基因工程的主要操作技术及原理

基因工程的主要操作技术及原理现在是1页\一共有81页\编辑于星期三DNA提取总DNA提取1、植物总DNA提取2、动物总DNA提取3、大肠杆菌总DNA提取4、质粒DNA提取现在是2页\一共有81页\编辑于星期三总DNA提取DNA的应用构建基因组文库：100kbSouthern杂交(包括RFLP)50kbPCR分离基因等50kb现在是3页\一共有81页\编辑于星期三因材施提根据不同研究需要，保证结构的相应完整性尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子在DNA提取过程中应做到现在是4页\一共有81页\编辑于星期三1、植物细胞总DNA提取总原则：取材（尽量新鲜）液氮研磨裂解去蛋白和细胞物浓缩。现在是5页\一共有81页\编辑于星期三（1）CTAB法：CTAB(cetyltriethylammoniumbromide)(十六烷基三甲基溴化铵)原理：CTAB是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在高盐溶液中(0.7mol/LNaCl)是可溶的，当降低溶液盐浓度到0.3mol/LNaCl时，从溶液中沉淀，通过离心就可将其与蛋白，多糖类物质分开，在经过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA。CTAB溶于乙醇或异丙醇进而除去在高离子强度的溶液中(>0.7mol/LNaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，不能沉淀核酸。CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。另外，它还能保护DNA不受内源核酸酶的降解。现在是6页\一共有81页\编辑于星期三高盐提取低盐沉淀高盐溶解乙醇沉淀经典的CTAB法使用两种缓冲液，高盐提取缓冲液：1％（冷冻干燥材料）或2％CTAB（新鲜材料）、0.7mol或1.4mol/LNaCl沉淀缓冲液：1％CTAB，不含Nacl现在是7页\一共有81页\编辑于星期三操作步骤1、取幼嫩的植物叶片（3-5g）剪碎液氮研磨成粉，转入1.5ml离心管内。加入等体积的65℃预热的DNA提取缓冲液置于65℃的恒温水浴摇床上1-2h(1.5h)。2、加入等体积的氯仿：异戊醇(24：1)，轻轻上下颠倒5分钟，静置5分钟，之后于12000rpm离心10分钟。3、吸取上层水相，重复步骤2一次。4、吸取上层水相，加入预冷2/3体积的异丙醇，轻缓颠倒2分钟并置-20℃冰箱内10min，待DNA沉淀后于12000rpm离心收集，收集的DNA于70%乙醇中洗2-3次。将弃去乙醇风干后的DNA加适量水使其溶解。现在是8页\一共有81页\编辑于星期三5、待DNA完全溶解后加入1-2μl不含RNAaseA（10mg/ml），37℃保温1h以除去DNA中的RNA。6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿：异戊醇（24：1）轻轻上下颠倒10分钟后10000rpm离心10分钟。7、吸取上层水相并先后加入1/10体积的3M醋酸钠及2倍总体积的预冷的无水乙醇，接着置于-20℃冰箱，10分钟后10000rpm离心10分钟，弃去无水乙醇，加入70％乙醇洗涤2-3次，风干，最后将DNA溶于适量（200-500μl）TE中。8、待DNA完全溶解后进行1%琼脂糖凝胶电泳，检查DNA的质量并据已知的DNA分子量标准估计其浓度。调整浓度后的DNA置于-20℃备用。

现在是9页\一共有81页\编辑于星期三CTAB法的优点能很好地去除糖类杂质对于含糖较高的材料可优先使用。在提取时能同时得到高质量的DNA及RNA。可根据需要分别进行纯化，如只需要DNA，则可用RNase（核糖核酸酶）水解掉RNA。现在是10页\一共有81页\编辑于星期三

(2)SDS法

利用高浓度的SDS，在较高温度(55～65℃)条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的做法使蛋白质及多糖杂质沉淀(最常用的是加入5mol／L的KAc于冰上保温，在低温条件下KAC与蛋白质及多糖结合成不溶物)，离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚／氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。现在是11页\一共有81页\编辑于星期三操作步骤1.将1g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2ml离心管中。2.加入1.2ml预热至65℃的提取缓冲液(3V)，轻缓振荡混匀，加入120μl20%SDS(达到终浓度2%)，混匀，置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。3.加入0.45ml5M的醋酸钾（1/10V），混匀，冰浴20分钟，在10000rpm离心20min。需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，取上清液转入另一离心管中。4.加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀，12000rpm离心15min。现在是12页\一共有81页\编辑于星期三5.转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V冰预冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，（见丝状沉淀）-20℃放置30分钟沉淀核酸。6.25℃，12000rpm，离心10min，收集沉淀。7.弃上清，70％乙醇洗两次。8.凉干DNA，溶于50µlddH2O（或TEbuffer），4℃保存备用。现在是13页\一共有81页\编辑于星期三SDS法的优缺点优点：SDS法操作简单、温和，也可提取到分子量较高的DNA。缺点：产物含糖类杂质较多。该方法所得的DNA样品也可直接用于Southern杂交，但在限制性内切酶消化时需加大酶用量，并适当延长反应时间。现在是14页\一共有81页\编辑于星期三2、动物细胞总DNA提取取材，液氮研磨，裂解，去蛋白和细胞物，浓缩。裂解采用：SDS和蛋白酶K。现在是15页\一共有81页\编辑于星期三操作步骤切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。加1ml10%SDS,混匀,此时样品变得很粘稠。加50ul或1mg蛋白酶K,37℃保温1-2小时,直到组织完全解体。加1ml5mol/LNaCl,混匀,10000rpm离心数秒钟。取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后,10000rpm离心5分钟。现在是16页\一共有81页\编辑于星期三

取上清加1/10体积3mol/LNaAc,及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。4℃，12000g离心10分钟，弃上清。70%乙醇洗涤；4℃，12000g离心5分钟，弃上清，重复本步骤1次。自然干燥后加入1×TE或超纯水30-50μl，4℃or-20℃保存。现在是17页\一共有81页\编辑于星期三3、大肠杆菌总DNA提取基本思路：（1）acultureofbacteriaisgrownandthenharvested（2）thecellsarebrokenopentoreleasetheircontents现在是18页\一共有81页\编辑于星期三裂解机械裂解化学裂解：溶菌酶orEDTAorbothSDS现在是19页\一共有81页\编辑于星期三(3)thiscellextractistreatedtoremoveallcomponentexcepttheDNA去蛋白：酚氯仿抽提(4)TheresultingDNAsolutionisconcentrated浓缩：乙醇，加单价阳离子，如Na+-20℃放置,离心。现在是20页\一共有81页\编辑于星期三现在是21页\一共有81页\编辑于星期三操作步骤100ml细菌过夜培养液,5000rpm离心10分钟,去上清液。加9.5mlTE悬浮沉淀,并加0.5ml10%SDS,50μl20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶K,混匀,37℃保温1小时。加1.5ml5mol/LNaCl,混匀。加1.5mlCTAB/NaCl溶液,混匀,65℃保温20分钟。用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提,5000rpm离心10分钟,将上清液移至干净离心管。用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提,取上清液移至干净管中。现在是22页\一共有81页\编辑于星期三操作步骤加1倍体积异丙醇,颠倒混合,室温下静止10分钟，沉淀DNA。4℃，12000g离心10分钟，弃上清；70%乙醇洗涤；4℃，12000g离心5分钟，弃上清，重复本步骤1次;自然干燥后加入1×TE或超纯水30-50μl，4℃or-20℃保存。现在是23页\一共有81页\编辑于星期三4、质粒DNA提取如何区分细菌和质粒DNA?二者DNA分子的构型不同大肠杆菌染色体DNA构型：线性的或开环的DNA分子质粒：共价闭合环状的DNA(cccDNA)分子现在是24页\一共有81页\编辑于星期三碱法提取质粒的原理pH值12.0～12.6。线性的DNA会被变性，两条链彻底分开。而cccDNA则不会被变性。但氢键会被断裂，互补的两条链仍然会紧密地结合在一起。中性pH值cccDNA:迅速地复性。线性的染色体DNA:不能复性,聚集形成网状的结构。离心:在上清液cccDNA。沉淀中：线性DNA和细胞残骸蛋白。现在是25页\一共有81页\编辑于星期三提取的主要步骤细菌的培养质粒DNA的分离和纯化细菌的收集和裂解现在是26页\一共有81页\编辑于星期三试剂溶液Ⅰ:50mM葡萄糖，25mMTris-HCl(pH8.0)，10mMEDTA(pH8.0）溶液Ⅱ:0.2MNaOH，1%SDS溶液Ⅲ:醋酸钾（3MKAc）缓冲液，pH4.8TE：10mMTris-HCl(pH8.0)，1mMEDTA(pH8.0)苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）乙醇（无水乙醇、70%乙醇）现在是27页\一共有81页\编辑于星期三挑取LB固体培养基上生长的单菌落，接种于2.0mLLB（含相应抗生素）液体培养基中，37℃、250g振荡培养过夜（约12-14hr）。用2ml离心管收集培养菌液；4℃，12000g离心1分钟，弃上清。加入100μl冰浴的质粒提取液I，涡旋混匀。加200μl新配制的质粒提取液II，盖紧管口，轻轻颠倒数次，冰浴5分钟。加150μl冰浴的质粒提取液III，轻轻颠倒数次，冰浴5分钟。操作步骤现在是28页\一共有81页\编辑于星期三操作步骤4℃，12000g离心5~10分钟，将上清移至新离心管中，加入10μlRNA酶(1μg/μl)，37℃处理2小时。用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提，充分混匀；4℃，12000g离心5分钟，将上清移入新的离心管中。加入等体积的氯仿：异戊醇(24：1)，充分混匀；4℃，12000g离心5分钟，将上清移入新的离心管中。加2倍体积的预冷的无水乙醇，轻轻混匀，-20℃放置30分钟~1小时。4℃，12000g离心10分钟，弃上清。70%乙醇洗涤；4℃，12000g离心5分钟，弃上清，重复本步骤1次。自然干燥后加入1×TE或超纯水30-50μl，4℃or-20℃保存。现在是29页\一共有81页\编辑于星期三氯化铯密度梯度离心法纯化质粒DNA

大肠杆菌染色体DNA构型：线性的或开环的DNA分子因其具有游离的末端而易于解旋，故可结合相当大量的EB分子浮力密度小。质粒共价闭合环状的DNA(cccDNA)分子，由于没有游离的末端，只能发生有限的解旋反应，便限制了EB分子的结合数量，浮力密度大。现在是30页\一共有81页\编辑于星期三RNA的提取现在是31页\一共有81页\编辑于星期三防止RNA降解，抑制RNAse活性所有的组织中均存在RNA酶，人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染。需戴手套操作并经常更换（使用一次性手套）。所用的玻璃器皿需置于干燥烘箱中200℃烘烤2小时以上。材料如塑料容器等皆可用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液处理,高压灭菌。

DEPC:一种高活性的烷基化试剂。常用做核酸酶抑制剂(特别是用于灭活广泛存在的核糖核酸酶)、组氨酸残基修饰剂等。现在是32页\一共有81页\编辑于星期三DEPC使用方法DEPC是RNA酶的化学修饰剂,它和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应而抑制酶活性。DEPC与氨水溶液混合会产生致癌物,因而使用时需小心。试剂也可用DEPC处理,加入DEPC至0.1%浓度高压灭菌以消除残存的DEPC,否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。DEPC能与胺和巯基反应,因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。Tris溶液可用DEPC处理的水配制然后高压灭菌。配制的溶液如不能高压灭菌,可用DEPC处理水配制。现在是33页\一共有81页\编辑于星期三提取方法异硫氰酸胍热苯酚法Trizol法mRNA3’末端含有多聚(A)+吸附纯化现在是34页\一共有81页\编辑于星期三动植物组织mRNA提取

1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶装蒸馏水，然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。

2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。现在是35页\一共有81页\编辑于星期三（一）动植物总RNA提取-Trizol法

[适用范围]:人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，(mg-g)[优点]：无蛋白和DNA污染。[用途]：Northern斑点分析，斑点杂交，Poly(A)+分离。体外翻译RNase封阻分析。分子克隆。现在是36页\一共有81页\编辑于星期三

组织液氮研磨加Trizol（50-100mg/1mlTrizol）室温放置5分钟0.2ml氯仿/1mlTrizol离心取上清每mlTrizol液加0.5ml异丙醇室温放置10min，离心取沉淀75%乙醇洗沉淀，干燥剧烈摇晃15秒，室温放置2-3分钟

12000×g，10minutes，4℃现在是37页\一共有81页\编辑于星期三（二）mRNA纯化原理：mRNA3’末端poly(A)+，oligo(dT)纤维素oligd(T)高盐缓冲液，mRNA特异的吸附低盐浓度或蒸馏水中，mRNA洗脱两次oligo(dT)纤维素柱，可得到较纯的mRNA现在是38页\一共有81页\编辑于星期三植物病毒RNA提取

取提纯的病毒颗粒TMV等体积酚/氯仿抽提取上清等体积酚/氯仿抽提取上清等体积氯仿抽提乙醇沉淀现在是39页\一共有81页\编辑于星期三核酸电泳PCR扩增分子杂交测序主要检测技术现在是40页\一共有81页\编辑于星期三基本原理DNA或者RNA中磷酸基团是呈离子态的，可以说DNA和RNA的多核苷酸链可以叫做多聚阴离子，在电场下会向正极移动。

核酸电泳现在是41页\一共有81页\编辑于星期三DNA/RNA的琼脂糖凝胶检测现在是42页\一共有81页\编辑于星期三一、实验原理

电泳是现在用于分离和纯化DNA/RNA片段的最常用技术。当制备好的一块“胶”即一块包含电解质的多孔支持介质并把它置于静电场中，DNA/RNA分子将向阳极移动，这是因为DNA/RNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有富含负电荷的磷酸根残基。现在是43页\一共有81页\编辑于星期三当DNA/RNA长度增加时，来自凝胶的阻力就会增加，不同长度的DNA/RNA片段就会出现不同的迁移率。因而就可依据DNA/RNA分子的大小使其分离。现在是44页\一共有81页\编辑于星期三分离长度凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳200bp—近50kb聚丙烯酰胺凝胶电泳5—500bp分辨率高采用不同浓度的凝胶可以分辨范围广泛的DNA分子。现在是45页\一共有81页\编辑于星期三不同浓度琼脂糖凝胶的分离范围

凝胶中的琼脂糖含量[%（W/V）]DNA/RNA分子的分离范围（kb）0.35—600.61—200.70.8—100.90.5—71.20.4—61.50.2—320.1—2现在是46页\一共有81页\编辑于星期三EB染料溴化乙锭（EB）是一种吖啶类染料，它在紫外灯照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。

现在是47页\一共有81页\编辑于星期三电泳缓冲液的组成

Tris—乙酸（TAE）Tris—硼酸（TBE）Tris—磷酸（TPE）其浓度约为50mmoL/L，PH为7.5—7.8，这些缓冲液均含有EDTA。这些缓冲液通常配制成浓缩液（母液），贮存于室温。现在是48页\一共有81页\编辑于星期三常用的电泳缓冲液的配制缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris—乙酸（TAE）1×：0.04moL/LTris—乙酸

0.001moL/LEDTA50×：242gTris碱57.7mL冰乙酸100mL0.5moL/LEDTA(PH8.0)Tris—磷酸（TPE）1×：0.09moL/LTris—磷酸

0.002moL/LEDTA10×：108gTris碱15.5mL85%磷酸40mL0.5moL/LEDTA(PH8.0)Tris—硼酸（TBE）0.5×0.045moL/LTris—硼酸

0.001moL/LEDTA5×：54gTris碱27.5g硼酸20mL0.5moL/LEDTA(PH8.0)现在是49页\一共有81页\编辑于星期三电泳缓冲液比较缓冲液缓冲容量迁移速度分辨率用途TAE最低最快(高10％)高分子量高高度复杂DNA混合物；超螺旋DNATBE很高较慢低分子量高价格昂贵，不常用TPE现在是50页\一共有81页\编辑于星期三加样缓冲液

缓冲液类型

6×缓冲液贮存温度I

0.25%溴酚蓝

0.25%二甲苯青FF40%（W/V）蔗糖水溶液4℃II

0.25%溴酚蓝

0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖水溶液室温III

0.25%溴酚蓝

0.25%二甲苯青FF30%甘油水溶液4℃IV

0.25%溴酚蓝

40%（W/V蔗糖水溶液）4℃V（碱性加样缓冲液）

300mmoL/LNaoH6mmoL/LEDTA18%聚蔗糖水溶液

0．15%溴甲酚绿

0．25%二甲苯青FF4℃现在是51页\一共有81页\编辑于星期三加样缓冲液可以增大样品密度，以确保DNA均匀进入样品孔内，还可以使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利。溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，

溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约与长300bp的双链线性DNA相同，而二甲苯青FF在琼脂糖凝胶中移动的速率则与4kb双链线性DNA相同。

现在是52页\一共有81页\编辑于星期三DNA片段长度标记

DNA片段长度标记通常叫作DNAMarker,实验使用的DNA片段长度标记，一般包括250bpladder，DL2000，DL5000，DL10000等，DNAMarker不仅可以作为凝胶中DNA片段长度的一个标记，还可以作为电泳的对照。现在是53页\一共有81页\编辑于星期三现在是54页\一共有81页\编辑于星期三现在是55页\一共有81页\编辑于星期三现在是56页\一共有81页\编辑于星期三将温热琼脂糖倒入胶床中，凝胶的厚度在3—5mm之间，凝固20—60min。现在是57页\一共有81页\编辑于星期三凝胶制备的注意事项1、配胶和电泳需要使用同一批次的缓冲液（一些限制酶缓冲液含有高浓度盐，能减慢DNA的迁移，并可使临近孔泳带变斜）2、琼脂糖要彻底熔化，时间不宜过长3、EB含量要适当4、凝胶应存放在阴凉处，再次用时加入少量电泳液，再熔化5、检查梳子6、拔取梳子时应均匀用力，检查凝胶孔的整齐度7、凝胶稍厚些，避免样品溢出现在是58页\一共有81页\编辑于星期三注意事项与实验技巧制胶和加样过程中要防治气泡的产生。EB具有强诱变性，可致癌。必须戴手套操作，严格注意防护。凝胶一定要加热熔解完全，均匀，可以对着光亮的地方看看清澈不清澈；一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看；上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压；如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘效应，中间电场比较均匀；做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔内，Tip头不宜插入样品孔太深，也不要穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA带型不整齐；电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。现在是59页\一共有81页\编辑于星期三迁移速率的决定因素

DNA的分子大小

线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比。琼脂糖浓度

一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。

DNA分子的构象

超螺旋DNA移动〉环状〉线状双链DNA现在是60页\一共有81页\编辑于星期三电源电压在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围减小。电压不得超过5v/cm。嵌入染料的存在

EB嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15％。。现在是61页\一共有81页\编辑于星期三

离子强度影响

电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。现在是62页\一共有81页\编辑于星期三聚丙烯酰胺凝胶电泳现在是63页\一共有81页\编辑于星期三原理

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(N，N，N，N—tetramethylethylenediamine，简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(ammoniumpersulfate(NH4)2S2O8，简称AP)或核黄素(ribofavin即vitaminB2，C17H20O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis，简称PAGE)。现在是64页\一共有81页\编辑于星期三聚丙烯酰胺凝胶有下列特性：在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；对pH和温度变化较稳定；几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g；凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。现在是65页\一共有81页\编辑于星期三凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关

分子量范围与凝胶浓度的关系分子量范围 适用的凝胶浓度/(%)

蛋白质

104 20-30 1-4×104 15-201-5×104-1×105 10-15 1×105 5-10

5×105 2-5

核酸(RNA) 104 15–20 104–105 5-10 105-2×106 2-2.6 现在是66页\一共有81页\编辑于星期三缓冲液：TBE凝胶聚丙烯酰胺：丙烯酰胺/亚甲双丙烯酰胺（29：1）；TEMED和过硫酸铵（10％）。染色：一般为银染聚丙烯酰胺凝胶电泳-DNA现在是67页\一共有81页\编辑于星期三缓冲系统的选择

一般情况下，在被分析的蛋白质稳定的pH范围，凡不与SDS发