实验一蛋白质的等电点测定和沉淀反应课件

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实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反应一、目的1.了解蛋白质的两性解离性质2.学习测定蛋白质等电点的一种方法3.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识4.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义二、原理

蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：等电点:当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。

四、操作步骤（一）酪蛋白等电点的测定

（1）取同样规格的试管4支，加入各试剂，然后混匀。此时4个管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。（2）各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。

2、重金属离子沉淀蛋白质

重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。

取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？

3、某些有机酸沉淀蛋白质

取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻倾出清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。4、有机溶剂沉淀蛋白质

取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL95%乙醇。观察沉淀的生成（如果沉淀不明显，加点NaCl，混匀。

五、注意事项

等电点测定的实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。六、实验报告

以表格形式总结实验结果，包括观察到的现象，分析评价实验结果。七、思考题

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