CpGODN的免疫刺激作用

CpGODN的免疫刺激作用第1页/共33页Th1免疫应答慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下HBV免疫耐受，持续感染肿瘤微小残留病的清除第2页/共33页CPG提高PBMC中Th1细胞第3页/共33页Th1占淋巴细胞百分比第4页/共33页CPG提高PBMC中Th1、Tc1细胞百分率***：与对照组比较，P<0.05

第5页/共33页CPG刺激BPMC分泌细胞因子**：与对照组比较，P<0.05

第6页/共33页CPG诱导PBMC杀伤靶细胞收集CPG活化的PBMC细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的PBMC；靶细胞为CFSE预染的K562细胞。对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。效：靶＝20：1，混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。第7页/共33页CPG诱导PBMC杀伤靶细胞第8页/共33页CFSE染色靶细胞浓度为5μmol/L的CFSE（2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液取对数生长期的靶细胞浓度108/L细胞悬液与等体积CFSE工作液混合37℃孵育10min。离心洗涤两次后悬浮细胞备用第9页/共33页CFSE染色靶细胞第10页/共33页实验结果

CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5)CPG活化PBMC

16.85±5.14%对照组8.62±2.83%**：与对照组比较，P<0.05

第11页/共33页CIK细胞杀伤靶细胞第12页/共33页CIK细胞杀伤靶细胞第13页/共33页研究背景

通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果。第14页/共33页研究背景

B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。第15页/共33页TOLL受体第16页/共33页TOLL受体在血细胞中的表达第17页/共33页活化B细胞负载核心抗原磁珠分选B淋巴细胞CPG活化B淋巴细胞核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况第18页/共33页磁珠分选B细胞分选前B细胞7.89%

分选后B细胞89.6%

第19页/共33页活化B细胞负载抗原肽第20页/共33页活化B细胞负载核心抗原荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽

第21页/共33页APC与T细胞作用机制第22页/共33页CPG对B细胞抗原递呈相关分子的作用研究CpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰对照组为含10%FCS的RPMI1640＋外周血PBMC，细胞量107/孔，37℃、5%CO2、48小时实验组加入CpG2006或CpG2216，终浓度均为1umol/mL，余同上第23页/共33页CpG提高淋巴细胞CD69表达

T淋巴细胞B淋巴细胞

CD69表达率（%）***：与对照组比较，P<0.05

第24页/共33页B细胞CD80、CD86表达对照组加CPG-ODN组加CPG-ODN组第25页/共33页CpG提高B细胞表面CD80、CD86的表达

CD80

CD86CD80、CD86表达率（%）*****：与对照组比较，P<0.05

第26页/共33页B细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达对照组加CPG-ODN组第27页/共33页CpG提高B细胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达MHC-Ⅰ

MHC-ⅡMHC表达量（MFI）*****：与对照组比较，P<0.05

第28页/共33页活化B细胞诱导CTL负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液).收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL.实验组特异性CTL为0.50±0.19%，对照组为0.20±0.10%。

第29页/共33页特异性CTL诱导Pro5TMMHCPentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加APC）。第30页/共33页结论CpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达CPG诱导PBMC产生高水平的IFN-γCPG