常用pH缓冲液配置方法及注意事项

常用pH缓冲液配置方法及注意事项

常用pH缓冲溶液的配制和pH值序号溶液名称配制方法pH值1氯化钾-盐酸13.0ml0.2mol/LHCl与25.0ml0.2mol/LKCl混合均匀后，加水稀释至100ml1.72氨基乙酸-盐酸在500ml水中溶解氨基乙酸150g,加480ml浓盐酸，再加水稀释至1L2.33一氯乙酸-氢氧化钠在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40gNaOH,溶解完全后再加水稀释至1L2.84邻苯二甲酸氢钾-盐酸把25.0ml0.2mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0ml0.1mol/LHCl混合均匀，加水稀释至100ml3.65邻苯一甲酸氢钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml4.86六亚甲基四胺-盐酸在200ml水中溶解六亚甲基四胺40g,加浓HCl10ml，再加水稀释至1L5.47磷酸二氢钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/L的磷酸二氢钾与23.6ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml6.88硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与4.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml8.09氯化铵-氨水把0.1mol/L氯化铵与0.1mol/L氨水以2：1比例混合均匀9.110硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与43.9ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠把49.0ml0.1mol/L氨基乙酸-氯化钠与51.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀11.612磷酸氢二钠-氢氧化钠把50.0ml0.05mol/LNaHPO与26.9ml0.1mol/I24NaOH混合均匀，加水稀释至100mlt12.013氯化钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/LKCl与66.0ml0.2mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml13.0、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteedreagent,G・R・）、分析试剂(Antalyticalreagent,A.R.)化学纯(Chemicalpure,C.P.)和实验试剂(Laboratoryreagent,L.R.)等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。药品称量要精确。配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液l.l/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KHPO,A.R.）9.08g,用蒸馏水溶24解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度(1000ml)。1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠(NaHPO,A.R.)9・47g(或者24Na2HpO4・2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入

0*81078970*610"I8f'L0*82OWZZ'L0*680"I9070*190®8"9S"S9g*zs9'9STZg*9s^'9齐7-f7.(I®)oamq/iowsi"o(I®)OdH1/IOW9I"0Hd易磁無1/1。阳【P9032J二專0HZ•OdHPN°1/§27,Za<n/i°w5i*0z峯期°1/§27,ZB9d1/1[0陋【P（三）070*86厂86"88I'19070*80*262*89•幵6*9乙予836「8^•og9®8*9e*g2*^68*8g*9gq•舒2*98*9乙£662qw99789*99*8S*I687旷898"ISg"99*01站68L'L8"S22/9乙站90TI07897972\'7ZS"96*21l予8g*z□89*81旷92*618*08872^88'91「9旷肌8*92S*Z878Z勿0*90*820^2乙2「066*66"S站肌9*99T?7.I'L0N6&70*8f7.8*SOdHM1/IOW9I/IOdH它N1/I°wgi/IHdOdffilq/I°W9I/IOdH瑚1/IOW9I/IHd（任耋：⑨寅）锻艇鞅翹帥I峯期°W4^W^>Hd回土密儡蟲'岡羽呦峯期潇•£°（WOOD圍IW吏尅幽*黝器如虽'M咪喜殳woooiNaHPO・12HO分子量=358・220.15Mol/L溶液242含53.7g/L。NaHPO•HO分子量=138・000.15Mol/L溶液含24220.7g/L。NaHPO・2H0分子量=156・030・15Mol/L溶液含24223・4g/L。0.2Mol/LPB缓冲液附表30・2mol/LPB缓冲液配制法pH0.2Mol/LNaHPO(ml)0.2Mol/LNaHPO(ml)5.8248.02492.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/LNaHPO^2HOj容液35.61g/L242NaHPO・12HO溶液含71・64g/LTOC\o"1-5"\h\z2420.2Mol/LNaHPO•HO溶液含27・60g/L242NaHPO・2HO溶液含31・21g/L242

欲配0・1Mol/LPB缓冲液则在0・2Mol/LPB缓冲液的基础上加H0稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加0・85%的NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/LPH7.2）NaCl8.0gKCl0.2gNaHPO1・15g（如为NaHPO・12H0,则为2・89g）KHPO0.2g将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115°C高压灭菌10min~15min,存在4°C冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（Boratesalinebuffer）1•硼酸（HBO）0.2Mol/L硼酸：硼酸12・37g加水至1000ml。2•硼砂（NaBO）0.05Mol/L硼砂：硼砂19・07g加水至1000ml。附表4不同pH的0・2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH0.05Mol/LpH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.41.09.07.61.58.5pH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）8.23.56.58.44.55.57.82.08.08.76.04.0&03.07.09.0&02.0七）巴比妥缓冲液pH8・2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸馏水3000ml1.17NHCl55.0ml（1.17NHCl=193ml浓HCl加1807ml蒸馏水）⑴将4.76g巴比妥钠溶于3000ml蒸馏水。⑵加1.17NHCl55ml。⑶用HCl调节pH到8.2,并加蒸馏水至4265ml。pH8・40.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10・30g加蒸馏水至1000・00mlpH8.60.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水1000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5附表50.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法

pH0.2Mol/LTris(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl(ml)23°C37C23C37C9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5九）三缓冲液）Tris—HCl不同pH,0・05Mol/L25ml0・2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加xmlO・1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）附表6Tris—HCl缓冲液配制法pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)23C37C23C37C9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24・23g,加水至1000ml。0.1NHCl：取HC18・6ml,加水至1000ml。（十）0.5Mol/LpH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3.70g3NaCO0.60g23溶于600.00ml蒸馏水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/LNaHPO94.50ml240.1NNaHPO5.50ml24混合即可9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二）Hank's液1•贮存液NaCl80.00gKCl4.00gNaHPO・12HO1.52g242KHPO0.60g24葡萄糖4.00g0.4％酚红液50.00ml双馏水加至100・00ml115°C高压灭菌15min,冰冻保存。2.工作液贮存液1份双馏水9份115C高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6%NaHCO液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。3（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler'sreagent）配方1:氯化汞6.0g碘化钾12.4g20%NaOH30ml加蒸馏水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50ml（完全溶解后）过滤，加20%NaOH50ml。用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsever's）液葡萄糖2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水100ml溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1,过滤，分装，10磅10min灭菌，4°C保存。（十五）青、链霉素混合液（简称S.P.液或双抗液）青霉素（40万U）5支链霉素（200万ug）1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10C~-20C冰箱保存备用（1万单位ug/ml）。临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml。（十六）洗液（清洁液）配方1：重铬酸钾150g蒸馏水300ml浓硫酸3000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧