无菌检查方法验证报告(最终)

XXXXX材料科技有限公司文件类别：验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：1of12XXXXX无菌检查方法验证报告XXXXX无菌检查方法验证报告验证项目XXXXX无菌检查方法验证报告方案编码VR-15-2018验证报告审核单

XXXXX材料科技有限公司文件类别：验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：2of12XXXXX无菌检查方法验证报告起草部门职务签字日期质量部无菌检验员审核部门职务部门职务质量部主管签字日期批准部门职务签字日期生产技术部管理者代表目录XXXXX材料科技有限公司文件类别：验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：3of12XXXXX无菌检查方法验证报告目的范围确认依据验证组员和相关职责确认过程验证结果及评价偏差与处理8再确认1.目的通过对培养基的无菌性检查、灵敏度检查，对产品的无菌检查方法适用性进行试验，证明该方法适用于产品无菌检查日常检测。XXXXX材料科技有限公司文件类别：验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：4of12XXXXX无菌检查方法验证报告1.范围适用于本公司产品的无菌检查方法的建立和确认。2.确认依据中国药典2015版3.验证组员和相关职责4.1验证组员审核和批准验证方案组织协调验证方案的实施记录相关方案的修订和偏差记录和检查方案实施过程中产生的数据根据变更控制，偏差的要求，组织相关的调查、纠正及预防协助质量控制QC,质量保证QA执行所有和设备相关的验证审核和批准方案的修订和偏差审核和批准相关验证试验结果和验证总结报告4.2质量部QC编制验证方案确保所有仪器仪表及测试设备在验证之前校准根据变更控制偏差的要求,制定相关的偏差报告,参与调查,纠正及预防按照方案实施验证,负责取样检测4.3质量部主管审核验证方案为方案实施提供支持提供支持验证的相关SOP根据变更控制,偏差的要求,组织制定有关报告,进行相关的调查、纠正及预防审核相关方案的修订和偏差XXXXX材料科技有限公司文件类别：验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：5of12XXXXX无菌检查方法验证报告审核验证试验结果和验证总结报告4.4管理者代表最终审核和批准的所有验证方案最终审核和批准所有验证总结报告最终审核和批准验证过程中发生的所有偏差、变更等4.确认过程A仪器设备设备名称设备编号设备型号设备状态高压蒸汽灭菌器PL-012LDZX-75KB-II□未检定0已检定在有效期内生化培养箱PL-004LRH-150F□未检定0已检定在有效期内霉菌培养箱PL-003MJ-150F-I□未检定0已检定在有效期内旋涡混合器/VORTEX-5/B操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。C稀释液：0.9%无菌氯化钠溶液D器具:一次性枪头（已灭菌）移液器培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。5.1.1培养基硫乙醇酸盐流体培养基批号：1075511生产厂家：广东环凯微生物科技有限公XXXXX材料科技有限公司文件类别：验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：6of12XXXXX无菌检查方法验证报告司胰酪大豆胨液体培养基批号：1076931生产厂家：广东环凯微生物科技有限公司5.1.2无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支(瓶)，置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。5.1.3培养基的灵敏度检查菌种:培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中获得的冷冻干燥菌种为第0代)，试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(CMCC(B)26003)铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa(CMCC(B)10104)枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)CMCGB63501)生抱梭菌(Clostridiumsporogenes)(CMCC(B)64941)白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC(F)98001)黑曲霉(Aspergilusnigen)CMCC(F)98003)5.1.4菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35°C培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20-25C培养24-48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20-25C培养5-7天，加人3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出抱子悬液至无菌试管内用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含抱子数小于100cfu的抱子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2-8C可在24小时XXXXX材料科技有限公司文件类别:验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：7of12XXXXX无菌检查方法验证报告内使用。黑曲霉抱子悬液可保存在2-8°C，在验证过的贮存期内使用。5.1.5培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于lOOcfu的金黄色葡药球菌、钢绿假单胞菌、生抱梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。5.1.6结果判定：空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判定该培养基的灵敏度检查符合规定。见附件无菌检查用培养基的适用性检查记录无菌检查方法验证试验当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于本产品的无菌检查。若本产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。验证时，按“中国药典2015版四部1101无菌检查法”的规定进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。菌种及菌液制备金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生抱梭菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。直接接种法5.2.3.1医用胶及配套无菌吸管的无菌检测A样品组:取0.5ml医用胶迅速加入50ml已灭菌的胰酪大豆胨液体培养基、或盐酸硫乙醇流体培养基中，用旋涡混合器震荡1分钟，制成样品组供试液。在每瓶供试液中加入10-100cfu试验菌，作为医用胶样品组；用灭过菌的剪刀将配套无菌吸管剪碎全部投入另外一组50ml已灭菌的胰酪大豆胨液体培养基、或盐酸硫乙醇流体培养基中，步骤同医用胶样品组的制备，作为无菌吸管样品组。B阳性对照组（菌液组）：取50ml已灭菌的胰酪大豆胨液体培养基、或盐酸硫乙醇流体培养基，往每瓶里面加入10T00cfu试验菌，作为阳性对照组。XXXXX材料科技有限公司文件类别:验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：8of12XXXXX无菌检查方法验证报告C阴性对照组：取一瓶50ml已灭菌的胰酪大豆胨液体培养基，另外一瓶为50ml已灭菌的盐酸硫乙醇流体培养基，作为阴性对照组。结果判断与阳性对照组比较，样品组中的试验菌均生长良好，表明样品的该检验量在该检验条件下其抑菌活性可以忽略不计。阴性对照组无菌生长，否则实验无效。见附件无菌检查方法验证试验记录6验证结果及评价通过培养基无菌性检查、培养基灵敏度检查、无菌检查方法验证，结果表明，制定的无菌检查方法适用本公司的产品。评价人/日期：7偏差与处理在验证实施过程中如出现偏差或变更，填写“验证偏差报告”对偏差进行调查和处理，并在“验证偏差记录表”中记录本项验证实施过程中发生的所有偏差。验证周期8.1当培养基批号改变时须对培养基进行适用性检查（无菌检查、灵敏度检查）8.2产品生产环境或原料发生改变时须进行实验方法的验证8.3当检测环境发生改变时须重新验证附件

XXXXX材料科技有限公司文件类别:验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：9of12XXXXX无菌检查方法验证报告无菌检查方法验证试验记录样品名称：样品批号检测日期：样品数量试验方法：依据中国药典2015年版四部1101无菌检查法：方法验证试验□薄膜过滤法□直接接种法硫乙醇酸盐流体培养基：30-35°C培养3天1医用胶样品组2无菌吸管样品组3菌落组现象描述培养天数123451234512345金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌生抱梭菌阴性对照注：“+”为生长，“-”为不生长胰酪大豆胨液体培养基：20-25C培养5天1医用胶样品组2无菌吸管样品组3菌液组现象描述培养天数123451234512345枯草芽抱杆菌白色念珠菌

XXXXX材料科技有限公司文件类别:验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：10of12XXXXX无菌检查方法验证报告碟号24小时48小时平均菌落数结论123结论：复核者/日期：检验者/日期：复核者/日期：无菌检查用培养基适用性检查记录

被测培养基名称批号来源被测培养基名称批号来源一仪器XXXXX材料科技有限公司XXXXX材料科技有限公司文件类别:验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：11of12XXXXX无菌检查方法验证报告版本号：00丨页码：11Of12XXXXX无菌检查方法验证报告仪器名称：生化培养箱型号：编号仪器名称:霉菌培养箱型号：编号:二、检验方法培养基的无菌性检查每批培养基随机取不少于5支，培养14天,逐日观察结果。培养基的灵敏度检查□硫乙醇酸盐流体培养基：取每管装量为12mL的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生抱梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照。于30〜35°C培养3天，逐日观察结果。□胰酪大豆胨液体培养基：取每管装量为9mL的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲菌各2支，另1支不接种作为空白对照。于20〜25C培养5天，逐日观察结果。三、检验结果□培养基的无菌性检查培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基C胰酪大豆胨液体培养基C咖氓甘培养基名称官数培养时间（天）备注1234567891011121314硫乙醇酸盐流体培养基12345胰酪大豆胨液体培养基12345

XXXXX材料科技有限公司文件类别:验证报告文件编码：VR-15-2018版本号：00页码：12of12XXXXX无菌检查方法验证报告结论□符合规定□不符合规定注：“+”为生长，“-”为不生长□培养基的灵敏度检查细菌培养温度°C3天霉菌及酵母菌培养温度°C5天菌种类型培养基管数（支）硫乙醇酸盐流体培养基（天）空白对照123金