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划痕实验：细胞接种到六孔板中，每孔接约5x105个细胞（SMMC7721，不同细胞具体接种数量掌握为24h能铺满板），放入37°C5%CO2培养箱培养,20〜24h观察是否铺满板。待铺满后开始划痕实验。用灭过菌的200uL黄色枪头在每个孔中间划一条痕（枪头垂直划线，每次力度均一，划线要直，一次性划到底，可用板盖当尺子，，PBS洗2遍去除划下的细胞，显微镜拍照（放大倍数为100倍，。换含不同药物的无血清培养液继续培养（空白组用PBS代替药物，每组设3个平行，。24h或48h后拍照（放大倍数为100倍）固定点测量划痕距离是否改变。用Photoshop中的直方图测量间距大小，表示不同组细胞发生迁移的距离。将对照组迁移距离大小设为100%，实验组迁移比例为：（对照组迁移距离-实验组迁移距离，/对照组迁移距离*100%。(o」luo。jo(o」luo。jo%)QCONpapnuap£s=aopse」.E>2Transwell实验：1、 收取处于对数生长期的细胞。终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1-2遍,再用无血清培养基重悬，彻底去除血清干扰，调整细胞密度1〜5x105个。2、 Transwell小室（孔径大小有不同规格，一般肿瘤细胞选8pm；迁移实验用普通Transwell小室，侵袭实验用含有基质胶的Transwell小室）里加入制备好的细胞悬液（1x105个），小室内液体总体积为200pLo3、 24孔板中加入500吐含10%胎牛血清的完全培养基。将Transwell小室放入24孔板中。特别注意：下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，因此在种板和培养过程中要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。4、 将带有小室的24孔板置于37°C5%CO2培养箱中培养，18-48h后（时间依不同实验不同细胞而定）取出，非贴壁细胞直接计数下层细胞数，贴壁细胞拍照计数小室底部膜上细胞（步骤如下）。5、 轻轻吸出小室内的培养基，用37C预热的PBS轻轻洗一遍，每孔加入4C预冷的4%多聚甲醛（或甲醇）固定液500uL，于室温固定细胞20min，PBS轻轻洗3次。6、 用湿棉签轻轻刮出小室中上层细胞，重复3次。7、 PBS轻轻洗3次，吸干残余PBS。8、 每孔加入结晶紫染色液400〜500uL（没过小室底部）于37C中孵育30min。9、 用枪吸出结晶紫并用双蒸水轻洗3次，室温倒置风干。10、 显微镜拍照（200倍镜下每小室的一个横轴或纵轴拍五张图，计算平均细胞数）。数据分析后作图

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