为文本查找。在电子表格中查找文本排序。通过在“排序”窗口中最多选择三列数据来对电子表格进行排序本章提供有关以独立模式运行CFX96系统或CFX384系统的信息控制面板（如下所示主菜单（第54页实验设置（第55页导出用于分析的数据（第61页创建数据文件（第64页设置电子邮件（第65页控制 热循环仪上的控制面板提供对运行设备所需全部功能的，它使用以下三个组件液晶显示器(LCD)。显示主菜单和其他屏幕键盘。使用这些键导航到屏幕并输入图45显示了控制面板的组件： 字母数字

扩增程自动编写命令 导航USB端（下方功功能图45.热循环仪控制面板独立运控制面板包含五组键，其功能请参见表18：表18.控制面板上的键的功能键功命令选择并运行扩增程选择并更改扩增程查看一个或多个正在运行的扩增程序在扩增程序的图形和文本视图之间切功能F1、F2、F3或屏幕不同，功能键按钮的名称和功能也有所不同字母数1至插入零、（无穷大）或启动立即保小数点输入小数减号输入启动扩增程序自动编写向启动扩增程序自动编写向右向右移动向左向左移动向上向上移动向下向下移动确认取消功能。删除字母、数字或词主菜

注意：要重命名热循环仪，请打开文件库（文件(F2)按钮），然后选择重命名循环仪图46.前面板上的启动屏幕。要启动主菜单中的功能，请按相关的功能键（F1到F4）：登录(F1)。登录到C1000热循环仪。登录后，按钮的名称将更改文件(F2)。查看文件库中的文件和文实用程序(F3)新建扩增程序(F4)。创建新扩增程实验CFX96系统或CFX384系统可以不使用计算机运行实时PCR实验。可以使用USB微型键导出运行期过电子邮件直接发送给您（请参阅第62页的“使用电子邮件导出数据”）。数据需要使用CFXManager软件进行分析。注意：C1000热循环仪最多可以20个实时PCR实验运行独立运在启动屏幕中选择新建扩增程序(F4)，以打开一个新的扩增程序模板（图47）图47.默认的实时PCR扩增程序注意：默认情况下，将CFX96或CFX384光学反应模块插入C1000机箱中时，扩增程序模提示：要更改现有的扩增程序，请按 命令键以打开文件库并选择要编辑的扩增程序要在温度步骤更改目标温度和保持时间，请按箭头键在步骤之间导航并选择参数（温度或时个。提示：可通过00机箱上的BVIW键可以在扩增程序的图形和文本视图之间进行切换。（可选）要插入新步骤，请选择插入(F1)按钮。要删除步骤，请选择删除(F3)按钮（图47）（可选）要更改步骤选项，请选择选项(F4)按钮（图47）。在步骤选项窗口中，选择要更改的参（包括步骤的温度和时间），或在步骤中添加／删除读板（图48）图48.“步骤选项”窗口注意：按字母数字键可以输入一个从1到24oC的梯度范围框，然后多次按字母数字键输入字母或数字，以输入新扩增程序的名称（第56页的图47）。按ENTER以接受该名（第6页的图键可以输入一个新温度。对于CFX96系统，使用105oC的盖温度；对于CFX384系统，使用95oC的盖温度。注意：对盖进行加热可防止密封的反应容器内发生独立运称。使用箭头键选择目标文件夹（图49）。图49.保存扩增程序单击编辑文件名(F1)，然后在框中输入一个新名称（图50）图50.输入扩增程序名称单击保存(F2)（图50）单击运行(F2)以继续并运行扩增程序（图51）图51.扩增程序已成功保存编辑将用于运行的样品体积或盖温度（图52）输入将记录在“运行信息”屏幕中的样品ID或用图52.编辑样品体积和盖温单击确定(F1)独立运选择一种扫描模式，以指示设备在运行期间从哪些通道收集荧光数据（图53）图53扫描模式和数据文件名称。全通道。从CFX96系统上的通道1-5或CFX384系统上的通道1-4收集数据仅限SYBR/FAM。无论哪个系统，仅从通道1收集数据，并提供快速扫描FRET。无论哪个系统，都仅从FRET通道收集数据，并提供快速(.zc)名称。单击确定(F1)按钮以启动运行要更改现有的扩增程序，请按 键以打开文件库并选择要编辑的扩增程序要运行现有的扩增程序，请按 命令键，然后从文件库中选择一个以前保存的扩增程序运行开始后，将显示运行状态窗口。通过查看此窗口中的信息可运行进度或主菜单（图54）。 图54.运行状态导出用于分析的运行结束后，需将荧光数据传输到运行CFXManager软件的计算机进行分析。独立数据文件将自动保存图55.RT_DATA文件夹实时PCR运行可以使用USBP服务器将数据通过电子邮件直接发送到该计算机。注意：C1000最多可以20个实时PCR实验运行使用USB密钥导出数如果已将USB密钥插入C1000热循环仪的USB密钥端口中，则数据(.zpcr)将自动保存到USB密钥 如果运行结束时热循环仪中未插入USB密钥，请按照以下说明操作按主屏幕上的文件(F2)按钮以文件夹独立运使用向上和向下箭头键导航到RT_DATA文件夹，然后按向右键打开此文件夹使用向上和向下键选择按导出文件(F1)按钮，将运行数据(.zpcr)的副本导出到USB密钥，如图56所示图56将独立运行数据导出到USB密钥使用箭头键导航到USB上保存文件的文件夹单击是(F1)确认导出（图57）图57.确认导出到USB密钥您（请参阅第65页的“设置电子邮件”）。要在运行结束时发送附带数据(.zpcr)的电子邮件，请按照以下说明操作保存扩增程序名称或使用Run命令键从文件库中选择扩增程序后，在“运行信息”屏幕中选择(F4)（图58）。图58.“运行信息”屏幕使用箭头键选择发送电子邮件通知选项（图59）图59.选择电子邮件通知单击确定(F1)返回“运行信息”屏使用箭头键导航到电子邮件地址框，然后使用字母数字键输入电子邮件地址名独立运单击确定(F1)继续运行化图60.确认导出到USB密钥创建数据文独立运行数据(.zpcr)需要使用CFXManager软件转换到一个数据文件(.pcrd中，以便进行分析。在软件主窗口中单击并拖动USB密钥 下的.zpcr文件，或从软件主窗口菜单选项中选择文件>打开>独立运行，以选择文件名称。据文件（图61）。图61.指定反应板文件提示：通过加载快速反应板文件，可以快速所有反应孔的数据设置电子邮将以太网缆线连接到C1000机箱背部的端口在主菜单中选择登录(F1)，以管理员登录到热循环仪（第55页的图46）。在主屏幕（第55页的图46）中选择实用程序(F3)以启动“实用程在“实用程序菜单”中，选择5：管理员设置（图62）图62.“实用程序”菜单独立运在“管理员设置菜单”中，选择9：SMTP服务器设置（图62）图63.“管理员设置菜单注意：SMTP服务器名称由您的ISP提供。选择添加服务器名称(F1)（图64）图64.SMTP服务器设置窗口使用虚拟键盘，在文本框中键入服务注意：SMTP服务器名称将使用下列命名规则：SMTP.您的机构名.com。请不要在名称中使 单击保存(F1)以保存SMTP服务器名称（图65）图65.保存服务器名称所添加的服务器名称将会显示在“SMTP服务器名称”下拉菜单中，如图66中所图66.添加的服务器名称选择设置当前服务器(F3)，以将当前服务器设置为用于电子邮件（图66）独立运使用箭头键选择测试当前服务器按钮，然后单击Enter导航按钮（图67）图67.测试当前服务器在文本框中输入电子邮件地址，然后选择测试服务器(F1)（图68）图68.输入电子邮件地址，以测试当前服务器C1000热循环仪将会向输入的地址发送一封电子邮件，以测试SMTP服务器配置PCFXManr软件或C1000机箱以电子邮件的形式发送数据文件和／或报(MB)设置为最大5兆(MB)或更大。本章提供有关数据分析的信息“数据分析”窗口（如下所示“定量”选项卡（第72页反应孔编组（第73页数据分析设置（第73页反应孔选择器（第75页图表（第78页电子表格（第79页“数据分析除查看和分析的数据。CFXManager软件将在每次运行结束时自动处理实时PCR数据，并打开“数据分析”窗口以显示这些数将数据文件（扩展名为.pcrd）拖到软件主窗口上方，然后将其释放在软件主窗口中选择文件>打开>数据文件，然后在窗口浏览器中选择文件在软件主窗口的中单击数据分析按钮，然后在窗口浏览器中选择文件选择文件>最近的数据文件，从最近打开的10个数据文件中选择文件数据分析概“数据分析”窗口最多显示9个选项卡（图69）。每个选项卡显示用某种特定分析方法分析的图69.“数据分析”窗口中可以显示的所有选项卡“数据分析”窗口中的（图70）提供对重要的数据分析功能的快速图70.“数据分析”窗口中的。表19列出了此中按钮的功能。表19.“数据分析”窗口按名功保保存当前的数据文打打印选定的窗示踪线打开“示踪线样式”窗报打开当前数据文件的报查看／编辑反应打开“反应板编辑器”以查看和编辑反应孔内反应孔编组帮打开软件帮助站点，以获得有关数据分析的信息“数据分析菜单“数据分析”窗口中的菜单栏（图71）提供下列菜单项图71.“数据分析”窗口中的菜单栏表20列出了此菜单栏中各菜单项的功能。表20.“数据分析”窗口中的菜单栏项命功文保保存使用新名称保存文重复实从当前实验中提取扩增程序和反应板文件以重新行退退出“数据分析”窗视运行日打开“运行日志”窗口以查看这些数据文件的运日设分析模为数据中选定的反应孔编组选择“基线扣除”方C(t)测定选择“回归”或“单一阈值”模式，以确定如何每条荧光示踪线的C(t)值基线阈打开“基线阈值”窗口以调整基线或阈示踪线打开“示踪线样式”窗查看／编辑反应打开“反应板编辑器”以查看和编辑反应鼠标显打开或关闭使用鼠标指针同步显示数据的功显示阈显示图表中阈值线的工报打开该数据文件的报导入荧光基团校选择校准文件以应用于当前数据文替换反替换数据分析中的当前反应板文导出所有数据表到将每个选项卡中的所有电子表格视图导出到单独Excel格式的文帮打开软件帮助，以获得有关数据分析的详细信息数据分析概“定选项图72.“数据分析”窗口中的“定量”选项卡布局意：软会每个据析选项中个窗格数。例如如在反应选器视中通将鼠指针在某反应上来显该反孔，会在有其窗格中CFX96系统或CX34系统可以在多个扩增程序步骤中获取荧光数据；软件将单独保留各步骤获取的图3显示所有数据的数据收集步骤数为3。图73.“数据分析”窗口中的“步骤数反应板中的反应以编组为多个子集，以便使用反应孔编组单独进行分析。在“反应板编辑器”（第50图74显示在“反应孔编组”菜单中选定了“组2”。只有该反应孔编组中的反应在反应孔选择器中数据分析设(RFU)示踪线表示某个反应单个荧光基团的数据。可使用这些数据测定单个荧光基团上每个反应孔的))回归。该模式将多变量、非线性回归模型应用于单个反应孔示踪线，然后使用此模型计算最佳C(t)值单一阈值。该模式使用单一阈值并根据各荧光示踪线的阈值交叉点来计算C(t)值数据分析概在单一阈值模式中可调整荧光基团的阈值，方法是单击扩增图表中的阈值线，然后垂直移动鼠标指针。在菜单栏中选择设置>基线阈值，以打开“基线阈通过单击用户定义的并输入一个阈值数来调整荧光基团的交叉阈值（图75）图75.“基线阈值”窗口单击确定确认更改并关闭窗口软件将为每个反应孔分别自动设置基线。在选择了要分析的反应孔后，应检查这些反应的基线设置。打开“基线阈值”窗口（图75）可以更改选定反应孔的默认基线。要打开此窗口，请执行以下操作：选择设置>基线阈值以打开“基线阈值”窗口。按住Ctrl键可选择多个单独的反应孔，而按住Shift键则可选择多个连续的反应孔。为所有选定的反应孔调整基线起点循环和基线终点循环，或在电子表格（图75）单击确定确认更改并关闭窗口的曲线变平滑。此过程的执行目的是使每个C(t)保持不变。反应孔选择通过单击反应孔选择器中的反应孔，可以在“数据分析”窗口的图表或电子表格中显示或隐藏相应数据单击反应板的左上角可隐藏所有反应孔。再次单击左上角可显示所有反应显示。如图76中所示，反应孔选择器显示下列三种类型的反应孔：数据分析概空反应孔（深灰色）。这些反应在“反应板编辑器”窗口中加载图76.反应孔选择器中显示的三种反应孔颜右键单击任何反应孔选择器视图均可选择表21 表21.反应孔选择器中的右键单击菜单项选功将反应孔的内容到剪贴板，包括样品类型和可选的重复编号为图将反应孔选择器视图为图打印打印反应孔选择器视打印选择打印当前导出到将数据导出到Excel电子要从数据分析中暂时排除任何反应孔，请按照以下说明操作右键单击选在反应孔选择器中、荧光示踪线上或标准曲线的某一点上右键单从菜单选项中选择从分析中排除XX反应孔图77.右键单击以从分析中排除反应孔注意：从右键单击菜单中取消选择从分析中排除 反应以重新包含该反应孔“反应板编辑器选单击“数据分析”窗口上的查看／编辑反应板按钮在反应孔选择器视图中选择一个或多个反应孔图78.窗格底部的“在分析中排除反应孔”复选数据分析概反应孔带有一个星号(*)标记。图79.在反应板编辑器中排除的反应孔（带有*标记）应内容。警告！必须重新输入已清除的反应孔内容。图示方式或轻松地从图表导出数据（表22）。表22.图表的右键单击菜单选功将图表到剪贴将图像另存为以选定的图像文件类型保存图表图像。可选择下列（默认）、GIF、JPG、TIF或BMP页面设置预览并选择页面设置以进行打打印打印图显示当鼠标移至图表中某个点的上方时显示点将坐标尺设置为默认在放大图表后返回到默认图表视图表选项打开“图表选项”窗口以更改图表，包括更改标题、选择X和Y坐注意：适用于特定图表的菜单项将在下一章““数据分析”窗口”（第81页）予以说明电子“数据分析”中显示的电子表格包括用于对数据进行排序和传输的选项。可通过下列方法之一对列排序单击某列并将其拖到选定表中的新位置单击列标题，以升序或降序对数据排序要在“排序”窗口中对最多三列数据进行排序，请按照以下步骤操作在电子表格上单击右键以打开菜单并选择排序在“排序”窗口中，选择要排序的第一列的标题。以升序或降序对数据排序通过在下拉菜单中选择标题来选择多个列标题。选择升序或降序，以按该顺序对列排序单击确定对数据排序，或单击取消停止排序右键单击任何电子表格视图均可选择表23 表23.电子表格的右键单击菜单项选功子表格（如Excel）中。为图将电子表格视图为图像文件，并将其粘贴到接受图像文（如文本、图像或电子表格文件）的文件中打印打印当前打印选择打印当前导出到将数据导出到Excel电子导出为文本文件将数据导出到文本编辑导出为将数据导出到Xml文导出为将数据导出到Html文查找搜索文排序对最多三列中的数据排数据分析概本章提供有关“数据分析”窗口中的选项卡的详细信息“定量”选项卡（如下所示“定量数据”选项卡（第84页“熔解曲线”选项卡（第87页“熔解曲线数据”选项卡（第89页“终点”选项卡（第91页“等位分型”选项卡（第93页“QC”选项卡（第93页“运行信息”选项卡（第96页数据文件报告（第97页“定选项扩增图表。显示每个反应孔在每次循环中的相对荧光单位(RFU)。图表中的每条示踪线表示某个反其中包含根据起始模板量的对数值进行绘制的阈值循环。图例显示具有标准样品类型的反应每个荧光基团的反应效率(E)。反应孔选择器。选择具有您要显示的荧光数据的反“数据分析”窗电子表格。显示在选定的反应收集的数据的电子表格图80.“数据分析”窗口中的“定量”选项卡布局（图81图81选定FAM的荧光基团选择器要打开此窗口，请按照以下步骤操作从扩增图表下方的荧光基团选择框（图81）中仅选择一个荧光基团单击“数据分析”中的示踪线样式按钮，或选择“数据分析”菜单栏中的设置>示踪线样式图82.“示踪线”样式窗口使用“示踪线样式”窗口中的工具调整示踪线的外观，并在窗口底部的反应孔选择器中预览所做的更改单击“颜色”列中的框可为反应孔选择颜色从“符号”列的下拉菜单中选择一个符号单击显示内容可显示每个反应的样品类型；单击显示符号则可显示每个反应选定的符号。单击删除符号以从所有反应删除所有添加的符号单击恢复默认颜色以返回到默认的示踪线颜色单击扩增图表底部的对数坐标尺框，可查看半对数坐标尺的荧光示踪线，如图 中所示图83.扩增图表中选定的“对数坐标尺”选项“数据分析”窗建标准曲线图表（图84）。图84.标准曲线图表标准曲线图表可显示下列信息每条曲线的名称（荧光基团名称每个荧光基团的颜反应效率(E)。可使用这些统计信息优化多重反应，并均化标准曲线的数测定系数，R2（写作R^2）。此统计信息可用于确定线条描述数据的准确性（拟合度）表24.扩增图表的特定右键单击菜单选菜单功显示显示图表中每条扩增曲线的阈示踪线样式基线阈值表25列出了在“定量”选项卡右下方的电子表格中显示的数据类型：表25.“定量”选项卡中的电子表格内容信描反应板中的反应孔位荧检测到的荧内在反应板编辑器中加载的样品类型（必需）和重复编号（可选）样在反应板编辑器的反应加载的样品名每条示踪线的阈值循“定量数据选项结果。显示数据的电子表格视图反应板。将每个反应的数据的视图显示为反应板图RFU。选择该电子表格以显示每次循环中每个反应的RFU数量。提选择结果电子表格（图85）可查看反应板中每个反应孔的数据图85.选定结果电子表格的“定量数据”选项卡复组。计算将对重复组中每个反应孔的C(t)值取平均值。结果电子表格包含表26中列出的信息类型。表26.结果电子表格内容信描反应板中的反应孔位荧检测到的内样品类型和重复编“数据分析”窗表26.结果电子表格内容（续信描目扩增目标名称（样样品描阈值循环阈值循C(t)重复组阈值循环的平均C(t)标准偏重复组阈值循环的标准偏起始模板量目标的起始模板量的估计起始模板量的对数起始模板量的对数SQ起始模板量的平均SQ标准偏起始模板量的标准偏某个梯度步骤的反应的样品温样品一轮变性、退火和延长，或扩增程序中的一轮退火和延长步骤可选择每个荧光基团。图86显示了反应板图形式的反应板电子表格。图86.“定量数据”选项卡中的反应板电子表格信描内样品类型和重复编样样品描副本样品中目标的起始编相对荧光 信描内样品类型和重复编样样品描副本样品中目标的起始编相对荧光RFU电子表选择FU电子表格可查看在实验的每次循环中获取的每个反应孔的RFU（图7。图87.“定量数据”选项卡中的RFU电子表格RFU电子表格包含表28中显示的信息类型。表28.RFU电子表格内容信描反应孔编反应孔数据，根据反应板中所有已加载的反应孔的位置循一轮变性、退火和延长，或扩增程序中的一轮退火和延长步骤“熔解曲线选项度可见峰，并表示双链DNA复合体的Tm。软件将在熔解曲线期间收集的RU条每峰指始结束。域限解条置。于条最打开“熔解曲线”选项卡（图88）可确定扩增PCR产品的熔解温度(Tm)。该选项卡以下列四种视图显熔解曲线。查看每个荧光基团的实时数据，将其作为每个反应孔在每一温度下的相对荧光(RFU)熔解峰。查看每个反应孔在每一温度下的RFU数据的负回归反应孔选择器。选择反应显示或隐藏数据峰电子表格。查看在选定的反应收集的数据的电子表格选项卡（第89页）。“数据分析”窗图88.“数据分析”窗口中的“熔解曲线”选项卡布局可通过下列任意方法调整熔