临床微生物学检验：微生物学检验的质量保证

微生物学检验的质量保证

掌握内容1.如何获得合格微生物检验标本？2.有哪些因素影响检验结果准确性？如何控制及减少影响？3.检验中质量控制的内容包括哪些？

微生物实验室的繁琐手工操作质量保证？细菌室的仪器设备操作规程文件准确、快速病原学诊断的决定因素临床医务人员提高送检意识标本采集运送储存……二大因素临床微生物室人员标本接收储存筛选处理分离鉴定……

质量保证

（qualityassurance，QA）QA概念有计划、系统地评估和监测患者诊疗质量的整个过程1过程及时发现问题，采取有效措施提高质量和服务

2目的随着质量管理理念的发展，质量保证的重点由发现问题转变为质量评估和质量改进3转变

持续质量改进满足临床的需要4结果标本接收染色接种培养鉴定药敏临床报告微生物实验室工作流程标本处理及检测结果处理与分析

分析前检验申请患者准备标本采集标本运送不合格标本分析后

结果审核报告发送标本储存废弃物处理分析中标本处理标本分析微生物检验质量保证第一节检验前的质量保证

检验前程序，又叫分析前期，指从临床医生开医嘱开始，到分析检验程序启动时终止的步骤。检验申请标本的采集与运送实验室难以完全控制检验误差发生率哪个阶段最高？

60%以上的误差发生在分析前期在1997年,一位意大利的检验专家对急诊检验误差发生的种类和发生率进行了统计，结果显示,约有68.2%的检验误差发生在检验前期,而来自于检验中期和后期的误差率为13.3%和18.5%。2007年这位专家又进行了类似的统计,结果显示,检验前期仍高达61.9%摘自人民网2009年07月06日:检验医师：在临床与实验室间“架桥”2009北京医院感染管理学习班Company

Logo第一节一、检验申请患者姓名、出生年月日、病房和床号、年龄和性别

临床表现(诊断）及当前所用抗菌药物

标本来源检验项目感染类型或目标微生物标本采集时间、实验室收到标本时间

检测申请单第一节一、检验申请第一节二、标本的采集与运送

标本采集及运送手册患者准备采集方法、采集时间延迟运送的贮藏方法安全运送标本的方法采集原则：早期、使用抗生素前、无污染等正确的采集与运送是保证微生物检验结果准确的前提标本运送：运送时间、运送条件、运送培养基

防渗漏、无菌容器、2h内尽快送检、对温度特殊的最好保温或床旁送检、脑脊液血液等不能冷藏第一节二、标本的采集与运送

标本接受：

制定标本接收或拒收标准，包括标本类型、标本量、运送条件、预防拭子干燥、运送培养基等缺乏正确标识标本：一般不接收或处理第一节二、标本的采集与运送

标本接收登记项目拒绝标准处理方式标

本溶血、血凝、脂血、错用容器、空容器联系送检科室后退回，重采集标本送检。缺少标本标签标本留在检验科，联系送检科室。对于非侵入性方式获取的标本（尿、痰、咽喉部标本）要求重新采集送检。对于侵入性操作获取的标本（穿刺液、体液、组织）只有在与采集此标本的医生商量之后，方可接收检测，并在报告上注明此问题，将其记录存档。标本有泄漏与送检科室联系，退回申请单，建议重送标本。有明显污染的标本与送检科室联系，退回申请单，建议重送标本。容器被压碎或有破裂使标本泄露与送检科室联系，退回申请单，建议重送标本。标本量不足与送检科室联系，退回申请单，建议重送标本。不正确的运送温度、保存条件与送检科室联系，退回原送检科室，重新采集，注意温度。痰液采集不当（如唾液）与送检科室联系，退回申请单，建议重送标本。样品已干燥与送检科室联系，退回申请单，建议重送标本。细菌培养24小时内的重复样本（血培养除外）一般只检查一次即可，可与临床医师进行协商。标本放置超过规定时间未按时送检与送检科室联系，退回申请单，重新采集送检。下列请求厌氧培养时：痰、咽拭子、皮肤、中段尿、导尿液、胃洗液、支气管洗液、阴道分泌物严格规范采集方式，不合格者退检。识

别条形码标本类型与实际送检类型不一致电话联系送检科室确认标本类型。容器上未注明检验项目与送检科室联系，退回送检科室。检验单上未注明样本来源和培养项目或与实际不符与送检科室联系，退回送检科室，建议重送标本。例：不合格标本拒收标准与处理方法19试剂培养基设备检验过程

室内质量控制人员第二节检验中质量保证人员

人员

具有能胜任复杂和相应工作量的较高素质；定期培训工作人员，且记录继续教育情况；组织学习SOP文件；每年对实验室人员进行评价培训内容：专业、生物安全防范、实验室微生物检验的规章制度等质控标准菌株来源美国菌种保藏中心（ATCC）

(AmericanTypeCultureCollection)

大肠ATCC25922、金葡ATCC25923、铜绿ATCC27853英国国家典型菌种保藏中心NCTC中国医学细菌和保藏中心CMCC临床检验中心下发的质控菌株菌株保存：半固体4℃、低温冰箱保存、真空冷冻干燥试剂和耗材试剂和耗材标识：名称、浓度、储存条件、配制日期、失效期，生物危害性新批号或同一批号不同货次试剂使用前性能检测。

评估方法：分析质控物质新旧批号平行试验

常规质控

培养基

培养基是分离培养微生物的必需品。培养基质量的好坏，直接关系到分离培养的成败。外观良好：表面平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度明确标识：生产日期、保质期、配方、贮存条件等自制培养基：每批号性能检测，如无菌试验、生长试验或与旧批号产品平行试验、生长抑制试验、生化反应等。培养基

购买的培养基：

检查并记录每批产品的破损、外观等信息。生产者提供质量保证标准的产品：保存生产者每批号产品完成无菌试验、质量控制性能合格证明等文件。

培养基外观例：培养基--无菌试验

按批号随机抽取一定数量的样品作无菌试验。对于压力蒸气灭菌后倾注的固体培养基，抽样后放35℃温箱24h；灭菌后经无菌操作分装的液体培养基要全部放入35℃温箱24h；对只需煮沸消毒的选择性培养基要取部分琼脂，放入无菌肉汤管培养24h。上述试验证实无细菌生长时才算合格。例：培养基--生长试验

做生长试验以测定培养基性能是否符合要求。要用已知的标准菌株按照CLSI推荐的方法作质控。质控所需的标准菌株分2种：一种是已知的可在某种培养基上生长并产生典型生物学性状的，对培养基中的某种物质产生阳性反应的菌株；另一种是用已知的不能在某种培养基上生长或对培养基中的某种物质产生阴性反应的菌株。常用培养基的质控见表5-1。常用生化试验培养基及试验的质控见表5-2。表6-3常用培养基的质控

培养基名称质控菌株预期结果血平板化脓性链球菌ATCC19615生长，β-溶血肺炎链球菌ATCC49619生长，α溶血巧克力平板流感嗜血杆菌ATCC9007生长中国蓝平板大肠埃希菌蓝黑菌落，宋内志贺菌无色菌落麦康凯平板大肠埃希菌生长，红色菌落奇异变形杆菌迁徒现象部分抑制金黄色葡萄球菌不生长沙保弱培养基白假丝酵母菌生长大肠埃希菌受抑制表6-4表6-4其他生化试剂染色液

革兰染液：金葡、大肠

每天做阴阳对照试验

抗酸染液：堪萨斯分枝杆菌ATCC12478）

每次做阳性对照定性试验：凝固酶：金葡、表葡（每天）触酶：金葡、粪肠（每天）氧化酶：铜绿、大肠（每天）药敏纸片:

每周一次抗血清:

每月一次血培养瓶：新批号生长试验细菌鉴定及药敏卡：新批号试剂和耗材设备制定并执行标准操作程序定期实施维护、保养、监测，并记录新设备或维修后的设备：性能评估及功能验证，以确保实验结果的准确性

记录保存至仪器报废

设备孵育箱、冰箱等：监测温度，并记录。定量移液器等：校正特殊设备：定期监测性能如CO2孵育箱内CO2浓度；生物安全柜内气流、过滤器；压力灭菌器灭菌效果等。生物安全柜内气流检测设备仪器设备名称控制标准允许范围监控方法和频率光学显微镜每年4次或需要时，作清洁与调试培养箱35℃±1℃每天观察记录温度

CO2培养箱每天观察记录温度和CO2浓度温度35℃±1℃气体5%-10%<10%

冰箱每天观察记录温度冷藏室4℃±2℃

冷冻室-18℃±1℃

低温冰箱-40℃±5℃每天观察记录温度压力蒸汽灭菌器121℃≥121℃使用时观察并记录温度、压力，每周用嗜热脂肪芽孢菌或每次用化学方法测试灭菌效果临床微生物实验室常用仪器设备的质量控制设备检验过程

检验方法的确认检验程序文件化检验结果质量控制室内质量控制室间质量控制检验方法的确认公认的、权威的教科书；书刊、杂志国际、国家、地区法规明确的方法和程序符合相应用途的内部规程所有方法和程序在应用前，对该方法的准确性、精确性、灵敏度、特异性、检出限、可报告范围评估,并与已有方法比对,证实方法可接受。标准化规范化操作规程（StandardOperatingProcedure,SOP）

实验原理方法标本类型、容器和添加剂所需设备、性能参数检测试剂、定标试剂、质量控制程序操作步骤、干扰和交叉反应生物参考区间结果可报告区间、警告/危急值、结果解释

由本实验室负责人批准、签名发布定期更新检验程序文件化

书目录第一章管理文件

第二章试剂与培养基的配制

第三章仪器设备的操作、维护保养

第四章标本采集、验收与接种

第五章各种标本的处理程序

第六章各种微生物的鉴定程序

第七章各种鉴定试验

第八章相关抗原抗体检测

第九章抗菌药物敏感性试验

第十章结果报告与检验后标本的处理

第十一章质量保证

例：标准化操作规程

例：标准化操作规程例：标准化操作规程室内部质量控制

室内质控是质量保证的核心。质控程序包括整个实验操作过程：染色液、生化试剂、抗血清、培养基、设备等质控程序质控物品应与日常标本一起检测出现失控时，报告主管，查找原因，采取纠正措施,并记录举例：药敏试验的质控

K-B法药敏试验M-H培养基：外观、厚度4mm抗生素纸片：取用、贮存培养条件：孵育的时间、温度、气体操作人员的熟练度：操作、测量、记录0.5号麦氏浊度标准管标准菌株一、药敏纸片新批号药敏纸片使用前用质控菌株测试平时使用前1-2小时，从冰箱取出放室温平衡低温贮存

-20℃保存：大量的，近期不用的性能不稳定的：亚胺培南，头孢克洛，克拉维酸复合剂

4℃保存：少量的，正在使用的，性能稳定的举例：药敏试验的质控二、药敏板条按照生产厂商的要求，定期对同一批号的药敏板条进行质控。更换批号时应作质控。三、0.5麦氏浊度标准管每月用分光光度计测吸光度，OD值应在

0.08-0.10之间举例：药敏试验的质控四、标准菌株（需氧菌的药敏试验）ATCC25922用于肠杆菌科细菌药敏试验质控ATCC25923用于葡萄球菌属或肠球菌属细菌药敏试验质控ATCC27853用于铜绿和不动杆菌属细菌药敏试验质控ATCC35218用于β－内酰胺酶抑制剂复合药药敏试验的质控质控菌株对药物敏感性测试应按CLSI规定的标准方法进行。日常使用的质控菌应放冰箱冷藏，每周移种。每月必须用冷冻菌株或冻干菌株作更换。举例：药敏试验的质控五、质控的方法与规定1.质控菌株与临床标本同步进行药敏试验2.所有质控菌株在实行常规监控（一周一次监控）前应连续监测20或30天，对每种药物，30次试验中失控结果不能超过3次；或者连续5天，每天一组药物重复测3次，15个数据不能超过1个失控。