乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证

乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证

精选课件课程要求掌握：①乙肝表面抗原的ELISA法定量检测方法；②ELISA法方法学评价的方法。熟悉：①定量检测的酶标仪操作要领；②各种缓冲液的配制。了解：ELISA检测中的影响因素和注意事项。精选课件试验目的

进行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法学验证。精选课件试验材料

1试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。2仪器及酶标板酶标仪：Bio-Rad680；洗板机：Bio-Rad1575；超纯水系统：MilliporeElix；电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有限公司。精选课件3溶液配制0.01MpH7.4的PBS缓冲液：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。质控品：用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。精选课件试验方法

1标准曲线各浓度的配制用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625ng/ml。精选课件2测定方法

设计标准品、质控品及空白分配方案；取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按需要重新配制；在相应孔中加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul；37℃温育30min，洗板4次；加入酶标抗体，生物素二抗，50ul/孔；37℃温育30min，洗板4次；加入A、B液,50ul/孔，37℃温育15分钟。加入终止液，50ul/孔。精选课件3标准曲线制作及结果计算酶标板放入酶标仪，盖上盖子；在电脑上打开MicroplateManager5.2软件选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值；输入标准品各浓度值，以双对数法制备标准曲线，获取各孔的浓度值，打印标准曲线图和计算结果。精选课件ELISA法标准曲线示意图精选课件4准确度（回收率）计算

按示例表1样式列表并计算回收率。精选课件VEGFR2-Fc(ng/ml)测定值(ng/ml)回收率(%)平均回收率RR(%)SD(%)2021.765108.825103.1599.1517.78988.94520.301101.50522.612113.0620.692103.461011.279112.79116.0923.8211.148111.4811.739117.3911.828118.2812.052120.5256.467129.34102.52815.884.69593.94.41988.385.123102.464.92898.56精选课件5按示例表列表并计算精密度。精选课件板内精密度VEGFR2-Fc（ng/ml）测定值RSD(%)123452021.76517.78920.30122.61320.69220.632±1.838.871011.27911.14811.73911.82812.05211.609±0.383.2756.4674.6954.4195.1234.9285.126±0.7915.41精选课件板间精密度VEGFR2-Fc（ng/ml）测定值RSD(%)2021.76419.26221.5197.78914.76015.63020.30116.95517.86222.61219.64322.16020.69218.14420.43919.302±2.3912.381011.27810.09012.17311.1489.92811.86911.73910.45912.55811.82810.47912.45512.05210.70912.58411.423±0.917.9756.4765.6886.7344.6954.0634.7864.4173.7884.4935.1234.4635.3244.9284.2735.1354.959±0.8316.737精选课件6检测限（LOD）计算：取空白孔的OD值的均数加2倍标准差。精选课件注意事项标准品和质控品配制要准确。实验各个环节都很重要，每步操作都要认真。精选课件讨论1.实验背景介绍（目的、采用的方法、检测原理、方法