实验1大肠杆菌的培养和分离

什么是微生物？乳酸杆菌黑曲霉微生物：结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。现在是1页\一共有37页\编辑于星期三什么是培养基？三角瓶培养皿试管液体培养基：扩大培养，工业生产。固体培养基：分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏。凝固剂：琼脂现在是2页\一共有37页\编辑于星期三培养基的配制营养成分功能和来源碳源氮源生长因子水无机盐提供碳元素：主要是糖类提供氮元素：蛋白胨、牛肉膏、尿素维生素、氨基酸和含氮碱基H2O，良好的溶剂NaCl：维持一定的渗透压现在是3页\一共有37页\编辑于星期三LB培养基的配制LB固体培养基：蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL，琼脂1g。调节pH至7.6。封口膜现在是4页\一共有37页\编辑于星期三菌落：单细菌的克隆菌落：在固体培养基上，由单个细菌繁殖而来的一个肉眼可见的具有特定形状的子细胞群体。霉菌大肠杆菌现在是5页\一共有37页\编辑于星期三菌落的作用：鉴定菌种的重要依据菌落特征：菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等。现在是6页\一共有37页\编辑于星期三大肠杆菌大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。现在是7页\一共有37页\编辑于星期三怎样无菌操作？高压蒸汽灭菌：培养皿、试管、三角瓶、枪头、玻璃三角刮刀、接种环、镊子。在121℃下灭菌15min。高压蒸汽灭菌锅现在是8页\一共有37页\编辑于星期三培养皿三角瓶玻璃三角刮刀接种环微量移液器枪头现在是9页\一共有37页\编辑于星期三棉花塞、封口膜、牛皮纸或旧报纸、橡皮筋不能用脱脂棉：易吸水，容易引起污染。现在是10页\一共有37页\编辑于星期三酒精灯和酒精棉球灭菌：杀死所有微生物。消毒：杀死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。现在是11页\一共有37页\编辑于星期三超净工作台①打开紫外灯和过滤风，灭菌30min。②点燃酒精灯→酒精棉擦拭桌面→酒精棉球擦手。酒精灯火焰附近旁进行灼烧灭菌防止杂菌污染现在是12页\一共有37页\编辑于星期三用细菌过滤器除菌：尿素加热会分解，用G6玻璃砂漏斗过滤。现在是13页\一共有37页\编辑于星期三什么是倒平板？将灭菌后的固体培养基倒入已灭菌的培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。现在是14页\一共有37页\编辑于星期三Step1：培养基的配制和灭菌①将50mLLB液体培养基、50mLLB固体培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌。无菌水培养皿用牛皮纸包扎现在是15页\一共有37页\编辑于星期三Step2：倒平板②在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基（冷却到60℃）倒入灭菌的培养皿中，置于水平放置上，并轻轻晃动，待凝固后形成平面。超净台现在是16页\一共有37页\编辑于星期三Step3：接种后扩大培养③将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12h。恒温摇床现在是17页\一共有37页\编辑于星期三Step4：平板划线分离④用接种环在培养大肠杆菌的三角瓶中蘸取菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线。将培养皿倒置，放在37℃恒温箱中培养12～24h。现在是18页\一共有37页\编辑于星期三怎样在平板上划线？1次2次3次4次连续划线法分区划线法现在是19页\一共有37页\编辑于星期三原因：随着划线次数的增加，菌数越来越少，最终在划线的末端出现由一个细菌繁殖而来的单个菌落。为什么通过划线分离可得到单菌落？现在是20页\一共有37页\编辑于星期三原因：既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。恒温培养时培养皿倒置培养皿倒置皿盖皿底恒温培养箱现在是21页\一共有37页\编辑于星期三Step5：菌种的斜面保存⑤将接种环将单菌落取出，用划线法接种在斜面培养基上，37℃培养24h后，置于4℃冰箱中保存。斜面培养基现在是22页\一共有37页\编辑于星期三试管斜面培养基的制作方法：将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中，灭菌后将试管斜放，令其冷却，固体培养基即成为斜面。现在是23页\一共有37页\编辑于星期三平板划线分离法①灼烧接种环外焰先灼烧后冷却：以免接种环温度太高，杀死菌种。现在是24页\一共有37页\编辑于星期三②接种环冷却后，蘸取带菌培养物现在是25页\一共有37页\编辑于星期三③在近火焰处，让带菌接种环在固体培养

基上划线现在是26页\一共有37页\编辑于星期三④恒温培养箱中倒置培养分区划线法每次划线之前都要灼烧接种环。总是从上一次划线的末端开始划线。现在是27页\一共有37页\编辑于星期三稀释涂布分离法①用无菌吸管吸取1mL细菌培养液加入另一个盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。①梯度稀释菌液：10-5~10-7倍现在是28页\一共有37页\编辑于星期三②滴加菌液②用无菌吸管取0.1mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。现在是29页\一共有37页\编辑于星期三③用玻璃刮刀涂布玻璃涂棒现在是30页\一共有37页\编辑于星期三③将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待玻璃刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个培养基表面。现在是31页\一共有37页\编辑于星期三④将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h。④恒温培养箱中培养恒温培养箱现在是32页\一共有37页\编辑于星期三结果：以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。10-110-210-310-410-5现在是33页\一共有37页\编辑于星期三现在是34页\一共有37页\编辑于星期三倒平板平板划线分离练一练，识一识稀释涂布分离接种环玻璃刮刀现在是35页\一共有37页\编辑于星期三例题：要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养，并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题：（1）对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是

，为调节渗透压，要加入一定量的

。为进行大肠杆菌的分离，还要加入

配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。蛋白胨和酵母提取物氯化钠琼脂现在是36页\一共有37页\编辑于星期三（2）获得纯净微生物培养物的关键是

，为此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采用

法灭菌，接种环采用灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须

以防止空气中的杂菌污染。（3）大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基，接种后将培养基置于37℃摇床振荡条件下培养12h。菌种的分离一般在固体培养基上采用

法，并