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文档简介

核酸的分离与纯化主讲人:XXX核酸提取亦是临床分子诊断最关键的操作，直接关系到实验室的成败与否，是临床分子诊断最容易发生问题步骤。背景核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸提取也成为了分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。核酸的存在形式核酸核酸是脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的总称。是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。RNADNA细胞核DNP线粒体环状DNA。细胞质中，mRNA，rRNA，tRNA。提取核酸总的原则保证核酸一级结构的完整性；排除其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；其他核酸分子，也应尽量去除。温度不要过高；保持核酸的完整性遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸的一级结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式。控制pH值范围（pH值4-10）；保持一定离子强度；减少物理因素对核酸的机械剪切力；防止核酸酶对核酸的降解。核酸提取步骤细胞裂解酶处理核酸与其他生物大分子物质分离核酸纯化核酸提取步骤使细胞裂解，核酸释放物理作用化学作用生物作用细胞裂解酶处理核酸与其他生物大分子物质分离核酸纯化核酸提取步骤细胞裂解酶处理核酸与其他生物大分子物质分离核酸纯化在核酸提取过程中，可通过加入适当的酶使不需要的物质降解，以利于核酸的分离与纯化。核酸提取步骤细胞裂解酶处理核酸与其他生物大分子物质分离核酸纯化根据所需核酸的性质和特点除去其它核酸污染，并除去提取过程中的系列试剂（盐、有机溶剂等）杂质，最后得到均一的核酸样品。核酸分离与纯化核酸分离与纯化方法酚/氯仿抽提法酚/氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并对核酸酶有抑制作用。氯仿比重大，能加速有机相与水相分层，减少残留在水相中的酚，同时氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。在酚/氯仿抽提核酸提取液时，需要振荡，为防止气泡和促使水相与有机相的分离，再加上一定量的异戊醇（酚：氯：异戊醇=25:24:1）。核酸分离与纯化方法细胞裂解同前述加入一定体积的盐溶液到细胞裂解液，离心转移上清，用乙醇沉淀进一步纯化高盐沉淀法核酸分离与纯化方法硅胶吸附法1、细胞裂解和酶处理同前所述；2、处理好的裂解液转入硅胶离心柱，高速离心，利用硅胶可以吸附核酸而不能与其他物质如蛋白质，脂类等结合的特点，洗脱这类杂质；3、重复洗涤，提高纯度，最后用核酸洗脱液获得核酸。硅胶层液体流出管道裂解液、洗涤液、洗脱液转入位置核酸分离与纯化方法其他方法磁珠硅胶吸附法加热煮沸法玻璃缠绕法甲酰胺解聚法离子交换层析密度梯度离心法……小结背景核酸存在

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