细胞膜的渗透性

细胞膜的渗透性第一页，共二十五页，2022年，8月28日周日期实验名称/任课教师学时需实验材料、易耗品22.29质膜的通透性观察4市售抗凝绵羊血、指管、NaCl、甲醇、乙醇、丙三醇、TritonX-100、三氯甲烷、蒸馏水、载片盒(20个)33.7烟草悬浮细胞或花粉管的内吞作用及内膜系统的检测4烟草悬浮细胞、花粉管、蔗糖、FM4-64(红色荧光)、硝酸钙、硼酸、blue-white(蓝色荧光)43.14GFP-tubulin转基因拟南芥植株的无菌培养4琼脂、MS培养基、培养皿、转基因拟南芥种子53.21拟南芥叶片、根部微管tubulin-GFP的荧光定位4磷酸缓冲液、镊子、载玻片、盖玻片63.28DNA与RNA的化学显色反应4葱头、冰乙酸、乙醇、三氯乙酸、盐酸、碱性品红、NaAc、蒸馏水84.11离心技术分离叶绿体和细胞核4菠菜、离心管50ml、甘露醇、EDTA、Tris、巯基乙醇、牛血清白蛋白、蒸馏水94.18细胞骨架的光学显微观察4咪唑、KCl、MgCl、EGTA、DTT、TritonX-100、戊二醛、考马斯亮兰R250、葱头、蒸馏水104.25细胞凋亡小体的观察4葱头、蔗糖、MnSO4、Na2Mo4、H3BO3、CaCl2、甘露醇、蒸馏水，细胞色素C125.9血细胞的分化和不同类型血细胞的观察(开放探究实验)4市售抗凝绵羊血，载玻片、盖玻片、指管、显微镜135.18考试第二页，共二十五页，2022年，8月28日经典基础实验：质膜的通透性观察、细胞骨架的光学显微观察、DNA与RNA的化学显色反应综合性实验：烟草悬浮细胞或花粉管的内吞作用及内膜系统的检测

离心技术分离叶绿体和细胞核

细胞凋亡小体的观察开放实验：GFP-tubulin转基因拟南芥植株的无菌培养

拟南芥叶片、根部微管tubulin-GFP的荧光定位探究：血细胞的分化和不同类型血细胞的观察“以模块式教学由浅入深，倡导深化探究学习理念”为原则，实验课程整合为分层次、分模块有选择地进行。基础性经典实验模块综合性实验模块开放型实验模块探究性实验模块第三页，共二十五页，2022年，8月28日总评成绩：实验操作、结果与实验报告占50%；期末考试占：50%实验报告:网上提交1)原理；2)实验结果；3)讨论(包括对得到的实验结果可能原因的分析；

对本实验设计及操作过程中的一些想法或改进的建议)第四页，共二十五页，2022年，8月28日细胞膜的选择透性

实验目的1．了解细胞膜的基本功能2．了解质膜对几种小分子物质的选择透性及通过速度。第五页，共二十五页，2022年，8月28日1Thegreaterthelipidsolubility,thefasterthepenetration2Thesmallermolecules,thefasterthepenetration3Themoreunchargedmolecules,thefasterthepenetration脂溶性越高通透性越大，水溶性越高通透性越小；非极性分子比极性容易透过;小分子比大分子容易透过;带电离子很难透过；简单扩散的细胞通透性取决于：分子极性、分子大小第六页，共二十五页，2022年，8月28日红细胞对各种溶质的渗透性不同，有的可渗入，有的不能渗入；渗入速度也不同；如何记录？溶血现象第七页，共二十五页，2022年，8月28日溶血现象（hemolysis）此时光线较容易通过溶液，溶液由混浊变为清亮透明。溶质透过细胞的速度不同，溶血时间不同，由此来测量各种物质通透性的差别。能渗入红细胞的溶质能提高红细胞的渗透压，使水进入细胞，引起细胞吸水胀破；即红细胞膜破裂，血红蛋白从红细胞中溢出的现象称为溶血现象。第八页，共二十五页，2022年，8月28日等渗（isotonicorisosmotic）溶液渗透压与血浆渗透压相等的称为等渗溶液（如0.85%NaCl溶液），高于或低于血浆渗透压的则相应地称为高渗溶液或低渗溶液。低渗等渗第九页，共二十五页，2022年，8月28日将正常红细胞悬浮于不同浓度的NaCI溶液中：等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加45%～60%则细胞膜损伤而发生溶血，这时血红蛋白(hemoglobin)出细胞外，仅留下一个圆形细胞膜空壳－“ghost”。正常人的红细胞一般在0.42%NaCI溶液中时开始出现溶血，在0.35%NaCI溶液中时完全溶血。第十页，共二十五页，2022年，8月28日Thecellsbecomeleakyandthecontents,composedalmosttotallyofdissolvedhemoglobin,flowoutofthecellleavingbehindaplasmamembrane“ghost”Toplacethehumanerythrocytecellsinahypotonicsaltsolution(低渗盐溶液),thecellsrespondtotheosmoticshockbytakingupwaterandswelling.第十一页，共二十五页，2022年，8月28日去污剂（detergent）去污剂是一种小的双亲性分子，在水中形成球形小体－微囊结构。这种微囊结构可以同膜脂双层相互作用，形成磷脂和去污剂、蛋白的混和微囊。这样就以蛋白质－去污剂－磷脂或蛋白质－去污剂复合物的形式带进溶液。常用的去污剂有：离子去污剂（anionicdetergent）非离子去污剂（nonionicdetergent）第十二页，共二十五页，2022年，8月28日Thehydrophobic(疏水)partofeachmoleculeisshowninyellow;thehydrophilic(亲水)part,inblue第十三页，共二十五页，2022年，8月28日Thestructureandfunctionofdetergentmicelles.Becausetheyarecone(锥形的)-shaped,theyformmicellesratherthanbilayers.Detergentmicelleshaveirregularshapes,andthehydrophobictailsarepartiallyexposedtowater.第十四页，共二十五页，2022年，8月28日Asoapmicelle非极性脂肪酸尾朝里，wheretheyinteractwiththegreasymattertobedissolved.负电荷头部在微囊表面，wheretheyinteractwiththesurroundingwater.Membraneproteins,whichalsotendtobeinsolubleinwater,canalsobesolubilizedinthiswaybyextractionofmembranewithdetergents.第十五页，共二十五页，2022年，8月28日TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)作用：

nonionic(uncharged)detergent,whichgenerallydoesnotalteraprotein’stertiarystructure.TritonX-100是常用的非离子去垢剂－温和型适当浓度的TritonX-100可使膜蛋白溶解下来并保持活性，胞质中可溶性成分随之流失，而主要存留细胞骨架系统。Likemembranelipids,detergentsareamphipathic,theycansubstituteforphospholipidsinstabilizingintegralmembraneproteinswhilerenderingthemsolubleinaqueoussolution.第十六页，共二十五页，2022年，8月28日第十七页，共二十五页，2022年，8月28日非离子去垢剂的作用机理去污剂的非极性末端结合膜蛋白的非极性残基，极性端溶解到溶液中，蛋白不被破坏。第十八页，共二十五页，2022年，8月28日试剂：

1.NaCl:0.005M,0.065M,0.15M(接近等渗溶液)2.0.8M甲醇(C-OH)、

0.8M乙醇C-C-OH、

0.8M甘油

C-C-C-(OH)33.TritonX-1004.氯仿(三氯甲烷):

具腐蚀性，注意！第十九页，共二十五页，2022年，8月28日材料：羊的红细胞，红细胞，高度特化，无其他带膜的细胞器，是研究质膜的理想材料试剂：

1.NaCl:0.005M,0.065M,0.15M(接近等渗溶液)2.浓度相同(0.8M),极性相同,分子量不同的甲醇(C-OH)、乙醇C-C-OH、丙醇

C-C-C-(OH)3.浓度相同(0.8M),极性不同的丙醇、丙二醇、丙三醇

4.TritonX-100和氯仿(三氯甲烷):

具腐蚀性，注意！第二十页，共二十五页，2022年，8月28日步骤：1对照：量筒取3ml蒸馏水＋1滴血（悬浊液）

摇几下，对光观察现象2试剂组：各取3ml(先NaCL组、后醇类组、TritonX-100、氯仿)＋1滴血－开始计时摇几下如果发生溶血，溶液澄清后，stop（时间差），记录溶血时间的快慢。3显微镜观察：

处于等渗环境的正常羊红细胞半溶血态(0.065MNaCl)溶血状态第二十一页，共二十五页，2022年，8月28日

实验一报告内容

1）实验原理

2）记录实验结果和结果分析

第二十二页，共二十五页，2022年，8月28日第二十三页，共二十五页，2022年，8月28日

微分干涉显微镜下的鸡红细胞和人红细胞ABA人血红细胞B鸡血红细胞第二十四页，共二十五页，2022年，8月28日将观察到的现象记录，并进行分析和比较不同等渗溶液下的溶血现象试管编号是否溶血时间结果分析3mL5mmol/L