高效液相色谱仪器的使用

关于高效液相色谱仪器的使用第1页，共25页，2023年，2月20日，星期日仪器的构造原理实验前的准备工作开机程序化学工作站简介关机程序仪器的维护和保养第2页，共25页，2023年，2月20日，星期日仪器的构造原理第3页，共25页，2023年，2月20日，星期日第4页，共25页，2023年，2月20日，星期日实验前的准备工作滤膜的选择流动相应该：HPLC级过滤：(最大0.45mm,0.2mm最好)脱气，尤其在低流速时互溶准备流动相选择合适的滤膜聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，不适用于DMF二甲基甲酰胺。注意：1，每张滤膜只能用一次。

2，水相和有机相不要搞混。第5页，共25页，2023年，2月20日，星期日流动相使用时的注意事项？1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或重蒸水,酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水需经常更换〈一般不超过2天〉,防止长菌变质；避免溶剂瓶直接日照。有条件的单位可向溶剂中加入0.0001-0.001mol/L的叠氮化钠。3、使用双泵时,A、B、C、D四相中,若所用流动相中有含盐,则A、D(进液口位于混合器下方〉放置含盐流动相,B、C(进液口位于混合器上方〉放置不含盐流动相A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶,用于存放水相流动相。第6页，共25页，2023年，2月20日，星期日样品的准备：1、采用过滤或离心方法处理样品,确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱的溶剂制备样品溶液,尽量用流动相制备样品溶液；3、手动进样时,进样量尽量小,使用定量管定量时,进样体积应为定量管的3~5倍；第7页，共25页，2023年，2月20日，星期日溶剂截止波长溶剂UV截止波长（nm）乙睛190水190环己烷195己烷200甲醇210乙醇210乙醚220二氯甲烷220氯仿240四氯化碳265四氢呋喃280（220）甲苯285所以，波长应至少比所用溶剂的截止波长大20nm以上。在使用紫外检测器时，所用波长与所用溶剂的截止波长接近（或低于截止波长）时，容易产生噪音干扰，从而影响检测结果。第8页，共25页，2023年，2月20日，星期日开机（关）程序1、打开SealWash清洗液开关，调节流速为2-3滴/min。2、打开计算机，进入Window操作系统，并运行CAGBootpsrever程序。3、打开1100LC各模块的电源，等待仪器自检完毕，1-2min。4、双击桌面上“Instrument1Online”图标，进入1100化学工作站。开机操作：第9页，共25页，2023年，2月20日，星期日进入Windows系统后BootpServer自动运行，电击将BootpServer窗口最大化，开启仪器电源后上面会出现七行通讯信息记录，表明工作站通讯成功，可以进入Agilent化学工作站。注意：不能关闭BootpServer窗口，只能最小化，否则将影响工作站通讯。第10页，共25页，2023年，2月20日，星期日熟悉化学工作站状态工具条快捷工具条自动进样控制在线信号显示仪器参数显示区仪器控制区第11页，共25页，2023年，2月20日，星期日通过View切换不同的任务界面1，方法与运行控制-信号采集；2，数据处理；3，报告设计；4，OQ/PV认证；5，诊断功能；第12页，共25页，2023年，2月20日，星期日输入流动相的量对着瓶子击左键，然后左键单击SolventbottlesFilling，显示右面对话框在TotalVolume下输入溶剂瓶容量，一般为1.00Liter，ActualVolume下输入溶剂实际加入的量，比如0.5Liter选中下面两个选项后，在溶剂低于0.1Liter时停止样品分析，溶剂用完后泵自动关闭。第13页，共25页，2023年，2月20日，星期日在工作站上开启仪器每个模块右下方都有开关键，点击后出现开泵、开灯等提示，选择“Yes”即将泵、灯等打开。点击“on”将打开所有模块，点击“off”将关闭所有模块。第14页，共25页，2023年，2月20日，星期日改变仪器运行参数对着仪器模块点击左键然后点击SetupPump…,显示右面的对话框,在此对话框中可以设置泵的参数。柱箱、检测器、自动进样器等参数改变操作与此相同第15页，共25页，2023年，2月20日，星期日调用/储存方法方法信息编辑完整方法调方法存方法/覆盖保存另存方法右图为方法存/取对话框，方法文件后缀名为.m第16页，共25页，2023年，2月20日，星期日其它功能菜单文件处理运行控制仪器控制序列放弃任务在线帮助工作站任务切换快捷键方法存取快捷键序列存取快捷键运行方法运行序列第17页，共25页，2023年，2月20日，星期日第18页，共25页，2023年，2月20日，星期日关机操作：1，如果使用了缓冲溶液流动相应先水：甲醇=90：10冲洗系统30min。2，用纯有机相冲洗系统30min。反相色谱用甲醇冲洗。正相色谱用相应的溶剂冲洗3，在工作站上关闭各个模块。4，退出工作站，关闭计算机。5，关闭1100LC各个模块的电源。6，关闭SealWash清洗液开关。第19页，共25页，2023年，2月20日，星期日仪器的维护和保养Agilent1100LC泵如何维护？Agilent1100LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相，及时合理的维护非常重要。A：流动相使用前请必须过滤脱气、。B：使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash选项。C：关机前，用90%的水冲洗系统30分钟，然后用有机溶剂冲洗系统30分钟（如甲醇），然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]D：及时更换PurgeValve内的过滤芯。（当打开PurgeValve时，压力高于10bar，表明过滤芯已堵）。E：使用合适的密封圈。第20页，共25页，2023年，2月20日，星期日色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液〉，再用甲醇冲洗；5、色谱柱在不使用时,应用甲醇冲洗,取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；使用过程中注意轻拿轻放。第21页，共25页，2023年，2月20日，星期日使用梯度比例阀时要注意那些事项？当盐溶液与有机溶剂溶液混合时，盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶，而不会出现沉淀。但是在比例阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来，通常，阀A接水相/盐溶液，D接有机溶剂，此法连接可有效使盐回落到盐溶液中，并被溶解。若颠倒过来，盐可能落在有机溶剂中，出现问题。强烈建议：当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时，推荐将缓冲盐通道接在A通道上，有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水冲洗所有的通道，以除去阀口上可能出现的盐沉淀。第22页，共25页，2023年，2月20日，星期日更换色谱柱时要注意什么事项?

在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，仪器的流动相管路连接非常重要,一般Agilent1100LC在第一次安装时,均有受过专业培训的安装工程师负责安装,各种接头会处理的非常完美。我们只需在更换色谱柱时注意接头处理就可以了，一般柱子入口接头为不锈钢卡套接头，柱子出口为不锈钢卡套接头或PEEK管线手拧接头，当完成第一次安装后，不锈钢卡套已固定死，当接不同的柱子时，要注意柱子接头处的形状和长度，否则会产生一个非常大的死体积。第23页，共25页，2023年，2月20日，星期日手动进样阀需做那些维护，使用时要注意什么？对于手动进样器，当使用缓冲溶液后，或者进浓度差异比较大的样品时要用专用工具而不是用带针头的注射器冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。注意事项：A：安装时六通阀的5，6出口要与注射器在同一水平线上，以防止虹吸现象的发生，导致进样量的重复性变异。B