动物生理学实验

动物生理学实验第一页，共六十三页，2022年，8月28日实验一

动物生理学实验常用仪器

实验基本操作技术第二页，共六十三页，2022年，8月28日1动物生理学实验的地位共27学时，属专业基础课成绩：报告60%，考试30%，考勤10%2动物生理学实验的要求实验前、实验中、实验后第三页，共六十三页，2022年，8月28日3常用生理仪器的使用

（1）刺激系统刺激器、刺激电极（2）引导、换能系统张力换能器、压力换能器（3）放大系统（4）显示、记录系统第四页，共六十三页，2022年，8月28日4常用手术器械（1）刀：姿势有指压式、执笔式及反挑式等。（2）剪：外科剪、眼科剪、毛剪、普通剪等。（3）镊：眼科镊、外科镊。（4）钳：止血钳、持针钳、创巾钳。（5）其他：探针、玻璃分针、蛙板、锌铜弓、蛙心夹、动脉导管、气管插管、肌槽等。第五页，共六十三页，2022年，8月28日5动物的麻醉（1）麻醉前准备：P21①药物选择：根据实验内容合理选用麻醉药。33%乙醇生理溶液：5～7mL/kg，耳缘静脉注射。速眠新：0.1～0.2mL/kg，皮下或肌肉注射。②麻醉前核对药名，检查药品有无变质。③呕吐中枢发达的动物（狗、猫等）在手术前应禁食12h，以减轻呕吐反应。④需在全麻下进行手术的动物，可适当给予麻醉辅助药，如皮下注射吗啡镇痛，注射阿托品减少呼吸道分泌物产生等。第六页，共六十三页，2022年，8月28日（2）麻醉效果观察①呼吸：呼吸加快且不规则，表示麻醉过浅；呼吸规则且平稳，已达麻醉深度；呼吸变慢，且以腹式呼吸为主，表示麻醉过深，动物有生命危险。②反射：角膜反射灵敏，麻醉过浅；角膜反射迟钝，麻醉程度适宜；角膜反射消失，伴瞳孔散大，则麻醉过深。③肌张力：肌张力亢进，麻醉过浅；全身肌肉松弛，麻醉合适。④皮肤夹捏：夹捏动物皮肤，观察皮肤的反应。第七页，共六十三页，2022年，8月28日（3）麻醉注意事项①正确选用麻醉药品、用药剂量及给药途径。②静脉麻醉时，先将总量的1/3快速注入，使动物迅速渡过兴奋期，余下2/3缓慢注射，并观察动物状态及反应，以准确判断麻醉深度。③需补充麻醉药时，一次补量不超过总量的1/5。④麻醉中应随时保持呼吸道通畅，注意保温。⑤手术操作复杂、创伤大、实验时间较长或麻醉深度不理想等情况下，可配合局部浸润麻醉或基础麻醉。⑥实验中注意体液平衡，防止酸中毒及肺水肿的发生。第八页，共六十三页，2022年，8月28日6常见手术方法（家兔）（1）麻醉（静脉、皮下、肌肉）（2）保定（3）除去被毛、切口（4）颈部神经、血管分离（5）气管插管（6）输尿管、膀胱分离第九页，共六十三页，2022年，8月28日7器械打结（1）活结：用于家兔保定。（2）死结：用于血管、神经结扎。要领：钳压线，线压钳。第十页，共六十三页，2022年，8月28日实验二计算机生物信号采集处理系统

1系统组成与工作原理由硬件和软件构成。硬件主要完成对各种生物电信号（如心电、肌电、脑电）与非电信号（如血压、张力）进行调理、放大，并对信号进行模/数（A/D）转换，使之进入计算机。软件主要对已经数字化了的生物信号进行显示、记录、存储、处理及打印输出，同时对系统各部分进行控制，与操作者进行人机对话。第十一页，共六十三页，2022年，8月28日2主界面

从上到下依次分为：标题栏、菜单栏、工具栏、状态提示栏及采样窗、控制面板和数据窗等其他多个相应的子窗口组成。第十二页，共六十三页，2022年，8月28日3使用方法3.1设置：标准配置，恢复出厂时的配置。3.2新建：选择实验项目，填写实验信息，进入实验窗口，开始实验。3.3采样：记录实验数据3.4控制面板参数调节：通道功能调节、刺激参数调节3.5存储：文件保存位置：F：/文件名：12动医3-呼吸（左2）3.6编辑：打开原文件→选择→复制→“工具”下的“画图”→处理文件→复制图片→存盘到F：/。第十三页，共六十三页，2022年，8月28日实验三影响血液凝固的因素红细胞脆性的测定血红蛋白的测定第十四页，共六十三页，2022年，8月28日影响血液凝固的因素1实验目的以凝血时间为指标，了解影响凝血的因素，加深对生理止血过程的理解。2实验原理血液凝固是一个酶解激活过程，有多种凝血因子参与。根据凝血过程起动时凝血因子来源不同，可将凝血分为内源性激活途径和外源性激活途径。第十五页，共六十三页，2022年，8月28日3实验对象：家兔4方法与步骤4.1家兔的麻醉、保定与手术

33%乙醇溶液，6mL/kg，耳缘静脉注射。4.2颈动脉采血4.3试管准备4.4记录凝血时间第十六页，共六十三页，2022年，8月28日5实验结果表1血液凝固及其影响因素试管号实验处理凝血时间（秒）1空白2液体石蜡4滴3棉花少许4冰水环境5肝素4滴6草酸钾4滴7肺组织浸液4滴5号管加CaCl24滴6号管加CaCl24滴第十七页，共六十三页，2022年，8月28日6注意事项6.1采血过程要尽量快，以减少计时误差，对比实验的采血时间要紧接着进行。6.2每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。6.3判断凝血的标准要一致，一般以倾斜试管达45°时试管内血液不见流动为准。第十八页，共六十三页，2022年，8月28日红细胞脆性的测定1实验目的学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。2实验原理正常红细胞悬浮于等渗的血浆中，著置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。第十九页，共六十三页，2022年，8月28日3实验对象：动物种类不限4方法与步骤4.1溶液配置表2不同浓度NaCl溶液配制管号123456789101%NaCl（mL）9.06.56.05.55.04.54.03.53.02.5蒸馏水(mL)1.03.54.04.55.05.56.06.57.07.5NaCl浓度（%）0.900.650.600.550.500.450.400.350.300.25第二十页，共六十三页，2022年，8月28日4.2制备抗凝血：柠檬酸钠作抗凝剂。4.3加抗凝血：每只试管加1滴。4.4观察结果①未溶血试管：液体下层有大量红细胞下沉，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。②不完全溶血试管：液体下层有红细胞下沉，上层出现透明淡红色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。②完全溶血试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞下沉。第二十一页，共六十三页，2022年，8月28日5实验结果表2家兔Hb含量及RBC脆性测定分组Hb测定（g/L）RBC脆性测定（NaCl%）最小抵抗力最大抵抗力实验组对照组80～1500.60～0.550.40～0.35第二十二页，共六十三页，2022年，8月28日6注意事项6.1试管要干净；6.2配液要准确；6.3加血量要一致；6.4轻轻混匀，减少溶血机会；6.5静置时间不少于30min。第二十三页，共六十三页，2022年，8月28日血红蛋白的测定1实验目的掌握比色法测定动物血红蛋白含量的方法。2实验原理

血红蛋白的颜色与氧结合量有关，当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白的浓度成正比。因此，可与标准色板进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血红蛋白的克数（g.L-1）。第二十四页，共六十三页，2022年，8月28日3实验对象：动物种类不限4方法与步骤：使用沙里氏血红蛋白计测定。

比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成粽色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。（1）血红蛋白计由标准比色箱和测定管组成。测定管两侧有刻度，一侧为血红蛋白量的绝对值，以每100mL血液中所含血红蛋白的克数表示；另一侧为相对值，以％（即相当于正常平均值的百分数）来表示。第二十五页，共六十三页，2022年，8月28日（2）测定方法①血红蛋白吸管清洁：自来水→蒸馏水→无水乙醇。②将0.1N盐酸加入测定管中至刻度“2”处。③用血红蛋白吸管吸取20μL血液，将血液吹入盐酸中，并利用上层盐酸将吸管反复洗涤多次（避免起泡）。④酸化10min后，逐滴加入蒸馏水，边加边混匀并与标准比色板比较，至二者颜色相同为止。⑤读数即为每100mL血液中血红蛋白的克数。第二十六页，共六十三页，2022年，8月28日【注意事项】（1）血红蛋白吸管和比色管要清洁；（2）吸取血液要准确，避免起泡；（3）酸化时间不能少于10min；（4）滴加蒸馏水要准确；（5）在自然光下比色。第二十七页，共六十三页，2022年，8月28日实验报告的撰写1实验原理2材料与方法2.1主要器材2.2主要药品2.3实验动物2.4实验方法2.4.1Hb测定：按动物生理学实验89页方法进行[1]。2.4.2RBC脆性测定：按动物生理学实验87页方法进行[1]。2.4.3影响血液凝固因素：按动物生理学实验99页方法进行[1]。第二十八页，共六十三页，2022年，8月28日3实验结果3.1家兔Hb含量及RBC脆性测定：见表1。表1家兔Hb含量及RBC脆性测定分组Hb测定含量（g/L）RBC脆性测定（NaCl%）最小抵抗最大抵抗实验组对照组80～1500.60～0.550.40～0.35第二十九页，共六十三页，2022年，8月28日3.2不同因素对血液凝固时间的影响表2血液凝固及其影响因素试管号实验处理凝血时间（秒）1空白2液体石蜡4滴3棉花少许4冰水环境5肝素4滴6草酸钾4滴7脑组织浸液4滴5号管加CaCl24滴6号管加CaCl24滴第三十页，共六十三页，2022年，8月28日4分析与探讨4.1本次实验家兔Hb测定结果比对照高（或低、或基本一致），从操作过程方面说明原因：……。4.2本次实验家兔RBC脆性测定结果，最小抵抗比对照组高（或低、或基本一致），最大抵抗……，从操作过程方面说明原因：……。4.3家兔凝血时间测定结果表明，××处理能加快（抑制或不凝）血液凝固，为什么？××管加CaCl2后凝固，为什么？（从凝血机制分析）5参考文献[1]伍莉，黄庆洲.动物生理学实验[M].重庆：西南师范大学出版社，

2013，87-100.[2]邹永新，郭予强.我国鸭病毒性疾病的发生和流行概况[J].中国兽医杂志，2002（6）：38-40.第三十一页，共六十三页，2022年，8月28日家兔Hb、RBC脆性测定及影响血凝的因素观察1实验相关信息及目的2材料2.1动物2.2主要药品：2.3主要仪器：3实验方法：简述或按《动物生理学实验》方法进行[1]。4结果4.1家兔Hb、RBC脆性测定：见表1。4.2家兔血凝时间的测定：见表2。

表1家兔Hb含量及RBC脆性测定表2不同因素对家兔血凝时间的影响5讨论5.1家兔Hb测定结果与对照比较，其值偏高，原因：5.2家兔RBC脆性测定结果与对照比较，其值，原因：5.3家兔血凝时间测定结果表明，时间长短，原因：参考文献[1]陈杰.家畜生理学[M]，第四版.北京：中国家业出版社.2004，23-34.分组实验组对照组Hb（g/L）RBC脆性（NaCL%）最小抵抗最大抵抗80-1500.6～

0.550.4～0.35血凝时间（S）实验管号处理因素草+Ca++肝素+Ca++对照棉花肝素冰水石蜡草脑组织第三十二页，共六十三页，2022年，8月28日实验四心肌收缩的特点【实验目的】

学习蟾蜍心脏活动描记的方法，观察心肌收缩的特点。【实验原理】

心肌的有效不应期特别长，几乎占据了整个收缩期和舒张早期，在此期内任何刺激均不能引起心肌收缩。在心脏舒张早期之后，给心肌一次有效刺激，会引起心脏一次期前收缩，紧接着出现一次较长的间歇——代偿间歇。第三十三页，共六十三页，2022年，8月28日【实验对象】蛙或蟾蜍【实验药品】任氏液【实验方法与步骤】1.实验准备（1）在体蛙心制备：取蛙一只，破坏脑、脊髓，仰卧固定于蛙板上。左手持镊子提起胸骨后端的皮肤剪一小口，然后向左、右两侧锁骨外侧剪开皮肤、肌肉，剪断左右锁骨，使创口呈一倒三角形，充分暴露心脏部位，并用眼科剪剪开心包膜，彻底暴露心脏。第三十四页，共六十三页，2022年，8月28日（2）观察心脏的结构识别蛙心脏。自心脏腹面可观察到心室、心房、动脉球和主动脉。用玻璃分针向前翻转蛙心，暴露心脏背面可观察到静脉窦和心房。（3）连接实验装置将蛙心夹上的细线与张力换能器相连，让心脏搏动信号传入计算机生物信号采集处理系统。将铜丝与心室接触良好并固定稳妥后，与刺激器的输出连接。第三十五页，共六十三页，2022年，8月28日2.实验项目（1）描记正常曲线，观察曲线的收缩相和舒张相。（2）用中等强度的单个阈上刺激在收缩期刺激心室，有何变化？为什么？（3）用中等强度的单个阈上刺激在舒张中后期刺激心室，有何变化？为什么？（4）心肌“全或无”反应：用丝线在静脉窦与心房之间作一结扎，心脏停止跳动。然后给予阈下及不同强度的阈上刺激，观察蛙心收缩强度的变化。第三十六页，共六十三页，2022年，8月28日【结果及分析】1.心缩期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？2.心舒期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？3.第一结扎后，心房、心室活动有何变化，为什么？4.阈下刺激心脏的收缩曲线幅度有何变化，为什么？5.不同强度阈上刺激，曲线幅度有何变化，为什么？第三十七页，共六十三页，2022年，8月28日【注意事项】1.破坏蛙的大脑和脊髓要彻底。2.经常给心脏滴加任氏液，以保持心脏适宜的环境。3.张力传感器与蛙心夹之间的丝线应保持适宜的紧张度。4.铜丝与心室接触良好的同时，还应尽量不让其阻碍心脏的自发收缩。第三十八页，共六十三页，2022年，8月28日实验四蟾蜍心肌收缩的特点1实验相关信息及目的2实验原理3材料3.1动物3.2主要药品：任氏液3.3主要仪器：计算机生物信号采集系统、张力换能器4方法：简述或按生理实验指导书a～b页介绍方法进行[]

5结果：见图。正常心肌舒缩曲线心缩期单刺激心舒期单刺激代偿间歇期前收缩第一结扎窦房沟阈刺激阈上刺激阈上刺激图：不同时期刺激心肌其收缩活动的变化

6讨论

6.1心缩期单个阈上刺激，心活动变化？其原因？

6.2心舒中后期单个阈上刺激，心活动变化？其原因？

6.3窦房沟结扎后，心活动变化？其原因？

6.4结扎后单个不同强度阈上刺激，心肌收缩强度的变化趋势？其原因？参考文献第三十九页，共六十三页，2022年，8月28日实验五蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备骨骼肌的生理特性1原理：用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究刺激与反应的关系和肌肉收缩的特性。

2材料：蟾蜍。3方法：参照《动物生理学实验》和实验录像进行。第四十页，共六十三页，2022年，8月28日第四十一页，共六十三页，2022年，8月28日第四十二页，共六十三页，2022年，8月28日4结果第四十三页，共六十三页，2022年，8月28日实验六心血管活动的神经-体液调节[目的]学习动脉血压的直接测定方法，并观察神经-体液因素对心血管活动的调节。[原理]正常情况下，动脉血压通过神经和体液因素的调节而保持相对稳定，其中以降压反射尤为重要。若阻断颈动脉血流，颈动脉窦压力感受器受到的刺激减少，通过窦神经传向心血管中枢的刺激亦减少，降压反射活动减弱，血压升高；当压迫颈动脉窦时，通过窦神经传向心血管中枢的刺激增加，降压反射活动增强，血压降低。

肾上腺素使心率加快，心缩力加强，心输出量增加，血压升高；乙酰胆碱引起心缩力减弱，心率减慢，血管扩张，外周阻力降低，血压下降。

第四十四页，共六十三页，2022年，8月28日[对象]家兔。[药品]846，肝素（300U/mL），0.01%AD，0.01%Ach。

[器械]生物信号采集处理系统，血压换能器，手术器械等。

[步骤]1.实验准备：（1）肌肉麻醉（2）分离颈部神经、血管（3）动脉插管2.连接实验装置：

3.实验项目：见图示。第四十五页，共六十三页，2022年，8月28日[注意事项]1.麻醉应适量，以免过量引起动物死亡；2.分离血管、神经原则：先认准再分离；先神经再血管；先细后粗；3.动脉插管的固定要可靠，防止漏液和血管堵塞；4.要待前一项目恢复正常后才能进行下一项目；5.实验结束后，结扎动脉近心端后再拔除动脉插管。第四十六页，共六十三页，2022年，8月28日实验七离体小肠平滑肌的生理特性1原理：平滑肌具有特定的生理特性，对化学、温度和牵拉刺激非常敏感。2材料：家兔、采集系统、张力换能器、Ach、Ａd。3方法：参照《动物生理学实验》和实验录像进行。4项目：Ach、Ａd、降温、升温。第四十七页，共六十三页，2022年，8月28日5注意事项5.1实验动物要禁食24h；5.2实验前标本要放在38℃台氏液中浸泡数分钟，使标本兴奋性稳定再进行实验；5.3实验中注意控制温度；5.4实验中随时更换新鲜台氏液；5.5实验中添加的药物量要由少至多。第四十八页，共六十三页，2022年，8月28日实验八呼吸运动的调节1原理：呼吸运动受内、外环境刺激的影响。2材料：家兔、采集系统、压力换能器、2%乳酸、CO2、

33%乙醇溶液。3方法：参照《动物生理学实验》方法进行。4项目：吸入CO2、增大无效腔、夹闭气管、静注乳酸、切断迷走神经。第四十九页，共六十三页，2022年，8月28日5注意事项5.1气管插管内壁要干净；5.2气流适宜，以免直接影响呼吸运动，干扰实验结果；5.3注射乳酸时要避免外漏以引起动物躁动；5.4每项实验前均应有正常呼吸曲线作比较；5.5吸入CO2时，出现现象应立即移开CO2，防止动物死亡。第五十页，共六十三页，2022年，8月28日实验九影响尿生成的因素1原理：观察不同生理因素对动物尿液量的影响。2材料：家兔、垂体后叶素、0.9%NaCl、20%G.S、Ａd、Ach、33%乙醇溶液。3方法：参照《动物生理学实验》和实验录像进行。4结果：记录3min尿量。4.1正常尿量记录（3min）；4.2静脉注射0.9%NaCl20mL（37℃）；4.3静脉注射0.01%Ad0.3～0.5mL；4.4静脉注射20%G.S10mL（37℃）；4.5静脉注射垂体后叶素0.3mL；第五十一页，共六十三页，2022年，8月28日5.1实验前家兔多喂菜叶或水，以增加基础尿量；5.2保护好耳静脉，应从耳静脉远心端开始注射，逐渐向耳根部推进；5.3暴露膀胱时，手术切口3～4cm为度，防止肠管漏出；5.4输尿管插管时一定要准确，且事先在插管内充满水；5.5每一项目要待前一项的影响基本结束后再进行。第五十二页，共六十三页，2022年，8月28日实验十脊髓反射的基本特征与反射弧分析1实验目的2实验原理3实验对象4器材药品5标本制备6实验项目第五十三页，共六十三页，2022年，8月28日6.1脊髓反射（1）屈肌和对侧伸肌反射：0.5%H2SO4刺激蛙脚趾。（2）骚扒反射：0.5%H2SO4滤纸片刺激蛙腹侧部。（3）反射时测定：分别用0.5%H2SO4和1%H2SO4刺激蛙脚趾（三次，求平均值），比较反射时与刺激强度的关系。（4）中枢兴奋的扩散：用不同力量夹蛙脚趾，观察有何现象。（5）中枢兴奋的后作用：上述刺激停止后观察有何现象。6.2反射弧分析（1）正常反射活动观察：0.5%H2SO4刺激蛙脚趾。（2）破坏脚趾感受器：后肢踝关节处破坏皮肤感受器，检验屈肌反射。（3）破坏神经纤维：分离对侧坐骨神经，用2%普鲁卡因麻醉后，再用

0.5%H2SO4刺激脚趾，待屈肌反射消失后，1%H2SO4滤纸片刺激蛙腹侧部检验骚扒反射。（4）捣毁脊髓：检验各种反射活动。第五十四页，共六十三页，2022年，8月28日家兔呼吸运动的调节（不同方法）[目的要求]1.学习记录家兔呼吸运动的方法。

2.观察并分析不同因素对呼吸运动的影响。[基本原理]

高等动物的呼吸运动之所以能持续、节律性地进行，是由于体内调节机制的存在。体内、外的各种刺激，可以直接作用于中枢或不同部位的感受器，反射性地影响呼吸运动，以适应机体代谢的需要。肺的牵张反射参与呼吸节律的调节。第五十五页，共六十三页，2022年，8月28日[动物及器材]

家兔、手术台、手术器械、张力传感器、压力传感器、计算机采集系统、846、2%乳酸、CO2气袋。[方法与步骤]

急性动物实验时，记录呼吸运动的方法有三种：一种是通过压力传感器与气管插管连接记录；另一种是通过系在胸（或腹）部，通过张力传感器记录；第三种是通过张力传感器记录膈肌运动。今天做第一和第二种方法。第五十六页，共六十三页，2022年，8月28日（一）气管插管1.麻醉→背位固定→剪去颈部与胸部被毛→切开颈部皮肤，分离气管并插入气管插管→分离双侧迷走神经，穿线备用。注意：气管需分离干净，插管后扎紧，避免漏气。（二）记录呼吸运动2.将金属钩钩于胸部，线的另一端系于张力传感器的应变梁上。（另外3组按原来方法连接压力传感器）3.调节记录系统，使呼吸曲线清楚地显示出来。第五十七页，共六十三页，2022年，8月28日（三）观察项目1.记录正常呼吸运动，注意区分吸气和呼气方向2.吸入C023.增大无