DB21T 3241-2020玉米转基因成分检测操作技术规程

ICS65.020.20辽DB21宁省地方标准DBT3241—2020alspecificationfordetectionofgeneticallymodifiedcomponentsinMaize04-30实施辽宁省市场监督管理局发布前言GBT1.1-2009给出的规则编写。单位：辽宁省农业科学院。依法进行评估及复审。玉米转基因成分检测操作技术规程、废弃物处理等内容。R(包括所有的修改单)适用于本文件。GBT495.8转基因产品检测蛋白质检测方法SNT35实验室生物废弃物管理要求5号公告-4-2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化2031号公告-19-2013转基因植物及其产品成分检测抽样59号公告-4-2015转基因植物及其产品成分检测定性PCR方法制定指南文件。3.1PCRPCRblanknegativereagentcontrol条dipstickformat性试验证明、生产厂家、pling适合的工具按照规定的方法，从市场或田间随机采集样品的活动。esendingDNA盒DNAExtractionKit试剂或耗材。4抽样4.2种子及其加工品产日期生产单位情况(单位名称、通讯地址、联系人、电话)、抽样单位情况(单位名称、联系人、电话、通讯地址)、受检人签字、受检单位负责人签字、受检单位(公章)、抽样人签字、抽样单位(公章)、、备注。4.3叶片PS杯、剪刀、称量纸、试纸条、玻璃研磨棒等。4.3.3采样信息表根据实际情况包含以下内容：单位名称(公章)、序号、样品编号、取样地点(市、5样品接收5.1所送样品按照样品接收所规定的要求执行。单位、联系电话、付费总额、式、委托人、到样日期、收样人、备注。玉米样品不能达到规定数量或重量，则应注明不能复检。其它限量时需要的样品数量可以按照农业部的再进行编号。返品处理3样品处理的研磨过程需在负压或局部负压环境下操作。。剂验证试剂包括：DNA提取试剂盒、引物、PCR反应体系相关试剂和试纸条。检测DNA-2010中适合的方法进行，也可以选用经过验证的A8.1.2样品DNA的提取纯度OD260/OD280值应在1.7~2.0之间，超出范围的应重新进行提取。提取好的DNA按照公式：加水量(µL)﹦(DNA浓度ng/µL÷25-1)×吸取DNA量(µL)，稀释至25ng/µL，置于2样品的试纸条检测8.2.1试纸条检测可以按照GB/T19495.8转基因产品检测蛋白质检测方法中的方法进行。8.2.2商业化的试纸条在使用前需用已知转基因阳性样品进行验证，合格后再使用。引物设计与合成指南的规定进行设计和验证。3.2引物需按现行有效的标准进行合成。引物PCR扩增PCRDNA样品加入应在不同的超净工作台或生物安全柜内进行。8.4.3玉米样品的PCR扩增参数包括：CaMV35S启动子、NOS终止子、bar或pat基因和玉米内标准琼脂糖凝胶电泳1根据选用参数的扩增片段，选择合适的Marker，一般选用DL2000Marker。.5.2配制的琼脂糖凝胶浓度为2%，即每100mL电泳液中加入2g琼脂糖。min8.5.4DNA向电泳的正极泳动，点样孔放置于负极方向。8.5.5电源控制在2V/cm~5V/cm,胶板长度在12cm左右时，电压一般在80V~110V，电泳时间为40min~60min。9结果判定与复验9.1筛选因子检测结果为阴性的，即可判定为转基因阴性样品。筛选因子检测结果出现一个或多个因的分子特征及对应的转基因玉米品种见附录A。域应具有防盗和监控设施。污染。冰箱冷藏保存，叶片样品冰箱冷冻保存。无害化处理之后按照SN/T4835实验室生物废弃物管理要求进行处理。11.3在进行琼脂糖凝胶电泳时，尽量避免使用EB(溴化乙锭)进行染色，如必需使用时，应将使用SNT4835实验室生物废弃物管理要求进(资料性附录)Bt1CaMV35Scry1AbNOSCaMV35SpatNOSBt76P-CDPKcry1AbCaMV35SP-PPCcry1AbCaMV35SCaMV35SBarCaMV35SAPractI/RuBiSCom-epspsNOSMON810CaMV35Scry1AbMON863CaMV35Scry3Bb1T-hspCaMV35SnptIINOSNK603eCaMV35SCp4-epspsNOSPractI/CTP2Cp4-epspsNOSTCaMV35SpatCaMV35STC7UbiZm1cry1FORF25polyACaMV35SpatCaMV35SUbiZm1cry34Ab1PinIIP-peroxidasecry35Ab1pinIICaMV35SpatCaMV35SMON89034eCaMV35Scry1A.105Hsp17FMV35Scry2AbNOSCaMV35SNptIINOSMON88017CaMV35Scry3Bb1T-hspP-ract1/CTP2Cp4-epspsNOSMIR604Pmicry3ANOSUbiZm1mpiNOSMIR162ZmUbiIntvip3Aa19eCaMV35SZmUbiIntpmiNOSGz