药典微生物限度修订培训知识

主要内容一中国药典微生物检查体系的调整二新的微生物检验理念三实验室规划与建设四（仲裁）中检院判断药品污染的方案五培训总结第一页，共50页。一、中国药典微生物检查体系的调整1.调整内容章节内容目的无菌检查法质量标准体系基本与国外接轨微生物限度检查法灭菌法强调微生物检验的验证及过程控制抑菌效力检查法指导原则药品微生物检验替代方法验证指导原则对滴眼剂的质控水平大幅度提高微生物限度检查法应用指导原则部分品种特别是抗生素品质的无药品微生物实验室规范指导原则菌检查法由附录走入各论第二页，共50页。2.具体内容——无菌检查一、中国药典微生物检查体系的调整中国药典2010版无菌检查法修订方案无菌检查法中对以真菌为检查目的改良马丁培养基修订为以需氧菌为检查目的地的胰酪大豆胨肉汤培养基（TSB）为研究工作已由上海市药检所牵头完成。第三页，共50页。WHO规程在取样量、培养基、培养条件等主要方面与现行USP、EP无菌检查法一致。WHO规程的并没有明确规定硫乙醇培养基必须双份双温度分别培养，相反倒是推荐单一的硫乙醇培养基在20℃～25℃培养。一、中国药典微生物检查体系的调整比较第四页，共50页。2.具体内容——微生物限度检查一、中国药典微生物检查体系的调整将与ICH、(USP/EP/JP)全面接轨2010版中国药典第二增补本将于2013年10月1日颁布微生物限度检查法修订方案肯定会在2015年版中国药典收载，拟提前颁布，争取必要的过渡期第五页，共50页。1）检验体系变更；2）限度标准变更，有“数量”向“数量级”转变；3）控制菌结果判断趋向多样化；4）以“OOS”代替复试…一、中国药典微生物检查体系的调整第六页，共50页。一、中国药典微生物检查体系的调整比较计数法药典2010版Chp.修订版2010版Chp.分类依据营养条件微生物类别项目1需氧菌总数胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA)细菌数营养琼脂培养基项目2霉菌及酵母菌总数沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA)霉菌及酵母菌数玫瑰红钠琼脂培养基特点客观、严谨检验条件不能满足控制要求第七页，共50页。微生物计数定义变化修订前修订后细菌数——营养琼脂培养基细菌修订为需氧菌总数（TAMC)霉菌和酵母菌——玫瑰红钠琼脂培养基霉菌和酵母菌数修订为霉菌和酵母菌总数(TYMC)一、中国药典微生物检查体系的调整需氧菌总数：生长在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上所有的菌落（包括霉菌和酵母菌）。霉菌和酵母菌总数：一般指生长在沙氏葡萄糖琼脂培养基上的所有菌落（包括细菌）。第八页，共50页。控制菌检查法编号2010版Chp.修订版2010版Chp.1*耐胆盐的革兰氏阴性菌大肠菌群2*大肠埃希菌大肠埃希菌3*沙门菌沙门菌4*铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌5*金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌6梭菌梭菌7白色念珠菌白色念珠菌*：培养基体系有明显变化一、中国药典微生物检查体系的调整第九页，共50页。结果判断项目2010版Chp.修订版2010版Chp.微生物计数法控制标准（接受限度）101（20）10(10)102（200)100(100)控制菌检查法结果较少的生化实验或采用其他事宜方法进一步鉴定应进行分离、纯化及适宜的鉴定实验一、中国药典微生物检查体系的调整第十页，共50页。一、中国药典微生物检查体系的调整增加新的计数方法——MPN法最可能计数法（MPN法）用于微生物计数时精确度较差，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法时使用，不适用霉菌计数。第十一页，共50页。3.调整背景一、中国药典微生物检查体系的调整医药产品的发展一百多年来人们努力提高在“有菌的环境”生成“无菌的产品”的能力，事实证明这一努力至今充满挑战！第十二页，共50页。2006年，齐二药——亮菌甲素注射液导致多名患者肾功能衰竭，13名患者死亡；2006年，安徽华源生物药业公司——克林霉素注射液导致11名患者死亡；2008年，江西博雅生物制药公司——静脉注射用人免疫球蛋白，6人注射后死亡；2009年至今…一、中国药典微生物检查体系的调整1）国内第十三页，共50页。2006年7月～8月发生震惊全国的“欣弗事件”一、中国药典微生物检查体系的调整夺命的“欣弗”第十四页，共50页。“欣弗事件”对我国药品生成监管产生了深远的影响，直接推动了新的药典方案和新版GMP规定的出台。一、中国药典微生物检查体系的调整“欣弗事件”将永远成为无菌药品生成的典型反面教材！第十五页，共50页。2）国际2012年10月，美国新英格兰合成制药中心生成的注射用类固醇霉菌污染，造成数百人感染真菌脑炎，至年底统计已死亡39人。一、中国药典微生物检查体系的调整第十六页，共50页。在50支密封药瓶中检测出曲霉菌和突脐蠕孢菌两种真菌。一、中国药典微生物检查体系的调整第十七页，共50页。3）发展趋势——全球化的微生物检验

新的GPM

新的药典方案

新的ISO标准

WHO微生物实验室PQ认证Youdorightthewrongthing!一、中国药典微生物检查体系的调整第十八页，共50页。Pre-QualificationofqualitycontrollaboratoriesWHOPQ认证WHO自2004年建立预认证程序，联合国机构评价使用质控实验室的指导原则（2004年发布WHOTRS，No.917，Annex4，2007年修订WHOTRS，No.943，Annex5，目前仍在修订中）盖茨全球基金项目一、中国药典微生物检查体系的调整第十九页，共50页。WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratories(GPML)1.Personnel人员2.Environment环境3.Validationoftestmethods检测方法验证4.Equipment仪器设备5.Reagentsandculturemedia试剂和培养基6.Referencematerialsandreferencecultures菌株7.Sampling抽样8.Samplehandlingandidentification样本处理和判断9.Disposalofcontaminatedwaste污染废弃物处理一、中国药典微生物检查体系的调整第二十页，共50页。一、中国药典微生物检查体系的调整WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratories(GPML)10.Qualityassuranceofresultsandqualitycontrolofperformance

检测结果质量保证和检测过程质量控制11.Testingprocedures检测方法12.Testreports检测报告（原始记录）第二十一页，共50页。ICH人用药注册技术要求国际协调会欧盟、美国和日本三方的药品管理部门和制药企业协会1990年发起——三方的制药产品占世界市场份额的70%～80%一、中国药典微生物检查体系的调整第二十二页，共50页。ICH工作内容协调质量（Q)、安全（S）、疗效（E）的技术要求。建立统一的质量技术要求：质量控制、检验技术、检验标准等；减少国际贸易的障碍；统一医药产品进入国际市场的技术门槛，促进国际间药品在同一技术平台的公平竞争；ICH4QB（药典互认）附录4A、4B、4C已经得出结论：美国、欧盟和日本药典中的微生物限度检验方法协调统一！一、中国药典微生物检查体系的调整第二十三页，共50页。PDG（PharmacopoeialDiscussionGroup)药典讨论组1989年，由欧洲药品质量管理局。美国药典委员会和日本药局方三方代表组成了PDG；宗旨：使三方药典的科技水平保持一致，服务ICH，保证公众用药安全；角色：ICH的重要技术支撑一、中国药典微生物检查体系的调整第二十四页，共50页。各国药典对微生物限度检查协调的内容及结构示例USP36<61>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:MicrobialEnumerationTests(非无菌产品的微生物检查：微生物计数法)<62>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProduct:Testsforspecifiedmicroorganisms(非无菌产品的微生物检查：控制菌检查法)<1111>MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct(非无菌产品的微生物限度标准)一、中国药典微生物检查体系的调整第二十五页，共50页。各国药典对微生物限度检查协调的内容及结构示例EP7.0<2.6.12>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:MicrobialEnumerationTests(非无菌产品的微生物检查：微生物计数法)<2.6.13>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProduct:Testsforspecifiedmicroorganisms(非无菌产品的微生物检查：控制菌检查法)<5.1.4>MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct(非无菌产品的微生物限度标准)一、中国药典微生物检查体系的调整第二十六页，共50页。中国药典重大事项1995年版首次收载微生物限度检查法，沿用86版&89版卫生部部颁标准2000年版首次收载微生物限度检查标准2005年版首次收载方法验证，标准分列在三部药典，对含生药原粉制剂增加大肠菌群的控制，用于深部组织的制剂增加厌氧菌检查。PDG完成微生物检查的方法&标准统一2010年版首次收载培养基适用性检查，眼用制剂修订为无菌要求，阴道&尿道给药制剂增加白色念珠菌的控制。ICH成员国收载协调方法&标准2010年修订版基本与ICH微生物检查法接轨，涵盖标准和方法的整体变化一、中国药典微生物检查体系的调整第二十七页，共50页。中国药典与ICH接轨原因：中国虽然不是ICH成员国，但与国外制药行业交往日益增多，且中国想进入国际市场，药品检验方法和标准的统一势在必行，微生物检查法亦如此。国内现状已具备与ICH接轨的技术基础：2005年版Chp.收载方法验证；2010版Chp.收载培养基适用性要求。一、中国药典微生物检查体系的调整第二十八页，共50页。检验结果判断：结果→过程控制（注重环节）二、新的微生物检验理念环境保证培养基保证无菌性检查灵敏度检查过程控制SOP操作方法验证有效的方法有效的结果可靠的结论结果判断第二十九页，共50页。过程监控是溯源的基础二、新的微生物检验理念厂房与设施物料验证质量管理机构与人员设备卫生管理生产管理空气净化技术生产环境卫生公用工程卫生原料卫生辅料卫生包装材料卫生清洁验证灭菌验证设备验证工艺卫生监测环境卫生监测个人卫生监测体检管理生产人员卫生卫生培训工艺用水卫生

设备清洁清洁规程

卫生管理制度防止污染与混淆的措施微生物控制第三十页，共50页。MDD系统实验室检验结果偏离规定标准一般属于OOS情况，但是，涉及微生物相关检验项目的偏差处理，FDA的OOS指南已经明确说明并不适用。MDD是英文MicrobialDataDeviations的简写，意思就是实验室微生物相关检验数据偏差。由于微生物相关检验项目固有的复杂性，FDA的OOS指南避开了这个话题。二、新的微生物检验理念第三十一页，共50页。USP<1117>专论《BestMicrobiologicalPractice》第三部分关于分析结果的解释，列出了涉及微生物数据偏差（MDD）的疑难问题。二、新的微生物检验理念微生物是无处不在的，也是污染的主要来源。分析人员污染微生物检验项目的分析结果也是可能的。在不同样品之间或者样品不同部位之间，微生物可能没有均匀分布。微生物检验项目具有显著的内在变异性。第三十二页，共50页。微生物数据有时不容易理解与人类相关的微生物群落被广泛用于许多测试。人员污染是始终被关心的问题。样品或环境中的微生物并非均匀分布。微生物检测可变范围大：可能在±0.5lg左右

因此，得到的结果与期望会有差异二、新的微生物检验理念第三十三页，共50页。例如重复性误差：7.5%（RSD）方法局限性

计数偏差：25～30cfu/皿，RSD为20%～18%

（USP34<1227>)

称量误差：

取10g

9.9～10.1g±1%容量误差：取1ml＜1%培养基差异：＞10%

二、新的微生物检验理念

第三十四页，共50页。MDD调查需要涉及的范围MDD涉及的微生物类别的鉴别；实验室样品和相关材料；实验室相关记录；生产环境的监控人员培训和健康情况；产品灭菌前的生物负荷；批生产记录和辅助记录；生产历史（包括培养基灌装历史）二、新的微生物检验理念第三十五页，共50页。原料药来源和质量；辅料来源和质量（包括工艺用水和工艺用气）；⑪生产现场。二、新的微生物检验理念第三十六页，共50页。实验室偏差调查示意图

二、新的微生物检验理念仪器/设备试管失误疲惫人员失误灭菌釜操作培训培养基污染更换供应商HEPA泄漏无合格证环境条件无菌服破裂检验结果超标第三十七页，共50页。MDD调查结果分析和评价实验室分析错误

修订完善的SOP、校验仪器、更换物料或消毒环境等分析方法变更

制定替代检验方法SOP用于解决不确定的结果批次产品失败

对于不合格产品按规程处理

二、新的微生物检验理念第三十八页，共50页。二、新的微生物检验理念MDD调查结果分析和评价人员或者环境因素影响

启动CAPA纠偏措施没有发现根本原因1）基于MDD发生的可能原因采取CAPA措施；2）基于风险分析，对相关批次产品做出最后处理决定

第三十九页，共50页。新的检验环境1）ICH要求：适宜的洁净度环境；2）2010版GPM环境分级以A（百级）、B（千级）、C（万级）、D（十万级）定义；3）2010版Chp.修订要求：微生物限度检查应在受控洁净环境下的局部洁净度不低于B级的单向流空气区域（>D+B）；

二、新的微生物检验理念第四十页，共50页。4）发展趋势：检验过程及环境，既要求防止样品受污染，又要防止对环境和人员造成危害。合理划分活动区域以提高微生物实验室操作的安全性和可靠性。二、新的微生物检验理念第四十一页，共50页。生物安全感染性微生物的危险度等级危险度1级（无或极低的个体和群体危害）危险度2级（个体危害中等，群体危害低）

病原体能够对人或动物致病，但对实验室工作人员、社区、环境不易导致严重危害。实验室暴露也许会引起严重感染，但对感染有有效预防和治疗措施，疾病传播危害有限。二、新的微生物检验理念第四十二页，共50页。二、新的微生物检验理念生物安全感染性微生物的危险度等级危险度3级（个体危害高，群体危害低）危险度4级（个体和群体危害均高）第四十三页，共50页。相应的生物安全水平二、新的微生物检验理念危险度等级生物安全水平实验室类