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文档简介

血清CK及其同工酶测定检验系生化一、概述n

肌酸激酶（Creatinekinase，CK，EC2.7.3.2）全称腺苷三磷酸：肌酸N-磷酸转移酶，催化肌酸（Cr）和ATP或磷酸肌酸（CrP）和ADP之间磷酸转移的可逆反应。CK肌酸+ATP磷酸肌酸+ADP+H+n

偏碱pH有利于顺向反应进行，中性pH倾向逆向反应，一般逆向反应较顺向反应快2~6倍；Mg2+是CK

的必需激活剂，但过量反而抑制；nn

样品宜用血清或肝素化血浆；n

标本应避免严重溶血；n

血清中CK较不稳定，室温4h或4℃12h可使酶失活。二、CK测定方法n

比色法n

紫外分光光度法n

荧光法比色法n

利用顺向反应1、测磷法

CrP在酸液中易水解成Cr及无机磷酸。（ATP与ADP在酸性条件下较稳定）2、酶偶联-丙酮酸测定法CK磷酸肌酸+ADP肌酸+ATP丙酮酸激酶ADP+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸+ATP丙酮酸+2，4-二硝基苯肼丙酮酸-2，4-二硝基苯腙☆顺向反应测定CK的底物较便宜；☆测磷法的试剂较易得而稳定；☆丙酮酸激酶价格较贵，不易获得；☆顺向反应速度较慢，灵敏度较低。n

利用逆向反应CKCrP+ADPCr+ATP红色化合物Cr+双乙酰+α-萘酚Mg2+作激活剂；nn

半胱氨酸供给巯基；n

氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白并终止反应。n

逆向反应的速度较快，敏感性较高，成为目前国内推荐的主要方法。n

必须用中性或偏碱的蛋白沉淀剂以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀剂中非酶性水解成Cr。紫外分光光度法n

多利用逆向反应，是国际最常用方法CKCrP+ADPCr+ATPATP+Glu

己糖激酶

ADP+6-P-GluG-6-PD6-P-Glu+NADP+6-P-GA+NADPH+H+n

全部反应最适pH为6.8~6.9；n

主要干扰因素①谷光甘肽还原酶②腺苷酸激酶荧光法n

利用逆向反应生成的Cr在强碱性溶液中与茚三酮反应产生荧光复合物，测其荧光强度，经与同样处理的Cr标准管比较，可计算CK活力。优点：快速、敏感，巯基化合物不产生干扰，试剂易得，操作条件易于掌握。缺点：需精密荧光分光光度计，不适宜基层单位使用。酶偶联-丙酮酸测定法步骤（顺向反应）空白标准测定0.10.50.54H

O0.12血清标准0.10.5酶试剂0.537℃，10minDNP0.50.537℃，15min0.4NNaOH44室温

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