微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检查方法适用性试验方案之答禄夫天创作创作时间：二零二一年六月三十日验证方案组织与实施微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部份负责组织，质量管理部份有关人员组成验证小组，介入实施.方案起草部份/职务签名日期质量管理部QC方案审核部份/职务签名日期质量管理部QC经理方案批准部份/职务批准人批准日期质量管理部质量总监目录一、概述-验证目的和风险评估 -■、三、验证内容四、方法判定五、再验证周期六、参考文献七、结果评价及结论1、概述：创作时间：二零二一年六月三十日微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染水平的方法.检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查.当建立产物的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采纳的方法适合于该产物的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查.依照中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采纳平皿法进行方法适用性试验.2、试验目的和风险评估：验证目的：确认所采纳的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产物的微生物限度检查.风险评估：项目潜在失效模式失效影响采用办法未按方案执行试验部份项目呈现偏差和漂移直接影响试验结果的正确性严格执行经批准的试验方案试验过程把持不妥未到达试验标准试验失败未严格遵循试验方案规定3、验证内容：3.1、培养基来源:品名批号规格来源创作时间：二零二一年六月三十日

创作时间：二零二一年六月三十日确认人：确认日期：、检查用培养基配制方法:培养基名称配制方法取本品g,加水1000ml,加热溶解，分装，121℃,15分钟灭菌，备用.胰酪年夜豆胨琼脂培养基取本品40g,加水1000ml,加热溶解，分装，121℃,15分钟灭菌，备用.胰酪年夜豆胨液体培养基取本品g,加水1000ml,加热溶解，分装，121℃,15分钟灭菌，备用.沙氏葡萄糖液体培养基取本品g,加水1000ml,加热溶解，分装，121℃,15分钟灭菌，备用.沙氏葡萄糖琼脂培养基取本品65.0g,加水1000ml,加热溶解，分装，121℃,15分钟灭菌，备用.麦康凯琼脂培养基取本品50.0g,加水1000ml,加热溶解，分装，121℃,15分钟灭菌，备用.麦康凯液体培养基取本品，加水1000ml,加热溶解，分装，121℃,15分钟灭菌，备用.确认人： 确认日期:、使用仪器名称型号校验单元有效期至数显电热恒温培养怡相数显霉菌培养箱确认人： 确认日期:、验证试验用菌种：菌种名称代号传代代数来源金黄色葡萄球菌年夜肠埃希菌铜绿假单胞菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌创作时间：二零二一年六月三十日创作时间：二零二一年六月三十日黑曲霉菌确认人： 确认日期：试验方法：取供试品10ml-1:10供试液.需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采纳惯例法.菌液的制备：取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、年夜肠埃希菌、枯草芽抱杆菌的胰酪年夜豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪年夜豆胨液体培养基中置30〜35℃培养箱中培养18〜24h,取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、年夜肠埃希菌、枯草芽抱杆菌的胰酪年夜豆胨液体培养物1ml加入9m10.9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10〜7,分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪年夜豆胨琼脂培养基20ml,各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物，加入沙氏葡萄糖液体培养基中置20〜25℃培养箱中培养24〜48h,取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10〜7,取菌悬液1ml注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.创作时间：二零二一年六月三十日创作时间：二零二一年六月三十日取黑曲霉的新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上，20-25℃培养5-7天，加入3-5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将胞子洗脱.取1ml加入含0.05%聚山梨酯80的9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10〜7,取，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验：供试液制备：取供试品*mlf1:10供试液.实验条件：需氧菌培养温度：30〜35℃3〜5天 培养箱：霉菌和酵母菌培养温度：20〜25℃5〜7天培养箱：试验方法：试验组：分别取供试液9.9ml,分别铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌，混匀后取其中1ml注皿，倾注温度不超越45℃的胰酪年夜豆胨琼脂培养基20ml,置30〜35℃或培养箱中培养不超越3天，计数，每株试验菌平行制备2个平皿.分别取供试液9.9ml,分别白色念珠菌、黑曲霉菌液，创作时间：二零二一年六月三十日创作时间：二零二一年六月三十日混匀后分别取其中1ml注皿，倾注温度不超越45℃的胰酪年夜豆胨琼脂培养基20ml,置30〜35c或培养箱中培养不超越5天，计数，每株试验菌平行制备2个平皿.另分别取其中1ml注皿，倾注温度不超越45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml,置20〜25℃或培养箱中培养不超越5天，计数，每株试验菌平行制备2个平皿.菌液对比组：分别取稀释液9.9ml,分别菌液，按试验组把持，倾注温度不超越45℃的胰酪年夜豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，置与试验组相同条件下培养，计数.每株试验菌平行制备2个平皿.供试品对比组：取供试液1ml,倾注温度不超越45℃的胰酪年夜豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，置与试验组相同条件下培养，计数.每株试验菌平行制备2个平皿.实验结果〜2范围内.比值二试验组菌落数〜供试品对比组的菌落数*对比组菌落数试验次数：1 供试品批号：菌种类型试验组菌液组供试品对比组比值铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌创作时间：二零二一年六月三十日

创作时间：二零二一年六月三十日枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉检验人:日期：复核人:日期：试验次数：2 供试品批号：菌种类型试验组菌液组供试品对比组比值铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉检验人：日期：复核人：日期：试验次数：3 供试品批号:菌种类型试验组菌液组供试品对比组比值铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌创作时间：二零二一年六月三十日

创作时间：二零二一年六月三十日黑曲霉检验人:日期：复核人:日期：试验次数：1供试品批号:供试品菌种类型试验组 菌液组 比值对比组白色念珠菌—黑曲霉检验人:日期：复核人：日期：试验次数：2供试品批号:供试品菌种类型试验组 菌液组 比值对比组白色念珠菌—黑曲霉检验人:日期：复核人：日期供试品批号:试验次数：3供试品批号:创作时间：二零二一年六月三十日创作时间：二零二一年六月三十日菌种类型试验组菌液组供试品对比组比值白色念珠菌黑曲霉检验人：日期：复核人：日期结论：检验人：日期：复核人：日期：控制菌微生物检测方法适用性试验：.1实验方法：试验组：取供试液10ml及不年夜于100cfu年夜肠埃希菌菌液加入胰酪年夜豆胨液体培养基中，置30〜35℃培养18-24小时,取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42〜44℃培养24-48小时.取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上30〜35℃培养18-72小时.试验组应生长良好.阴性对比组：取稀释剂10ml,加入胰酪年夜豆胨液体培养基中，置30〜35c培养18-24小时，阴性对比应无菌生长.阳性对比组：取不年夜于100cfu年夜肠埃希菌菌液加入胰创作时间：二零二一年六月三十日创作时间：二零二一年六月三十日酪年夜豆胨液体培养基中，置30〜35℃培养18-24小时，取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42〜44℃培养24-48小时.取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上30〜35℃培养18-72小时.阳性对比组应生长良好.3.8.2实验结果：试 验 次 数： 1供试品批号：控制菌项目惯例法年夜肠埃希菌试验组阳性对比组阴性对比组检验人:日期：复核人:日期：试验次数： 2供试品批号：控制菌项目惯例法年夜肠埃希菌试验组阳性对比组阴性对比组检验人：日期：复核人：日期：创作时间：二零二一年六月三十日创作时间：二零二一年六月三十日试 验 次 数： 3供试品批号:控制菌项目惯例法年夜肠埃希菌试验组阳性对比组阴性对比组3.8.3结论:检验人： 日期：复核人： 日期：4.方法判定：本品按《中国药典》2015年版（1105）、（1106）非无菌产物微生物限度检查项下：“微生物计数法”“