免 疫 诊 断PPT演示课件

免疫诊断P241

1第一节抗原或抗体的检测一、原理：

物质基础：抗原的表位与抗体的高变区分子间结构互补性与亲和性。

反应的阶段性：

◆特异性结合阶段

◆可见反应阶段2㈠特异性：㈡比例性：㈢可逆性：抗原－抗体非共价建前带后带等价带二、抗原抗体反应的特点：31.凝集反应：颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，在有电解质存在时，比例适当，形成肉眼可见的凝集团块。凝集沉淀标记技术(二)抗原或抗体的检测方法：4（1）直接凝集：

玻片法：定性检测未知抗原

如ABO血型鉴定、细菌鉴定试管法：定量检测未知抗体如肥达氏反应直接凝集反应5（2）间接凝集：载体颗粒（RBC、乳胶等）间接凝集：包被已知抗原，如Coombstest反向间接凝集：包被已知抗体已知6间接凝集抑制反应：妊娠乳胶试验(HCG)标本72.沉淀反应：可溶性抗原（血清蛋白、细胞裂解液等）与相应抗体结合后，在有电解质存在时，比例适当，出现肉眼可见的沉淀物。半固体琼脂凝胶为介质。8原理:检测抗原⑴单向免疫扩散：Ab+琼脂制板打孔AgNSAgAg加样观察（含量）9沉淀环Ag扩散Ab固定于琼脂单向免疫扩散10（2）双向免疫扩散：琼脂AbNS11(3)对流免疫电泳：方法和原理：双扩＋电泳NSAgAb12（4）免疫电泳原理：电泳后双扩应用：血清蛋白种类分析133.免疫标记技术：标记物：荧光素、酶、放射性核素等特点：敏感性高，定性、定位、定量14（1）免疫荧光法：

FITC、PE应用：检测CD分子；传染病和自身免疫病诊断。15FITC标记16（2）酶免疫测定：HRP、AP

*酶免疫组化法：

测定组织中或细胞表面抗原

*酶联免疫吸附试验（ELISA）：测定可溶性抗原或抗体17ELISA原理：

将已知抗原或抗体吸附于固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤液将游离成分洗去。18方法：*双抗体夹心法：检测抗原Ag底物包被标本洗涤酶标抗体19*间接法：检测抗体洗涤洗涤洗涤标本观察结果20*生物素-亲和素系统（BAS）ELISA：生物素标记抗体，酶标记亲和素*抗原竞争抑制法：标本21（3）放射免疫测定法（RIA）：

131I、125I标记，微量物质测定或放射自显影22（4）免疫印迹WesternBlot覆盖转印→硝酸纤维素膜（去垢剂）将分子大小不同的蛋白质分开412412023稀释的抗凝血淋巴细胞分离液淋巴细胞分离液第二节淋巴细胞的测定外周血单个核细胞（PBMC）分离：

密度梯度分离法血浆血小板PBMC红细胞粒细胞单核细胞淋巴细胞90%24淋巴细胞亚群的分离与鉴定：尼龙毛分离法：E花结实验：CD2/LFA-225利用表面标志分离淋巴细胞亚群免疫荧光26流式细胞术：样品进入孔待分离单细胞悬液＋荧光标记抗体产生散射光光电倍增管发射荧光根据细胞表面电荷27Lc功能测定：1.淋巴细胞增殖/转化试验：原理：

有丝分裂原等非特异刺激T、B细胞向淋巴母细胞转化、增殖。方法：

MTT法：线粒体琥珀脱氢酶MTT（噻唑盐）甲臜颗粒（紫蓝色）28氚标记的胸腺嘧啶核苷放射能丝裂原淋巴细胞增殖实验3H-TdR掺入法MTT用酶标仪测定细胞培养OD值292.T细胞介导的细胞毒试验：CTL待检杀伤靶