梗阻性黄疸的微观机制

梗阻性黄疸的微观机制第1页，共36页，2023年，2月20日，星期五肝脏切面镜下视图第2页，共36页，2023年，2月20日，星期五肝细胞电镜下视图第3页，共36页，2023年，2月20日，星期五相邻肝细胞示意图第4页，共36页，2023年，2月20日，星期五肝细胞的紧密连接第5页，共36页，2023年，2月20日，星期五肝内解剖学关系第6页，共36页，2023年，2月20日，星期五胆树内胆管细胞的不均一性第7页，共36页，2023年，2月20日，星期五毛细胆管胆汁分泌的转运系统第8页，共36页，2023年，2月20日，星期五独特的作用机制改善患者的情绪大作用大机制安全性好保护肝细胞膜保护细胞骨架抗氧化，减少肝细胞损伤解毒，抵抗有害物质对肝细胞的损害修复肝细胞，改善膜流动性，提高Na+－K+-ATP酶活性，修复细胞骨架等，改善肝细胞功能促进肝细胞再生抗肝纤维化，延缓肝病进程增加胰岛素敏感性，改善脂质代谢CFDA批准用于妊娠期肝内胆汁淤积转甲基转硫基转丙氨基TeodoroBottiglieri.S-Adenosyl-L-methionine(SAMe):fromthebenchtothebedside—molecularbasisofapleiotrophicmolecule.AmJClinNutr,2002;76(suppl):1151s-7s腺苷蛋氨酸——独特360多重作用第9页，共36页，2023年，2月20日，星期五内容纲要3：三大作用机制6：六重临床获益作用0：良好的临床安全性第10页，共36页，2023年，2月20日，星期五SAMe是存在于人体组织的一种生理活性分子SAMe是存在于人体组织的一种生理活性分子，是由SAMe合成酶催化蛋氨酸和ATP而合成的。S-腺苷甲硫胺酸的结构思美泰说明书甲基供体硫基供体丙氨基供体第11页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的代谢途径12ATP腺苷蛋氨酸蛋氨酸PPi去羧基腺苷蛋氨酸腐胺亚精胺精胺亚精胺转丙氨基5’甲硫腺苷CH3磷脂、神经递质DNA、蛋白质转甲基VB12四氢叶酸甲基四氢叶酸S腺苷同型半胱氨酸半胱氨酸转硫基胱硫醚半胱氨酸谷胱甘肽硫酸根TeodoroBottiglieri.AmJClinNutr,2002;76(suppl):1151s-7s.解毒，抗氧化促进正常肝细胞再生合成磷脂酰胆碱维持Na+-K+-ATP酶活性调节细胞膜流动性第12页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的三大机制腺苷蛋氨酸甲基化合物调节细胞膜流动性聚胺合成(如亚精胺+精胺)促进肝细胞再生转硫基还原型谷胱甘肽解毒，抗氧化转甲基转丙氨基3大机制机制终产物作用1.AnsteeQM,DayCP.S-adenosylmethionine(SAMe)therapyinliverdisease:Areviewofcurrentevidenceandclinicalutility.JHepatol.2012;57:1097-11092.LuSC,MatoJM.S-adenosylmethionineinliverhealth,injury,andcancer.PhysiolRev.2012;92:1515–1542

3.WilliamsAL,

GirardC,

JuiD,

etal.S-adenosylmethionine(SAMe)asTreatmentforDepression:ASystematicReview.ClinInvestMed.2005;28(3):132–139.4.思美泰产品说明书，H20140261第13页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的转甲基作用腺苷蛋氨酸CH3激素神经递质细胞膜磷脂核酸蛋白磷脂酰胆碱的合成膜磷脂的甲基化维持Na+－K+ATP酶活性改善细胞膜的流动性，促进胆汁分泌第14页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的转硫基作用腺苷蛋氨酸腺苷同型半胱氨酸谷胱甘肽硫酸盐同型半胱氨酸牛磺酸半胱氨酸CH3抗氧化胆汁酸的摄取胆汁分泌第15页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的转丙氨基作用鸟氨酸腐胺亚精胺精胺腺苷蛋氨酸腺苷蛋胺MTA腺苷蛋氨酸腺苷蛋胺MTAMTA：5-脱氧5-甲基硫代腺苷促进正常肝细胞再生第16页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的六大作用抗氧化，减少肝细胞损伤解毒，抵抗有害物质对肝细胞的损害修复肝细胞，改善膜流动性，提高Na+－K+-ATP酶活性，修复细胞骨架，改善肝细胞功能促进肝细胞再生抗肝纤维化，延缓肝病进程增加胰岛素敏感性，改善脂质代谢第17页，共36页，2023年，2月20日，星期五*P<0.05

vs单用乙醇组Cabrales-RomeroMdelP,Márquez-RosadoL,Fattel-FazendaS,etal.S-adenosyl-methioninedecreasesethanol-inducedapoptosisinprimaryhepatocyteculturesbyac-JunN-terminalkinaseactivity-independentmechanism.WorldJGastroenterol.2006March28;12(12):1895-1904腺苷蛋氨酸显著降低经乙醇处理肝细胞的ROS水平******腺苷蛋氨酸的六大作用-抗氧化，减少肝细胞损伤活性氧物质（ROS）ROS水平变化百分比（%）第18页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的六大作用—解毒，提高内源性血清谷胱甘肽水平，抵抗氧化应激TeodoroBottiglieri.S-Adenosyl-L-methionine(SAMe):fromthebenchtothebedside--molecularbasisofapleiotrophicmolecule.AmJClinNutr,2002;76(suppl):1151s-7s.解毒，抗氧化腺苷蛋氨酸腺苷同型半胱氨酸同型半胱氨酸CH3谷胱甘肽DNA甲基化与自由基和重金属结合半胱氨酸转化为无毒物质，排出体外转硫基作用腺苷蛋氨酸，修复肝细胞，促进内源性谷胱甘肽的生成，持续解毒抗氧化。第19页，共36页，2023年，2月20日，星期五王雪明,魏荣,李楠等.腺苷蛋氨酸治疗药物性肝损害疗效与血液中GSH变化关系.中国基层医药.2002；9(6):497-498用腺苷蛋氨酸对14例因各种药物引起的肝损害患者给予治疗，连续静脉给药800mg/d，3周。观察谷胱甘肽水平变化情况6.217.40123456789治疗前治疗4周后GSH(mmol/L)腺苷蛋氨酸的六大作用—解毒，提高内源性血清谷胱甘肽水平，抵抗氧化应激第20页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的六大作用—改善膜流动性，

提高Na+－K+-ATP酶活性三组大鼠对照组n=6结晶氨基酸组n=6结晶氨基酸+思美泰组n=6结果：结晶氨基酸组胆汁流动及Na+-K+-ATP酶活性较对照组均显著降低（P均<0.05），而加入思美泰后可恢复其胆汁流速及Na+-K+-ATP酶活性，提示思美泰通过保护细胞膜脂质环境维持正常肝脏细胞膜Na+-K+-ATP酶活性而改善胆汁形成和/或分泌。BelliDC,FournierLA

,LepageG,etal.S-adenosylmethioninepreventstotalparenteralnutrition-inducedcholestasisintherat.journalofHepatology1994;21:18-23**P＜0.025，VS

control及Travasol+SAMe***P＜0.005，VS

control及Travasol+SAMeTravasol:结晶氨基酸溶液第21页，共36页，2023年，2月20日，星期五没有腺苷蛋氨酸

预处理的细胞图片可观察到：随着环孢霉素A浓度的增高，细胞内结构遭受严重破坏（细胞内结构不透明，呈现白色模糊状）；肌动蛋白含量较正常对照组显著下降，表明细胞骨架也遭受破坏。次毒覃环肽荧光素标记的F-肌动蛋白微丝，共聚焦显微镜图片IreneD.Roma´N,GeraldD.Johnson,RogerColeman.S-Adenosyl-L-MethioninePreventsDisruptionofCanalicularFunctionandPericanalicularCytoskeletonIntegrityCausedbyCyclosporinAinIsolatedRatHepatocyteCouplets.Hepatology.1996;24(1):134-140无SAMe预处理腺苷蛋氨酸的六大作用—有效保护细胞骨架——微丝CyA组(100nmol/L）CyA组500nmol/LCyA组500nmol/LCyA组(100nmol/L）对照组经过腺苷蛋氨酸

预处理的细胞图片可观察到：细胞内结构显影透明，说明胞膜完整，胞内结构没有受到破坏。还有，肌动蛋白含量和正常对照组类似。说明腺苷蛋氨酸

有效保护细胞骨架功能。1mmol/LSAMe

预处理15分钟后微丝是细胞骨架组成部分。此研究中F-肌动蛋白微丝含量由双细胞连接处荧光量/总荧光量算得。第22页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸的六大作用

保护细胞骨架——微管2h亚砷酸钠10μMSAMe17nM对照SAMe亚砷酸钠亚砷酸钠+SAMe亚砷酸钠处理的细胞微管形态紊乱；同时用腺苷蛋氨酸处理的细胞则保留有正常的微管形态，同正常对照组。成纤维细胞荧光显微镜人体细胞实验中腺苷蛋氨酸逆转亚砷酸钠和其他细胞骨架损伤物质引起的微核形成。RamírezT,

García-MontalvoV,

WiseC,etal.S-Adenosyl-L-Methionineisabletoreversemicronucleus

formation

induced

by

sodium

arsenite

and

other

cytoskleton

disrupting

agents

in

cultured

human

cells.J

MutatRes.2003Jul25;528(1-2):61-74第23页，共36页，2023年，2月20日，星期五MilanHolecˇeka,FrantisˇekSkopeca,LudeˇkSˇpronglb.InfluenceofButhionineSulfoximine,S-AdenosylmethionineandGlutathioneonLiverRegenerationFollowingPartialHepatectomy.Arzneim.-Forsch./DrugRes.2000;50(II):1093-1098腺苷蛋氨酸的六大作用——促进肝细胞再生***Δ*ΔΔ***Δ#ΔΔΔSAMe在早期即显著增加肝细胞有丝分裂活性，

而外源性GSH反而抑制肝细胞再生PH：部分肝切；B：缓冲液;SAM：腺苷蛋氨酸;GSH,：谷胱甘肽;BSO：丁硫氨酸亚砜胺*P<0.05，

vs.剖腹手术ΔP<0.05，vsPH+B#P<0.05，PH+BSO+GSH或PH+BSO+SAMevsPH+BSO*第24页，共36页，2023年，2月20日，星期五25腺苷蛋氨酸对初代培养的肝星状细胞形态学的影响未处理对照培养液培养4d添加5mM腺苷蛋氨酸培养4d肝星状细胞活化增殖肝星状细胞趋于静止MatsuiH,KawadaN.EffectofS-adenosyl-l-methionineontheactivation,proliferationandcontractionofhepaticstellatecells.EuropeanJournalofPharmacology.2005;509:31–36从完整鼠肝中分离的新鲜肝星状细胞用加入10%胎牛血清/DMED(二甲基甲酰胺)培养24小时后，分为对照组和处理组继续培养。a图：未处理对照培养液培养4d；b图：添加5mM腺苷蛋氨酸培养4d腺苷蛋氨酸的六大作用—延缓纤维化进程

——抑制肝星状细胞的活化第25页，共36页，2023年，2月20日，星期五1.ZhenyuanSong,ShirishBarve,TheresaChen.S-adenosylmethionine(SAMe)modulatesendotoxinstimulatedinterleukin-10productioninmonocytes.AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol.2003;284:G949–G9552.李丹,张丽娟,陈治新.实验性大鼠肝纤维化进程中TNF一01、IL．6与IL一10的作用.世界华人消化杂志.2001;(9):1242-1245*P<0.05腺苷蛋氨酸组IL-10浓度明显增高*腺苷蛋氨酸的六大作用—抗纤维化——提高IL-10浓度在RAW264.7的胞株中，使用脂多糖刺激后，观察加入/不加入腺苷蛋氨酸后IL-10水平。注：IL-10主要由TH2细胞，巨噬细胞，星状细胞，肝细胞等产生，有证据表明IL-10通过多种途径阻止纤维化进程，予以外源性IL-10对CCL4诱导的肝纤维化有明显的拮抗作用。IL-10：白介素-10*第26页，共36页，2023年，2月20日，星期五1.HenarHevia,1MartaVarela-Rey,1FernandoJ,etal.5-MethylthioadenosineModulatestheInflammatoryResponsetoEndotoxininMiceandinRatHepatocytes.HenarHevia,HEPATOLOGY.2004;39(4):1088-10982.李丹,张丽娟,陈治新.实验性大鼠肝纤维化进程中TNF一01、IL．6与IL一10的作用.世界华人消化杂志.2001;(9):1242-1245TNF-α：肿瘤坏死因子，LPS：脂多糖，MTA：5’-甲硫腺苷*P<0.05**P<0.01vs单用LPS腺苷蛋氨酸的代谢产物MTA可显著抑制LPS所致TNF-α浓度腺苷蛋氨酸的六大作用—抗纤维化——抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）注：TNF-α是在肝纤维化研究中最早受到关注的细胞因子之一，通过多种途径参与肝纤维化的调控，作为重要的刺激原使肝星状细胞活化。1500125010007505002500[TNF-α](pg/ml)*******LPS-+++++MTA(μmol/L)00100250300500第27页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸增加mtDNA密度，改善胰岛素敏感性IncreasesskeletalmusclemitochondrialDNAdensityandwholebodyinsulinsensitivity腺苷蛋氨酸的六大作用——增加胰岛素敏感性mtDNA：线粒体DMA第28页，共36页，2023年，2月20日，星期五腺苷蛋氨酸改善糖尿病大鼠的胰岛素敏感性注：同一时间点字母不同，代表P<0.05葡萄糖输注率mg/kgminOLETF-SAMChengJiJin,HyeongKyuPark,YoungMinCho,etal.S-adenosyl-L-methionineincreasesskeletalmusclemitochondrialDNAdensityandwholebodyinsulinsensitivityinOLETFrats.JNutr.

2007;137(2):339-44.采用自发性2型糖尿病伴胰岛素抵抗大鼠模型研究思美泰对于mtDNA密度的影响LEFO：非糖尿病大鼠OLETF：2型糖尿病大鼠伴胰岛素抵抗模型OLETF-SAM:2型糖尿病大鼠伴胰岛素抵抗模型加用思美泰OLETF-SAM葡萄糖输注率高于OLEFT对照组.第29页，共36页，2023年，2月20日，星期五P＜0.05腺苷蛋氨酸改善糖尿病大鼠mtDNA密度OLETF-SAM1.JinCJ,

ParkHK

ChoYM,etal.S-adenosyl-L-methionineincreasesskeletalmusclemitochondrialDNAdensityandwholebodyinsulinsensitivityinOLETFrats.JNutr.

2007;137(2):339-442.时丽丽，张莉，谭初兵等.线粒体功能损伤与胰岛素抵抗[J].中国药理学通报，2012；28（11）：1481-1486mtDNA密度与胰岛素敏感性正相关腺苷蛋氨酸改善糖尿病大鼠的胰岛素敏感性线粒体内的核蛋白主要由mtDNA控制转录表达。线粒体主要功能是代谢体内糖脂类物质，产生ATP和热量。mtDNA相关的线粒体功能损伤可能会引起胰岛素抵抗及相关代谢类疾病。含量注：同一时间点字母不同，代表P＜0.05葡萄糖输注率mg/kg/min

第30页，共36页，2023年，2月20日，星期五FXR：一种多功能的核体，医学分子生物学杂志，2008，5（6）：529-534肝脏细胞中胆汁酸的解毒(如:SULT2A1、UGT284、BACS、BAT),包括胆汁酸氧化、硫酸盐化和糖苷化胆汁酸和磷脂从肝细胞向胆小管的分泌(如:BSEP、MRP2、MDR3)胆汁酸在肝肠循环中的转运（如:ASBT、IB.ABP、OSTα、OSTβ、NTCP)

腺苷蛋氨酸—调控胆汁酸代谢FXR多种途径调节胆汁酸代谢第31页，共36页，2023年，2月20日，星期五在大鼠模型中诱导IHC48h后，分别采用腺苷蛋氨酸及FXR受体激动剂GW4064治疗，腺苷蛋氨酸（60mg/kg/d）显著改善了血清胆红素，胆汁酸及肝酶，并显著上调了FXR表达。同时，腺苷蛋氨酸还上调了BSEP,MRP2和NTCP的表达腺苷蛋氨酸—调控胆汁酸代谢实验设计：采用α-萘基异硫氰酸酯诱导IHC大鼠模型，分别采用腺苷蛋氨酸及FXR受体激动剂GW4064治疗，检测血浆胆红素、胆汁酸、肝酶,

FXR,胆汁盐出口蛋白质(BSEP)，多重耐药相关蛋白2

(MRP2)和Na+牛磺胆酸盐协同转运多肽(NTCP)MaoH,etal,APDW2014,Nov.Postpresentation第32页，共36页，2023年，2月20日，星期五六大作用抗氧化，减少肝细胞损伤思美泰®显著降低经乙醇处理肝细胞的活性氧物质（ROS）水平。促进内源性谷胱甘肽的生成，持续解毒抗氧化。解毒，抵抗有害物质对肝细胞的损害。促进内源性谷胱甘肽的生成，持续解毒抗氧化。修复肝细胞，改善膜流动性，提高Na+－K+-ATP酶活性，修复细胞骨架等，改善肝细胞功能保护细胞膜：思美泰通过保护细胞膜脂质环境，维持正常肝脏细胞膜Na+-K+-ATP酶活性而改善胆汁形成和/或分泌。保护细胞骨架：预防环孢霉素A(CyA)所致胆管功能破坏；减少细胞骨架破坏药物所致微核细胞形成；保护微管完整。促进肝细胞再生腺苷蛋氨酸在早期即显著增加肝细胞有丝分裂活性。抗肝纤维化，延缓肝病进程可抑制肝星状细胞的活化。腺苷蛋氨酸通过抑制TNF表达，促进IL-10表达，从而抑制炎症，对抗肝纤维化。增加胰岛素敏感性，改善脂质代谢思美泰®增加mtDNA密度，改善胰岛素敏感性第33页，共36页，2023年，2月20日，星期五1.思美泰（腺苷蛋氨酸）说明书，H201402612.G.Manzillo,F,Piccinino,C.Surrenti,etal.MulticentreDouble-BlindPlacebo-controlledStudyofIntravenousandOralS-Adenosyl-L-Methionine(SAMe)inCholestaticPatientswithliverdisease.DrugInvestigation.1992;4(Suppl.4):90-100腺苷蛋氨酸安全性良好SAMe作为存在于人体组织的一种生理活性分子，循内源性S-腺苷蛋氨酸的途径代谢1妊娠期：可用于妊娠期肝内胆汁淤积1与安慰剂比较，不良反应发