流式细胞仪使用程序及SOP文件

本文格式为Word版，下载可任意编辑——流式细胞仪使用程序及SOP文件流式细胞仪使用程序及SOP文件1.目的

规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。2.适用范围

适用于本试验室使用流式细胞仪。3.职责

操作人员应熟练把握并自觉遵守本标准操作程序。如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。4.支持性文件

流式细胞仪使用说明书。5.操作规程

5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序

5.1.1.1检查仪器鞘液桶和废液桶。5.1.1.2开启流式细胞仪。

5.1.1.3气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。5.1.1.4开启电脑。

5.1.1.5等待机器预热5—10分钟后可开始试验。5.1.2关机程序

5.1.2.1用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。5.1.2.2将样品支撑架置于中位，以HIRUN5分钟，使内管吸入2ml。5.1.2.3将样品换成蒸馏水重复1-2步。

5.1.2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。5.1.2.5选择Standby模式10分钟。5.1.2.6关闭电脑，再关掉仪器。

5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITEBeads的准备

5.2.1.1在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITEBeads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；

5.2.1.2在另一装有3ml鞘液的FALCON管参与unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前参与）；5.2.1.3避光放置，准备上机。5.2.2软件环境的设置

5.2.2.1从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；

5.2.2.2在SignIn视窗中填入以下信息：操、机构、试验室主任（操是必需填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；

5.2.2.3进入SetUp视窗，在AssaySelection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/NoWash或HLA-B27Calib；在CaliBRITEBeadsLotIds中，根据每一种beads所对应的编码输入LotID；在AutomaticSavingOptions中，你可以选择自动保存或不保存SummaryReport，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最终在SetUp视窗的右下角点击Run。5.2.3Beads的检测

5.2.3.1将功能键放在RUN的位置，流速设成HI，将混匀的标有unlabeled的试管放在支撑架上，点击Start，开始调理PMT，如软件在unlabeled试管中测到APC-beads，则在PMT调理完后，马上进行时间延迟的调校；假使调试成功，会出现“TimeDelayCalibrationwassuccessful〞，然后直接进入补偿视窗；假使调试不成功，你有5秒钟的时间决定是再试一次，还是重复开始的PMT调理，或是继续到下一步调理补偿；若你在5秒内还没有决定，软件自动进到补偿的视窗。假使你在时间调校失败的基础上继续补偿的调理，那么你所得到的FL3-%FL4和FL4-%FL3的值会有较大的变化；

5.2.3.2在支撑架上换成混匀的标有mixed试管，点击Start，开始调理补偿，补偿调试成功后，FACSComp自动进行灵敏度调试，点击Start，开始调试灵敏度；调试完成后，软件计算结果，并将所有的结果都保存于CalibFile或CalibFile.LNW中，同时给出SummaryReport；

5.2.3.3从支撑架上移走装有beads的试管，换上蒸馏水，并将功能键换成STANDBY。

5.3仪器操作程序

5.3.1抗体标记

5.3.1.1取FALCON管加对应荧光抗体，再加标本，涡漩振荡数秒；5.3.1.2避光室温放置20分钟；

5.3.1.3加1×溶血素2ml，涡旋振荡数秒；5.3.1.4避光室温放置15分钟；

5.3.1.5离心，1000rpm×5分钟、室温；5.3.1.6弃上清后加2mlPBS，涡旋振荡数秒；5.3.1.7离心，1000rpm×5分钟、室温；5.3.1.8弃上清后加0.5mlPBS，准备上机。

以上为全血标本，如是细胞培养液则无需加溶血素，直接1.6-1.8操作；如是全血不洗标本则加定量的溶血素，避光室温放置15分钟后，直接上机。5.3.2流式细胞仪分析

5.3.2.1从苹果菜单进入，选择操作软件；

5.3.2.2顺序输入样本姓名，点击RunTests，得到分析结果。6.日常维护和保养6.1每日保养

6.1.1用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。6.1.2将样品支撑架置于中位，以HIRUN5分钟，使内管吸入2ml。6.1.3将样品换成蒸馏水重复1-2步。

6.1.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。6.1.5选择Standby模式10分钟。6.1.6关闭电脑，再关掉仪器。6.2每月保养

6.2.1将10%漂白