(5)-1-6．色谱分离方法-按原理不同进行分类

天然药物化学色谱分离法——按原理不同进行分类色谱法又称为层析法，是一种分离技术。色谱法是一种重要的分离分析方法，它是根据组分在两相中作用能力不同达到分离目的。其中的一相固定不动，称为固定相；色谱分离法——按原理不同进行分类另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体，称为流动相。固定相固体液体（担体或支持剂）——分配色谱流动相液体——液相色谱气体——气相色谱液液分配色谱分配色谱法吸附色谱法凝胶色谱法离子交换色谱法按色谱原理不同分类色谱分离法——按原理不同进行分类液-液分配柱色谱(层析)法：将两相溶剂中的一相涂在硅胶等多孔载体上，作为固定相，填充在色谱管中，然后加入与固定相不相混溶的另一相溶剂冲洗色谱柱。物质在两相溶剂中作相对逆流移动，进行动态分配而得到分离的方法。色谱分离法——按原理不同进行分类正相色谱：固定相为强极性溶剂，流动相为弱极性有机溶剂，主要用于分离极性及中等极性化合物。流动相采用乙酸乙酯、正丁醇等。反相色谱：固定相为弱极性溶剂，流动相为强极性有机溶剂,主要用于分离非极性及中等极性化合物。流动相采用甲醇水等。根据流动相的极性分类：加压液相柱色谱法原理：常用的液-液分配柱色谱法中用的载体（如硅胶）颗粒较大，流动相仅靠重力作用自上而下流过色谱柱，流动相依靠人工分段收集，柱效低，且比较费时。加压液相色谱：用的载体颗粒直径小、机械强度大、比表面高，因此柱效高。加压液相色谱分为：低压液相色谱（LPLC）中压液相色谱（MPLC）高压液相色谱（HPLC）色谱分离法——按原理不同进行分类低压和中压柱层析（LPLC、MPLC）根据加压液相色谱原理，采用薄层层析硅胶（氧化铝或反相键合相硅胶等），在0.5~5kg（低压）或5~50kg（中压）下进行柱层析，分离效果可以和薄层层析相媲美。色谱分离法——按原理不同进行分类高效液相色谱法（HPLC）特点：压力大，一次上样量大，柱效高、分离速度快，重现性好。一次实验4-8小时内完成。分离范围广，对挥发性差或遇热不稳定的成分及某些高分子化合物分离极为有利。因为主要采用反相键合相，对皂苷类等成分的分离效果非常好。色谱分离法——按原理不同进行分类在天然药物化学成分分离过程中，吸附现象应用较多，尤其是固-液吸附。吸附层析分类物理吸附化学吸附半化学吸附(二）根据物质的吸附性差别进行分离1物理吸附（又称表面吸附）基本原理：吸附与解吸附往复循环的过程。吸附解吸附吸附解吸附直至分离常见的吸附剂极性的吸附剂：硅胶、氧化铝、大孔树脂非极性吸附剂：活性炭基本原理：通过产生化学反应进行吸附。酸性物质与氧化铝吸附：如黄酮等酚性物质被碱性氧化铝吸附；碱性物质与硅胶吸附：如生物碱被酸性硅胶吸附；2化学吸附3半化学吸附基本原理：通过氢键的形式进行吸附。常用的吸附剂：聚酰胺应用范围：主要用于醌类、黄酮等成分的分离。（三）根据物质的分子大小差别进行分离又称为分子筛层析（凝胶层析、排阻色谱）基本原理：利用凝胶的分子筛原理和化合物的分子大小差别分离化合物，按分子大小顺序先后流出并得到分离。分离物质范围：多糖、蛋白质、苷和苷元的分离。常用凝胶种类：葡聚糖凝胶（SephadexG）、羟丙基葡聚糖凝胶（SephadexLH-20）凝胶色谱分离示意图具有酸性、碱性及两性的化合物分子，在水中多呈解离状态。碱（阴）性离子交换树脂酸（阳）性离子交换树脂装柱注意事项:装柱前必须充分溶胀。（四）根据物质的解离程度不同进行分离基本原理：利用酸碱性化合物在解离状态时，与阴、阳离子发生交换的原理进行分离。

示例离子交换树脂分离生物碱的过程（1）吸附生物碱盐阳离子被阳离子交换树脂吸附R-AlKH++H+R=树