自身抗体的检测课件

自身抗体的检测

及应用

2012.9.19抗核抗体（ANA）的检测与临床应用

抗核抗体的定义传统定义：针对细胞核成分抗原总称。广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成份，而是指核质和核蛋白的总称。ANA测定原理和方法：间接免疫荧光法（IIF):现多以Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极大地提高了ANA检测的阳性率和滴度。是系统性红斑狼疮（SLE）的标准筛选试验。我们实验室采用欧蒙荧光检测系统，将1:100作为血清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:100阳性，只能视为一个临界可疑值，临床意义不大。ANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。ANA检测的临床意义

ANA可见于多种自身免疫性疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织疾病的诊断，病情判断和疗效观察的指标已证实ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间，其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低，为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类型风湿病意义重大。⑴SLE活动性：占95%-100%，非活动性：占80%-100%。（2）药物诱导的SLE：占100%。（3）混合性结缔组织疾病：占100%。（4）其它风湿性疾病：占20%-50%

（5）进行性系统硬化症：占85%-95%。（6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。（7）干燥综合征：占70%-80%。（8）慢性活动性肝炎：占30%-40%。（9）溃疡性结肠炎：占26%。常见疾病ANA（＋）的原因风湿性疾病SLE多发性肌炎干燥综合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性＞男性，出现率随年龄而增加风湿性疾病患者亲属？孕妇药物诱导慢性肝脏疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系统异常恶性肿瘤SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释

技术方面临床方面经皮质激素或免疫抑制剂治疗。终末期肾病。隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组织。由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。ANA的荧光染色型别细胞核：核均质型（DNA、组蛋白和核小体等）核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白）核膜型（板层素、gp120等）核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）细胞浆：胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：核颗粒型：核粗颗粒型抗核抗体染色类型核仁型（nucleolar）均质性（homogeneous）抗双链DNA抗体（ds-DNA）

的检测与临床应用

检测：测定抗ds-DNA以血鞭毛虫属的绿萤短膜虫为靶抗原基质，可联合使用HEp-2细胞及灵长类肝组织检测。

自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。抗dsDNA抗体荧光模式：绿蝇短膜虫：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。Hep-2细胞：细胞核的均质型荧光。抗体水平与疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗ds-DNA抗体滴度可以下降或消失。

ANA谱3检测及临床应用抗RNP/Sm抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核粗颗粒，核仁阴性。肝组织切片：同上。荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。抗SSA／SSB抗体荧光模式Hep-2片：细胞核呈细颗粒荧光，核仁不发光。肝组织片：细颗粒荧光。抗SSA／SSB抗体自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。抗Scl-70抗体自身抗原：为DNA拓扑异构酶1，分子量为100KD。在DNA双链的复制和转录中起作用。临床意义：25~70%的系统性硬化症（PSS）弥漫型患者阳性，局限型硬皮病患者阴性。细胞浆阳性胞浆均质型---抗核糖体抗体细颗粒---抗Jo-1抗体

胞浆颗粒型粗颗粒---AMA抗体滴状点状---溶酶体抗体核周颗粒--高尔基体抗体胞浆纤维型细纤维---波形蛋白抗体环状纤维---原肌球蛋白抗体针状纤维---肌动蛋白抗体抗核糖体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆细颗粒到均质状、非常致密的荧光。肝组织片：岛状荧光。临床意义：SLE的特异性抗体，与精神症状有关。抗Jo-1抗体荧光模式：Hep-2：胞浆颗粒到细块状荧光。肝组织片：胞浆中弱荧光。自身抗原：组氨酰tRNA合成酶。临床意义：见于PM，发生率25~35%。抗线粒体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆内粗的颗粒型荧光。大鼠肾组织切片：肾小管明显荧光，肾小球荧光较弱。抗线粒体抗体自身抗原：位于真核细胞线粒体膜的内面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原，其中与PBC有关的包括：（1）丙酮酸脱氢酶复合体（PDC）（2）支链2-氧酸脱氢酶复合体（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脱氢酶复合体（OGDC）抗线粒体抗体临床意义：AMA-M2对PBC具有诊断意义。AMA亚型与疾病的相关性：AMA-1：梅毒、干燥综合征AMA-2：PBCAMA-3：药物性红斑狼疮AMA-4：PBC与AIH重叠AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性贫血AMA-6：异烟肼引起的药物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、闭塞性血栓性血管炎AMA-9：药物性肝炎AMA-10：SLE分裂期细胞阳性染色体阳性---染色体相关抗体，相关疾病？纺锤体纤维阳性---纺锤体纤维抗体，如燕麦细胞型支气管肺癌中间体阳性---中间体抗体，相关疾病？细胞两极阳性---中心粒抗体，相关疾病？着丝点阳性---抗着丝点抗体抗着丝点抗体(ACA)荧光模式：Hep-2：细胞核细的、相同大小的颗粒荧光，分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。肝组织片：分布于细胞核的10~20个颗粒，荧光弱，易被忽略。抗着丝点抗体自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A、B、C，主要抗原为着丝点蛋白B。临床意义：对进行性系统性硬化症亚型（CREST综合征）有诊断意义。阳性率80~95%。还可见于PBC、SS等。器官/组织特异性自身抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗平滑肌抗体抗角蛋白抗体抗肝肾微粒体抗体抗肝细胞膜抗原抗体抗可溶性肝抗原抗体抗肝特异性蛋白抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）cANCA荧光模式：猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。甲醛固定的中性粒细胞：胞浆内粗大到细的荧光颗粒。抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）自身抗原：为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。该靶抗原为可溶性蛋白，存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengener’s肉芽肿，约占ANCA阳性率的80~95%。cANCA被认为是活动性Wengener’s肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）pANCA荧光模式：乙醇固定的中性粒细胞：细胞核周围平滑的带状荧光，细胞核阴性。猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）自身抗原：主要抗原为髓过氧化物酶（MPO），其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。临床意义：见于多种系统性血管炎。可见于Wengener’s肉芽肿、微多动脉炎、Churg-Strauss综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风湿病（RA、SLE、SS、PM/DM）。抗平滑肌抗体（SMA）荧光模式：大鼠胃组织，呈现肌膜、黏膜肌层和肌膜腺体间收缩纤维的明显细胞浆荧光。大鼠肾组织，肾小管细胞内原纤维、肾小球膜细胞及血管肌层的荧光。抗平滑肌抗体（SMA）自身抗原：主要的靶抗原为肌动蛋白，肌动蛋白可以单体（G-肌动蛋白）或聚合体（F-肌动蛋白）形式存在于微丝中，F-肌动蛋白自身抗原与自免肝关系密切，而G-肌动蛋白自身抗原则与酒精性肝硬化有关。临床意义：见于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。抗角蛋白抗体（AKA）荧光模式：大鼠食管，仅限于上皮角质层的较强的线性分层的均质荧光。抗角蛋白抗体（AKA）自身抗原：丝聚蛋白（filaggrin）为AKA的靶抗原。临床意义：见于RA，阳性率36~59%，特异性95~99%。还是一个潜在的预后标志，高抗体滴度可能预示着较严重的RA类型。抗肝肾微粒体抗体（LKM）有三种荧光模式：LKM-1：肝细胞胞浆明显荧光，呈细颗粒到均质状，肾脏近近端肾小管有荧光。LKM-2：门静脉周围的肝组织荧光比其他部位强，肾脏近近端肾小管有荧光。LKM-3：肝和肾均为阴性，灵长类睾丸间质细胞荧光明显。抗肝肾微粒体抗体（LKM）自身抗原：LKM-1：细胞色素P450ⅡD6，为50KD蛋白。LKM-2：细胞色素P450同工酶，药物替尼酸的结合部位LKM-3：UDP葡萄糖醛酸基转移酶，为55KD蛋白。临床意义：自免肝按血清学分型可分为三型Ⅰ型：出