Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序终稿

华润三九医药股份有限公司第5页/总NUMPAGES6页第PAGE１页/总NUMPAGES5页标题Waterse2695型高效液相色谱仪标准操作程序起草日期颁发部门：研发事业部页数审核日期分发部门：QA审核日期批准日期生效日期变更记载：原文件号批准日期生效日期变更原因及目的：文件系统修订。1目的：Waterse2695型高效液相色谱仪的一般标准操作程序。2范围：Waterse2695型高效液相色谱仪。3责任人：相关实验人员4设备部件及名称4.1Waterse2695分离单元．4.22998型二极管阵列检测器．4.3Empower色谱工作站．各部件可独立操作或通过色谱工作站控制，色谱数据处理由色谱工作站完成，其操作系统为WindowsXPProfesionalSP3，工作站软件为色谱管理软件。5标准操作程序5.1 开机前准备5.1.1检查桌面是否清洁、整齐。5.1.2检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。5.1.3检查电源线有无破损。5.1.4接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。5.1.5准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比便例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。如需使用，应重新过滤。流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。5.1.6准备样品。为延长层析柱使用寿命，建议使用流动相溶解样品，如果不是，一定要做预试验，确保样品在流动相溶液中不出现沉淀。如果样品中成份复杂，特别含有强保留成分，建议过C18小柱预处理。样品在进样前必须经0.45μm的微孔滤膜滤过，根据溶剂性质选择合适的滤膜。过滤完毕后，置于样品盘上，记录样品所放的位置号。5.2开机接通稳压电源，待电压稳定在220V时，依次打开下列仪器的电源：高压泵、柱箱、系统控制仪、色谱工作站。接通2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约1min后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。5.3溶剂管理系统的准备5.3.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【Menu/Status】，进入“Status（1）5.3.1.1湿启动在“Status（1）”屏幕下，光标选“Compomtion”中欲使用的流动相，输入流动相组成及比例，按【Enter】再用光标选“Degasser”中的“Normal”，按【Enter】5.3.1.2当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时，5.4样品管理系统的准备

5.4.1冲洗自动进样器在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”，输入流动相的组成。按【DirectFunction】，光标选“PurgeInjector”，按【Enter】，显示“PurgeInjector”屏幕，输入“SampleLoopVolumes5.4.25.4.35.4.45.5Empower色谱工作站操作5.5.1点击桌面上Empower图标，出现Empower登录窗口，输入用户名和密码，然后单击“确定”，进入Empower。每次登录前必须输入用户名和密码。注：出厂设置的用户名为system，密码为manager。5.5.25.5.2.1注：项目名中不能出现空格。可使用下划线(_)分隔词。另外，名称不能以数字开头。项目是方法、结果、自定义字段、视图筛选器和原始数据的集合，由用户定义。该集合驻留在Empower数据库中并在“浏览项目”中显示。项目是为了方便用户归类、管理和检索相应的数据，应根据实际情况来决定是否建立，并不是每次开机都要创建。5.5.35.5.3.15.5.3.25.5.3.35.5.3.4待系统平衡后，即可单击“停止注：“方法组”栏中，默认会出现刚刚建立好的方法组的名称，如果需要选择其它已经建立过的适用的采集方法组，则可从此栏的下拉菜单中选中即可。5.5.45.5.4.15.5.4.25.5.4.35.5.55.5.5.1注：如果在非“结果”选项卡（例如通道）中单击预览出版，则无法查看到积分结果。5.5.5.25.5.5.3如果想批处理打印，可以在“项目”窗口中，点击“结果”标签，用“键盘Ctrl＋鼠标左键”选黑要出报告的样品，单击（打印）在随后出现的“后台处理及生成报告”页面中（见下图），确认“打印”方框中打勾，“处理”和“导出”方框中为空。选中‘使用指定的报告方法’，在其下拉菜单中选择所需的报告方法，点击‘确定’即可。5.6关机

5.6.1数据采集完毕后，关闭检测器电源开关。

5.6.25.6.36注意事项6.1更换溶剂时，若液体流路中有气泡，可用注射器抽吸，彻底排除气泡6.2流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。6.3柱温箱一旦发生报警，一定要及时找到原因。若实验室湿度太高，则需采取相应的除湿措实。若柱温箱中发生漏液现象，则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液，长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传感器。6.4紫外检测器要“晚开、早关”，在流通池有溶液连续流动几分钟后方可开启。若不需要做样，可设置一个较低的流速（如0.05ml/min）。如果流动池中有气泡，则会提示漂移过大无法通过自检和校正。7维护保养规程7.1检查HPLC的日常操作条件：7.1.1检查温度：10—30℃7.1.27.1.37.1.47.2泵的保养：7.2.17.2.27.2.27.2.27.2.37.3柱的保养：7.3.17.3.27.3.27.3.27.3.37.3.47.3.7.4检测器(UV)的保养：7.4.17.5其它：7.5.1每两周要清洁一次仪器。7.5.2柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动7.5.3防止过滤头滋生细菌和微生物。7.5.47.5.57.5.67.6仪器维护保养项目周期表维护项目维护内容维护周期1.日常操作条件检查是否符合每次实验2.记录检查是否齐全3.废液瓶检查是否装满4.洗针液与洗泵液检查是否充足5.泵通道检查仪器方法与使用是否一致6.色谱柱使用与标准是否一致7.泵实验前排气泡8.进样针实验前排气