国产重组乙型肝炎疫苗CHO细胞

国产重组乙型肝炎疫苗CHO细胞第1页/共36页什么是乙型肝炎？是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后所引起的疾病。乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒，主要存在于肝细胞内并损害肝细胞，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。乙型病毒性肝炎分急性和慢性两种。第2页/共36页急性乙型肝炎在成年人中90%可自愈，而慢性乙型肝炎表现不一，分为慢性乙肝携带者、慢性活动性乙型肝炎、乙肝肝硬化等。我国目前乙肝病毒携带率为7.18%，其中约三分之一有反复肝损害，表现为活动性的乙型肝炎或者肝硬化。随着乙肝疫苗的推广应用，我国乙肝病毒感染率逐年下降，5岁以下儿童的HBsAg携带率仅为0.96%。(2006年我国进行的乙型肝炎流行病毒调查结果)第3页/共36页41992年与2006年HBsAg阳性率比较2010年湖北省CDC在2个市的3个县人群中开展乙肝血清学监测，共监测人群700人,HBsAg阳性率为2.14%；0～4岁为0.67%,15岁以上为5.00%,15～19岁最高,为7.00%2006年调查结果表明，我国1-59人群乙肝表面抗原携带率为7.18%，5岁以下儿童的HBsAg携带率仅为0.96%

第4页/共36页2011年全国报告发病/死亡前10位病种第5页/共36页乙肝为何难治?乙肝病毒两层结构，外包一层致密坚硬的蛋白质外壳，专门抵御药物对他的作用，药物对他根本无可奈何；病毒隐匿在肝细胞里面复制，药物分子比肝细胞还大，根本无法进入到肝细胞里面，进而也不可能对病毒有丝毫的作用；

病毒有一个复制模块，存在于细胞核中，专门诱导病毒高速复制繁殖，药物分子连细胞都无法进入，更无法进入到细胞核中；

病毒会变性、变异。药物一接近它它就会迅速的改变结构和特性，从而让药物无法捕捉到他，逃避掉药物对它的作用；

久之病毒会与人体基因长生链接，此时任何药物都无法做到切除，必需借助其它高科技医学手段；

病毒生命周期是90天，附着药物分子没有那么久的吞杀效力，一般都会被人体快速消化掉，所以杀灭病毒根本无从谈起。第6页/共36页乙肝治疗新技术三大肝病突破性技术先后研发成功。最早的是日本中微子透析技术；紧随其后，德国O3技术也震撼性问世；2011年末，我国上海复旦大学研究的治疗性疫苗（乙克）也宣告三期临床试验效果显著。复旦新闻文化网/fudannews/2011/1115/29282.html第7页/共36页8目前乙肝疫苗接种的问题1、低无应答率高，情况普遍，10-15%接种疫苗后无应答。2、保护时间短，新生儿接种5微克3年后抗体阳性率约30%。3、成人应用剂量低。4、母婴阻断没有正确处理。第8页/共36页华北制药—金坦生物99不同剂量乙肝疫苗母婴阻断效果疫苗剂量母亲单阳性母亲双阳性调查人数阳性人数阳性率（％）调查人数阳性人数阳性率（％）10g317121.179044.445g32593312.74612337.70合计430358.141512717.88崔富强王富珍郑徽，接种不同剂量重组乙型肝炎疫苗（酵母）阻断乙型肝炎病毒母婴传播的评价，中国计划免疫.2007,13(4).-289-292（X2=32.616,P<0.001）X2=23.032,P<0.001乙肝疫苗预防接种常见的问题第9页/共36页10结论:1、接种10ugX3重组HepB(酵母)阻断HBV母婴传播的效果优于5ugX3重组HepB(酵母)。2、对于母亲HBsAg阳性儿童，特别是母亲HBsAg和HBeAg双阳性的儿童，主动免疫时采用10ugX3的重组HepB(酵母)为宜。第10页/共36页6不同免疫剂量低、无应答率比较

郑徽,王富珍,陈园生，等.新生儿接种重组乙型肝炎疫苗（酵母）后低、无应答率及影响因素中国计划免疫,2007;13(4):303-305.WHO,HepatitisBpositionpaper.（X2=50.91P<0.01）无应答标准：<10mIU/ml低应答标准：10～100mIU/ml第11页/共36页华北制药—金坦生物12陈胤忠，江苏省盐城市CDC，《基因重组乙型肝炎疫苗用于成人的免疫程序和接种剂量的研究》，《中国计划免疫》2005.2结果：高剂量疫苗组抗一HBsGMT和抗体高滴度分布比例均高于低剂量疫苗组；重组(CHO细胞)乙肝疫苗抗一HBsGMT高于重组(酵母)乙肝疫苗，重组(CHO细胞)乙肝疫苗10ug诱导的抗一HBsGMT显著优于10ug重组(酶母)乙肝疫苗。结论:对成人开展乙肝疫苗接种应选择高剂量的乙肝疫苗，建议选用20ug重组(CHO细胞)乙肝疫苗．并优先选择0、1、6个月免疫程序。第12页/共36页13高剂量疫苗是主流疫苗中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会联合制订《慢性乙型肝炎防治指南》（2010版）建议：对成人建议接种20μgCHO或20μg重组酵母乙型肝炎疫苗。对免疫功能低下或无应答者，应增加疫苗的接种剂量和针次；对3针免疫程序无应答者可再接种3针，并于第2次接种3针乙型肝炎疫苗后1~2个月检测血清中抗-HBs。第13页/共36页14北京疾控中心做的观察华北制药CHO20-10-10大连汉逊酵母10-10-10深圳康泰酵母10-5-5北京天坛酵母10-5-5

在大学新生当中做的观察，华北CHO疫苗阳转率最高，达到98.7%。全国肝炎疫苗研究及应用经验交流会、《中国计划免疫》2007.8第14页/共36页151、天坛2、康泰3、大连4、华北全国肝炎疫苗研究及应用经验交流会、《中国计划免疫》2007.8第15页/共36页16由此可见剂量越高，抗体滴度越高。相同剂量，产生抗体滴度相近。第16页/共36页17乙肝疫苗的种类1、血源乙肝疫苗—用无症状的HBsAg携带者的血液制成

2、基因工程乙肝疫苗—利用基因工程研制重组DNA乙肝疫苗，曾先后研制过大肠杆菌系统、啤酒酵母细胞系统、哺乳动物细胞系统和牛痘病毒系统的重组乙肝疫苗。根据生产系统：（酵母、CHO细胞）

啤酒酵母乙肝疫苗（酿酒酵母、酵母）

汉逊酵母乙肝疫苗

毕赤酵母乙肝疫苗

CHO细胞乙肝疫苗第17页/共36页乙肝疫苗的种类3、含前S蛋白的乙肝疫苗目前临床上应用的血源性疫苗与基因工程疫苗，均只含HBsAg蛋白，当证实S蛋白能增强HBsAg的免疫应答后，又注意到单纯只含HBsAg蛋白的疫苗对血液透析病人与新生儿免疫效果较差时，遂生产出添加前S蛋白的酵母源性重组乙肝疫苗，它确能明显地增强免疫应答。第18页/共36页19酵母疫苗：Engerix-B(史克)、Recombivac-B（merck）汉逊酵母：莱茵、Hepavax-Gene(绿十字韩)、

GeneVacB(印度),毕赤酵母：ShanvacB

(印度)、

Enivax-HB(印度),Euvax(LG韩国)

CHO细胞：Bio-hep-B（以色列）,

Genhevac-B（法国）,Hepacare(英国),Sci-B-vac(澳大利亚、香港、以色列)

默克2004年已经改为生产CHO疫苗。第19页/共36页现有的国产及进口基因重组乙肝疫苗20

生产单位疫苗名称(种类)剂型国内大连汉信重组乙肝苗（汉逊酵母）10μg/0.5ml/支

天坛生物重组乙肝苗（酿酒酵母）5μg/0.5ml/支10μg/0.5ml/支10μg/1.0ml/支20μg/1.0ml/支华药金坦重组乙肝苗（CHO）10μg/0.5ml/支20μg/1.0ml/支深圳康泰重组乙肝苗（酿酒酵母）10μg/0.5ml/支20μg/1.0ml/支5μg/0.5ml/支60μg/1.0ml/支北京华尔盾重组乙肝苗（CHO）10μg/支20μg/支进口益可欣重组乙肝苗（汉逊酵母）10μg/0.5ml/支20μg/ml葛兰素史克重组乙肝苗（酿酒酵母）10μg/0.5ml/支20μg/1.0ml/支联合疫苗北京科兴倍尔来福HA500EI.U.+HB10mg/1ml葛兰素史克

HA720EI.U.+HB20mg/1.0ml第20页/共36页到目前为止，有两种规模化生产的基因工程乙肝疫苗：一种是CHO细胞表达的一种是酵母细胞表达的

同重组乙肝疫苗(酵母)相比，重组乙肝疫苗(CHO细胞)具有如下特点:CHO细胞表达的重组HepB是高等真核细胞表达产物，其天然结构较低等的真核细胞酵母表达的HBsAg蛋白更适合人体吸收，生产过程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好第21页/共36页什么是重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)？

采用基因工程技术将无传染性的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的S基因片段克隆到载体，用重组载体转染真核生物CHO细胞通过细胞培养、增殖、分泌出HBsAg到培养液中，收集分泌液，经高速离心、纯化、除菌后，加人佐剂吸附(氢氧化铝)而制成第22页/共36页23CHO—中华仓鼠卵巢细胞

Chinesehamsterovarycell1、工程细胞2、国外75%以上基因工程药品由哺乳动物细胞表达,我国寥寥无几（仅有乙肝疫苗、重组人红细胞生成素两个产品）3、产品活性高4、技术门槛高中国生物工程杂志2005，25（2）第23页/共36页24《药典》及《预防接种工作规范》

收录品种，明确指明的常用疫苗：

CHO乙肝疫苗啤酒酵母乙肝疫苗

第24页/共36页25CHO乙肝疫苗的优势CHO苗特性酵母苗特性重组CHO细胞乙肝疫苗技术为我国专有技术，国家Ⅰ类新药用我国乙肝病毒流行株adr亚型的HBsAg基因，针对性更强由哺乳动物细胞（CHO细胞）表达，结构均一，抗原决定簇与天然抗原相似，免疫原性高糖基化完全，稳定性高，产品25℃放置3月后，效力仍然很高全人群应用酵母技术系美国默克公司技术转让。流行株为adw亚型低等的真核细胞酵母菌表达，抗原结构松散，影响其免疫原性。抗体维持时间短产品无糖基化，稳定性较差有人群限制，使用不便第25页/共36页26快----产生抗体时间快中国药品生物制品检定所检测，CHO疫苗第一针注射完平均第8天产生抗体。汉逊酵母疫苗第一针后平均第25天后产生抗体。

CHO8天汉逊酵母25天----中国药品生物制品检定所十一五课题第26页/共36页27产生抗体滴度高CHO疫苗酵母疫苗第27页/共36页28CHO疫苗的持久性数据：中国CDC病毒所在河北正定的观察剂量：10μg人群：新生儿免疫8年后，抗体阳性率85.76%，抗体水平在18.47mIU/ml以上。----《中国计划免疫》，2007年2月第28页/共36页29华北疫苗与其它CHO疫苗的区别1、质量标准最高。原液纯度达到99%以上；效力>1.2有效期3年2、连续生产、自动化水平高。3、生产规模大，产量高。4、扩免经验丰富。第29页/共36页

华北乙肝疫苗在新生儿的使用选取众多应用中比较代表性的几个30第30页/共36页中国肝炎防治基金会刘崇柏等关于“农村贫困地区新生儿乙型肝炎疫苗扶贫工作效果分析”（中国计划免疫2003年6月第9卷第3期）中，对中国肝炎防治基金会开展的乙型肝炎疫苗新生儿免疫扶贫项目的工作效果进行了分析。扶贫项目中使用的乙肝疫苗为北京天坛、华北制药及深圳康泰，使用华北制药疫苗的四个县中，3个县的保护率为100%，1个县保护率为95.44%。——中国计划免疫2003年6月第9卷第3期31第31页/共36页河北省卫生防疫站、中国预防医学科学院病毒学研究所