微生物学实验普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察

实验一

普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察主讲:文晴生命科学学院当前1页，总共18页。实验课要求作图要求：实验报告要求用蓝色或黑色钢笔、圆珠笔或签字笔撰写，要求用铅笔作图（包括视野、观察结果、放大倍数等；值日要求：每四人一组，包括物品归位、黑板、地面、台面等，值日结束后经老师同意方可离开。3/13/2023当前2页，总共18页。一、实验目的了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的使用方法学习并掌握油镜的原理和使用方法了解并观察细菌的三种基本形态当前3页，总共18页。目镜镜筒转换器物镜通光孔聚光器压片夹反光镜镜座粗准焦螺旋细准焦螺旋镜臂镜柱载物台机械部分和光学部分普通光学显微镜的构造可分为两部分：一、普通光学显微镜的基本结构当前4页，总共18页。二、实验原理：显微镜的工作原理◆物镜上的标识

显微镜的总放大倍数=物镜放大倍数X目镜放大倍数当前5页，总共18页。油镜的放大倍数可达100×，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。由低倍镜转为高倍镜时，通过增加照明强度和开大虹彩光圈，以增大高倍镜及油镜下视野的亮度。当前6页，总共18页。

从标本玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时需在油镜和玻片之间加入与玻璃的折射率相仿的镜油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。当前7页，总共18页。显微镜的分辨率或分辨力（resolutionorresolvingpower）是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力。从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：式中：D=显微镜分辨两点间的最短距离λ=光波波长（平均0.55m)

NA=物镜的数值孔径值。◆显微镜的性能当前8页，总共18页。

数值孔径则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为：NA=n·sin(α/2）

n:物镜和被检标本间介质的折射率：镜口角。物质折射率物质折射率空气1亚麻油1.47水1.33石蜡油1.487甘油1.487香柏油1.515玻璃1.52丁香油1.535冬青油1.536浓松节油1.542以香柏油为介质的油镜所能达到的数值孔径（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍镜、高倍镜等物镜（NA都低于1.0）。数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨距离不小于0.4μm的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2μm左右。当前9页，总共18页。三、实验器材1、标本片：四联球菌、枯草芽孢杆菌2、试剂：香柏油、二甲苯3、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等当前10页，总共18页。四、实验步骤

1、显微观察步骤

1）低倍镜观察（10×）：

2）高倍镜观察（40×）：

3）油镜观察（100×）：2、显微镜用毕后的处理当前11页，总共18页。低倍镜的操作右手握住镜臂，左手拖住镜座，将显微镜放在自己身体的前方，离实验台边缘10cm左右处；接通电源，打开显微镜电源开关；3.旋动转换器，将低倍镜移到镜筒正下方；4.调节光源强度，同时用眼对准目镜，仔细观察，视野亮度均匀；5.将标本放在载物台上，旋转推动器，使观察的目的物置于圆孔的正中央；6.转动粗准焦螺旋，上升载物台至距离物镜约0.5cm（注意：眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰）；7.左眼观察目镜，调节粗、细准焦螺旋直至目的物清晰为止。当前12页，总共18页。高倍镜的操作转换物镜。旋动转换器将低倍镜换成高倍镜（注意：在转换物镜时要从侧面观察，以防镜头与标本片相撞，如果高倍镜触及标本片，应立即停止旋转，并重新用低倍镜调焦）；调焦。调节光圈，使光线亮度合适，再调节细准焦螺旋直至目的物清晰；观察。移动推动器，找到合适的目的物，并移至视野的中心进行观察。（如果用高倍镜未能看清目的物，则可换用油镜观察）当前13页，总共18页。油镜的操作1.转换油镜。调节粗准焦螺旋，下降载物台约2cm，转换油镜镜头；2.加香柏油。在标本片的镜检部位滴一滴香柏油；从侧面注视，用粗准焦螺旋缓慢上升载物台，使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片；3.调焦。上升聚光器，将虹彩光圈开大，使光线充分照明；缓慢调节细准焦螺旋，直至物像清晰。4.观察。多观察几个视野，选取菌体分布均匀的视野进行菌体形态和排列方式观察。当前14页，总共18页。2、显微镜用毕后的处理将光强调节至最弱关闭电源开关拔掉电源插头下降载物台

取干净擦镜纸拭去镜头上的香柏油

取干净擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹

取干净擦镜纸擦去残留的二甲苯

将显微镜的各部位还原，物镜转成“八”字形，擦干净镜体，罩上防尘罩。当前15页，总共18页。五、实验数据及处理结果

绘出你在油镜下观察到的两种细菌的形态及其不同细菌细胞的排列方式。四联球菌（10×100）

杆菌120（10×100）当前16页，总共18页。六、思考与讨论

用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片