考研包16116植物134课件小实验

植物组织中SOD活性测定植物呼吸酶的简易测定法

在低温下发生皂化反应的叶绿体色素溶液，易出现白色絮状物，溶液混浊。加热后，混浊消失。当充分混匀后，静置2-3小时后，混浊消失，苯层和稀酒精层分开。（图1皂化与未皂化的叶绿体色素）图2，先加入苯与95％乙醇混匀,后加入蒸馏水再混匀。图3，图2中的试管静置2小时后澄清分层，上层为苯层，下层为稀酒精层。油（有机相）被分散在水（无机相）中，形成了乳化液图1图2图3为什么有少量的叶黄素溶在酒精层？叶黄素是胡萝卜素衍生的醇类(-OH)，在苯和乙醇中的分配系数不同。我们在试验中加入了苯和水，大部分叶黄素溶于苯层中，有少部分溶于稀酒精溶液中。

类胡萝卜素的吸收光谱

叶绿素的吸收光谱

可见光连续光谱叶绿素定量测定问题分别计算Ca、Cb，CT,计算叶绿素a、b以及总叶绿素的含量，单位：mg/g鲜重结论思考题叶绿素含量(mg/g鲜重)=CT

×提取液总量×稀释倍数样品重(g)×1000OD>0.8要稀释，并说明稀释方法CT：两种方法，两者不完全相等，原因？更换波长时，应重新调0、100?植物呼吸酶的简易鉴定法一、去氢酶是呼吸链中参与电子和氢传递的重要酶之一，包括烟酰胺脱氢酶和黄素脱氢酶。还原型的黄素脱氢酶可被某些试剂氧化。E-FADH2+甲烯蓝E-FAD+甲烯白材料：马铃薯注意：看结果时间块切得大小适中。试管中不加水煮，煮透!液体石蜡层可以稍厚些二、氧化酶－多酚氧化酶

材料：马铃薯、黄瓜注意：勿使黄瓜、马铃薯相互污染R(OH)2+1/2O2RO2+H2O多酚氧化酶三、过氧化物酶H２O2+R(OH)2POD2H２O+RO2

材料

——直接使用上述实验中不能使邻苯二酚氧化的材料(黄瓜或马铃薯)继续实验，不需要再次切取材料。四、过氧化氢酶H２O2+H２O2CAT2H2O+O2材料——马铃薯将所有的材料切好，所有需要煮沸的试管用橡皮筋捆绑在一起，放进沸水锅中煮沸至少20分钟。试管中不加水！注意防烫结果描述观察到的现象.要求:全面、

准确。讨论对观察到的现象进行分析、讨论,即为什么会出现这样的现象(说明存在什么酶、酶的作用机理)?其他实验相关问题的讨论植物组织中SOD酶活性的测定

活性氧干旱温度空气污染重金属病虫害土壤pH盐碱胞质蛋白损伤DNA损伤脂类过氧化O2·、H2O2、·OH、1O2防御系统

酶促防御系统（SOD，CAT，POD,etc）非酶促防御系统

(VA，VC，VE，etc)SOD，CAT，POD超氧化物歧化酶（SOD）：

+2H+SODH2O2+O2O2∙O2∙+材料

小麦：1号，2号SOD活性测定----NBT法核黄素

＋NBT蓝色甲腙560nm有最大吸收SODO2∙·原理粗酶液提取：0.5g小麦叶片预冷的提取液约2ml冰浴上研麿离心管中定容至10ml

4℃下离心（13,000g）20min上清液即为酶提取液，吸取1ml上清液于1.5ml离心管中，置于冰浴中待测二、步骤配平单号组1号样品双号组2号样品试剂名称用量（ml）0.05mol/L磷酸缓冲液(pH7.8)1.5130mmol/LMet溶液0.3750μmol/LNBT溶液0.3100μmol/LEDTA－Na2液0.320μmol/L核黄素0.3酶液（或缓冲液）0.1（对照加缓冲液代替）蒸馏水0.5总体积3.3最后加核黄素

取4支试管，加入相应试剂，混匀，1支对照管用黑纸罩着，与其它各管同时置于光下反应，温度25－35℃，20min。磷酸缓冲液0.1ml，暗空白，调0,调100磷酸缓冲液0.1ml，光照A0小麦样品1号粗酶液0.1ml光照As小麦样品2号粗酶液0.1ml光照As三、SOD活性测定与计算反应结束后，用黑袋罩上各试管，终止反应。分别在560nm波长下测定各管的吸光度（A0－As）×VTSOD活性＝――――――――――×稀释倍数

A0×0.5×W×V1SOD活性以每克鲜