实验室生物安全

实验室生物安全当前1页，总共54页。材料来源：实验室生物安全手册当前2页，总共54页。总述一、实验室生物安全概述二、实验室生物安全有关的法律法规三、病原微生物风险等级与危害等级分类四、实验室生物安全分级五、生物安全防护实验室的设施和设备要求六、药品微生物实验室生物安全防护当前3页，总共54页。实验室生物安全概述常见术语1、实验室生物安全：是指以实验室为科研和工作场所时，避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施。2、生物因子

：一切微生物和生物活性物质。3、病原体

：可使人、动物或植物致病的生物因子。当前4页，总共54页。实验室生物安全概述常见术语4、危险

：伤害发生的概率及其严重性的综合。5、危险废弃物

：有潜在生物危险、可燃、易燃、腐蚀、有毒、放射和起破坏作用的对人、环境有害的一切废弃物。6、气溶胶：悬浮于气体介质中的固态或液态微小粒子（粒径一般为0.001-100μm）形成的相对稳定的分散体系。当前5页，总共54页。实验室生物安全概述实验室感染可控性：严格执行生物安全有关的法律法规，加强和重视实验室安全监督管理，是可以防止和控制实验室感染事故的发生。

具体：

领导重视：生物安全意识、态度和责任。

科学管理：条例、预案、完善、可行。

可靠硬件：设备齐全、设施过硬、完善验证。

高素质队伍：培养、提高、坚持。

标准和程序：不断完善、SOP。当前6页，总共54页。实验室生物安全概述实验室生物安全屏障：当实验室工作人员所处理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时，通过使用个体防护装置（一级屏障）、实验室的设计建造（二级屏障）和严格遵从标准化的工作及操作程序（三级屏障）等综合措施:

1、确保实验室工作人员不受实验对象侵染。

2、确保周围环境不受其污染。当前7页，总共54页。实验室生物安全概述实验室生物安全管理的要求：国家对实验室的生物安全管理省、市对实验室的生物安全管理从事病原微生物工作机构对实验室的生物安全管理单位生物安全管理委员会实验室安全负责人实验室安全员生物安全手册当前8页，总共54页。实验室生物安全概述生物安全手册：（1）个人安全防护器材使用程序（2）病原微生物实验室的使用及管理制度（3）实验室设施安全检查和维护制度（4）试验操作技术规程的论证和审批制度（5）菌（毒）种使用和保存制（6）试验设备的安全检测校准和使用程序（7）试验操作程序（8）紧急情况及意外事故处理和报告程序（9）污物及废弃物处理程序当前9页，总共54页。实验室生物安全有关的法律法规1、2003年，国务院380号令《医疗废物管理条例》2、2004年，国务院424号令《病原微生物实验室生物安全管理条例》。3、GB19489－2004《实验室生物安全通用要求》，已修订为2008版，并于2009年7月1日实施。4、GB50346－2004《生物安全实验室建筑技术规范》，已修订为2011版，并于2011年7月1日实施当前10页，总共54页。实验室生物安全有关的法律法规5、2005年，卫生部第45号令《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》。6、2006年，卫生部第50号令《人间传染的高致病性病原微生物实验室和实验活动生物安全审批管理办法》。7、2006年，卫生部《人间传染的病原微生物名录》8、2002年，卫生部WS233－2002《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》。当前11页，总共54页。实验室生物安全有关的法律法规9、2003年，农业部第302号令《兽医实验室生物安全管理规范》10、2005年，农业部第52号令《高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法。11、2005年，农业部第53号令《动物病原微生物分类名录》12、2005年，农业部第503号公告《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范》。13、国家食品药品监督管理局《生物安全柜》YY0569－2006，已修订为2011版，于2013年6月1日执行。当前12页，总共54页。实验室生物安全有关的法律法规14、2006年，国家环境保护总局第32号令《病原微生物实验室环境安全管理办法》。15、2011年8月，国家科技部令第15号《高等级病原微生物实验室建设审查办法》当前13页，总共54页。实验室生物安全有关的法律法规到目前为止，由国家、科技部、卫生部和药监局、农业部、环保部和国家质量监督检验检疫总局等各行政主管部门已颁布实施的与实验室生物安全有关的法律法规、技术标准大约有近20项。系统地规范和要求了病原微生物实验室建设标准、审批、管理、设施、安全设备、人员等要求。

主要有：1、病原微生物分类管理的要求2、实验室分级管理的要求3、实验室生物安全管理的要求4、高等级生物安全实验室的系列审批要求当前14页，总共54页。病原微生物风险等级与危害等级分类1、病原微生物风险等级分类

第一类病原微生物第二类病原微生物第三类病原微生物第四类病原微生物统称为高致病性病原微生物当前15页，总共54页。病原微生物风险等级与危害等级分类2、病原微生物风险等级分类依据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度将病原微生物分：一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。

二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。当前16页，总共54页。病原微生物风险等级与危害等级分类2、病原微生物风险等级分类依据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度将病原微生物分：三类是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。四类是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。当前17页，总共54页。病原微生物风险等级与危害等级分类3、病原微生物危害等级分类（GB19489）危害等级I（低个体危害，低群体危害）：不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。危害等级Ⅱ(中等个体危害，有限群体危害)：能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原微生物。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。当前18页，总共54页。病原微生物风险等级与危害等级分类3、病原微生物危害等级分类（GB19489）危害等级III（高个体危害，低群体危害）：能引起人类或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能使用抗生素、抗寄生虫药治疗的病原微生物。危害等级Ⅳ(高个体危害，高群体危害)：能引起人类或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接或间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物间传播的病原微生物。当前19页，总共54页。病原微生物风险等级与危害等级分类4、病原微生物危害等级分级依据GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》，分级依据：微生物的致病性；传播方式和宿主范围；具有的有效预防措施；具有的有效治疗措施。当前20页，总共54页。实验室生物安全分级根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将实验室生物安全防护水平分为四级，一级防护水平最低，四级防护水平最高。

1、一级生物安全防护实验室（BSL-1和ABSL-1实验室）－基础实验室2、二级生物安全防护实验室（BSL-2和ABSL-2实验室）－基础实验室3、三级生物安全防护实验室（BSL-3和ABSL-3实验室）－防护实验室4、四级生物安全防护实验室

（BSL-4和ABSL-4实验室）－最高防护实验室当前21页，总共54页。实验室生物安全分级1、BSL－1实验室适用于实验对象已知对健康成年人无致病作用，对实验室工作人员和环境的潜在危害很小。防护水平最低,普通建筑物即可。当前22页，总共54页。实验室生物安全分级2、BSL－2实验室

2.1适用于：

实验对象对人和环境具有中等潜在危害。如：(1)含漱液、血清和血液等样品的诊断检测(2)溶液、固定或用其他方法处理灭活的病毒和/或无传染性病毒基因片段(3）常规的细菌和毒素检测(4）能产生气溶胶的样品处理(5）临床样品的包装、分装(6）离心管和离心机转头的封闭与开启当前23页，总共54页。实验室生物安全分级2、BSL－2实验室

2.2、特殊情况:（1）致病微生物气溶胶或溅出的操作（2）处理高浓度或大容量感染性材料2.3、要求：在生物安全柜或物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。当前24页，总共54页。实验室生物安全分级3、BSL－3实验室适用于：主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素（如禽流感），通常已（可）有预防传染的疫苗。艾滋病病毒的研究（血清学实验除外）-------自成隔离区有出入控制或为独立建筑物。当前25页，总共54页。实验室生物安全分级3、BSL－3实验室设备结构：

当前26页，总共54页。实验室生物安全分级4、BSL－4实验室戏称为魔鬼实验室当前27页，总共54页。实验室生物安全分级当前28页，总共54页。实验室生物安全分级4、BSL－4实验室当前29页，总共54页。实验室生物安全分级5、病原微生物风险等级与生物安全分级BSL－1：第四类病原微生物BSL－2：第三类病原微生物BSL—3：第二类病原微生物BSL—4：第一类病原微生物试验设施、设备要求应与所开展检测的微生物要求一致。《人间传染的病原微生物名录》（卫生部2006）规定药典涉及的阳性菌的活菌操作应在BSL-2实验室进行当前30页，总共54页。《人间传染的病原微生物名录》（卫生部2006）

药品检验有关的细菌危害程度

当前31页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求1、BSL-1实验室

(1)、应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。(2)、每个实验室在靠近出口处应设洗手池。(3)、在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开设置。(4)、实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯(5)、实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。(6)、实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。参照(7)、应有适当的消毒设备。当前32页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求2、BSL-2实验室挡鼠板：进门处。水池：门口设洗手池、感应龙头。门扇：可自闭、有可视窗、外开。可开窗：防虫纱窗地墙顶：防滑、平整、易清洁、不渗水、耐擦拭、耐腐蚀。实验台：防水，耐腐蚀、耐热。足够空间：摆放存储物品专用工作服；应戴乳胶手套。II级生物安全柜

高压蒸汽灭菌器温度：18-28℃湿度：30-70%噪声：≤60dB（A）照度：300LX标示：出入及各种警示标识当前33页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）(1)概念：用来保护操作者本人，实验室环境及实验材料，使其避免暴露于操作过程中产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的负压排气柜。(2)执行标准

YY0569－2005《生物安全柜》

YY0569－2011《二级生物安全柜》当前34页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）

（3）I级生物安全柜适用于样品不需保护的工作当前35页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）

（4）Ⅱ级生物安全柜A型(B3)30%外排进入环境30%外界空气补充70%经过滤后循环使用当前36页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）

（5）Ⅱ级生物安全柜B2型100%外排进入环境100%外界空气补充无循环使用的气流当前37页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）

（6）Ⅱ级生物安全柜B1型70%

外排进入环境70%

外界空气补充30%

过滤后循环使用当前38页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（7）Ⅱ级生物安全柜的级别差异

生物安全柜工作口平均进风速m/s循环风比例（%）排风比例（%）连接方式II级A10.38～0.517030可排到房间或套管连接处外排型A20.517030B10.513070密闭连接，硬管B20.510100密闭连接，硬管可排到房间或套管连接处当前39页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（8）Ⅱ级生物安全柜防护特征比较

当前40页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ级生物安全柜的选择①Ⅱ级生物安全柜的4个级别对微生物气溶胶的防护性能是一样的。②正常情况下，Ⅱ级生物安全柜的使用寿命为5年，如果使用全新风的Ⅱ级B2型生物安全柜，其使用寿命会缩短。③频繁更换HEPA，也会严重影响工作。

当前41页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ级生物安全柜的选择④选择Ⅱ级A型还是B型生物安全柜的关键：是取决于操作人员是否会用到挥发性的有害物质或放射性物质的因素来决定的，而不是病原微生物的因素。当操作挥发性或有毒化学试剂时，不应该使用Ⅱ级A型生物安全柜。

当前42页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（9）Ⅱ级生物安全柜的选择⑤Ⅱ级B1型生物安全柜用于操作少量挥发性化学试剂和放射性核素。⑥

Ⅱ级B2型生物安全柜是全排放型安全柜，在需要操作大量放射性核素和挥发性化学试剂时，必须使用Ⅱ级B2型生物安全柜。

当前43页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事项①将实验器具放置于安全柜中，紫外灭菌15分钟后，通风10-15分钟。②检测气流是否正常。③规范有序进行试验，即双手缓慢进入前面的开中，等待约1分钟，等安全柜调整完毕后才可对样品进行处理。④避免手臂快速移动和频繁进出安全柜，以免紊乱气流，同时避免实验材料挡住风口。⑤在生物安全柜内进行操作不能进行文字工作。

当前44页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事项⑥操作应在安全柜的中后部进行。⑦前送风格栅不得被实验材料堵住，以防干扰气流，可能使实验材料受到污染，人员暴露。⑧由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖，因此在实验结束时，包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染，并移出安全柜。⑨实验完毕，用合适的消毒剂清洁安全柜内部。紫外灭菌15分钟，通风10-15分钟后关闭安全柜。

当前45页，总共54页。生物安全防护实验室的设施和设备要求3、生物安全柜（BSC）（9）生物安全柜操作注意事项⑩HEPA滤器不能截留化学气体，同时，挥发的化学品可能损坏HEPA滤器。

⑾滤器风扇以及安全柜内插座可能产生电火花，如果在安全柜中操作易燃易挥发液体易引起火灾或者爆炸。

⑿生物安全柜在移动以及更换过滤器之前，必须清除污染。⒀在使用生物安全柜时应穿着个体防护服。

当前46页，总共54页。药品微生物实验室生物安全防护1、基本原则⑴确保实验操作人员的安全。⑵确保实验操作场所和周边环境的安全。⑶确保实验样品的安全（不被染污）。⑷确保实验仪器和设备正常运作的安全。

当前47页，总共54页。药品微生物实验室生物安全防护2、技术措施

（1）样品隔离技术（机械、气幕）

（2）定向流