肾穿病理报告的流程

肾穿病理报告的流程制片流程每周二、四下午肾穿，分别留取荧光及电镜标本后，立即固定剩余标本。所有穿刺结束后，组织放入包埋框并全部整理到脱水篮，放入自动脱水机，机器在夜间运行至第二天上午8点。制片流程组织脱水时间福尔马林固定：120min水洗：2min75%酒精：20min85%酒精：20min90%酒精：20min95%酒精：20min无水乙醇：10min无水乙醇：15min二甲苯：10min二甲苯：15min石蜡I：30min石蜡II：30min石蜡III：45min总时间约为360min，此步骤由自动脱水机在夜间运行。

制片流程组织包埋、切片步骤及时间：从第二天上午开始以10例前期肾标本为例1标本由脱水机拿出2逐个包埋组织，冷台冷冻后取出组织块及修整蜡块及其他前期准备时间：60min3冷台冷冻10min4切片展片捞片标记制片流程前期肾标本，每例标本切24片，贴在8张载玻片上，其中4张分别做HE，PAS，Masson，PASM,2张常规备用片，2张免疫组织化学片，每例标本约需10min，总计时间约100min（移植肾标本免疫组织化学备片为10张，每例切片时间延长约2min）5烤片30min6蜡块封存总计约200min，至中午结束切片制片流程各种染色时间从下午开始进行染色过程HE染色步骤1.切片脱蜡入水30min2.苏木素染核10min.水洗1min3.0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可)4.水洗蓝化(镜下观察).5min5.80%酒精伊红染浆10min.6.从低浓度到高浓度快速酒精脱水.5min7.二甲苯透明.20min8.树胶封片.标记10min总时间约95min制片流程PAS染色步骤1.切片脱蜡入水30min2.1%高碘酸染12min.流水冲洗2min3.shiff液染到组织转淡红.10-15min4.流水冲洗直至组织转枚红(镜下观察).5min5.苏木素染核3min.水洗1min6.0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可)7.水洗蓝化(镜下观察).5min8.从低浓度到高浓度酒精脱水.20min9.二甲苯透明20min10.树胶封片.标记10min总时间约120min制片流程Masson染色步骤1.切片脱蜡入水30min2.苏木素染核1min.水洗1min3.0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可)4.水洗蓝化(镜下观察).5min5.0.5%酸性品红+1.8%丽春红2R(1:1)染30min..6.1%磷钼酸染1min.7.0.2%淡绿的0.2%醋酸液1min左右.8.0.5%醋酸快速洗.9.从低浓度到高浓度酒精快速脱水.2min10..二甲苯透明.20min11.树胶封片.标记10min总时间约95min制片流程PASM染色步骤1.切片脱蜡入水30min2．混合染液预热30min3.1%的高碘酸中染12min.流水冲洗2min4.混合染液中染30min左右(镜下控制)5.0.2%氯化金过一下.(镜下控制)6.5%硫代硫酸钠染1min.7.苏木素染核5min.流水冲洗2min8.0.5%-1%盐酸分化.(浸一下即可)9.水洗蓝化(镜下观察).5min10.80%酒精伊红染浆8min.11.从低浓度到高浓度酒精快速脱水.5min12.二甲苯透明.20min13.树胶封片.标记10min总时间约135min制片流程以上四种染色可穿插同步进行，以标本数10例为例，染色总时间约为

200min,超出10例标本,切片时间递增,染色时间倍增.制片流程至下午五点左右制片过程全部结束，出片。周二穿刺，周三下午五点左右出片；周四穿刺，周五下午五点左右出片；免疫标记流程周二穿刺标本在周四上午进行免疫荧光染色。周四穿刺标本在周五上午进行免疫荧光染色。周五下午所有标本荧光拍照。免疫标记流程1、免疫荧光：1.1直接免疫荧光：冰冻切片室温放置20min，一抗室温孵育1h，洗片5min×3，晾干甘油封片，总计时间约2h。1.2间接免疫荧光：冰冻切片室温放置20min，一抗室温孵育1h，洗片5min×3，二抗室温孵育1h，总计时间为2.5h免疫标记流程2、免疫组化：石蜡切片脱蜡30min，抗原修复10min，自然冷却1h，一抗室温孵育1h或4度过夜，洗片30min，二抗室温孵育30min，洗片30min，DAB显色，苏木素复染细胞核，水洗蓝化，乙醇脱水，晾干封片总计时间约5小时电镜检查每周三下午浙大电镜室派人来实验室取电镜标本。电镜检查周四上午制样：（1）组织标本2.5%戊二醛固定；（2）0.1mol/LPBS冲洗15min×2次；（3）1%锇酸固定1h；（4）0.1mol/LPBS15min×2次；（5）2%醋酸铀水溶液染色30min×1次（6）30%，50%，70%，90%酒精依次脱水，各15min×1次；（7）100%酒精脱水20min1次，并振荡;（8）100%丙酮脱水20min2，并振荡；（9）1:1渗透：无水丙酮与包埋剂按1:1体积混合渗透组织，并振荡2h；（10）纯包埋剂渗透组织，并震荡2h；（11）纯包埋剂包埋：纯包埋剂包埋组织并置于聚合器中聚合37°Ｃ烘箱，24h；电镜检查周五：继续聚合，调烘箱温度至45°Ｃ，24h；周六：继续聚合，调烘箱温度至60°Ｃ，48h至周日；周一：定位。周二：切片。周三：透射电镜观察。

诊断周三上午浙大紫金港电镜观察，出具电镜报告。下午临床病理讨论。周四整理修缮周三读片后所有报告，输入电脑包括病理描述、免疫标记结果、电镜结果，打印签发报告。并进行新一轮病理诊断：荧光观察，光镜观察。周五光镜观察，下午荧光观察。周一、二光镜观察，所有切片拍照。结语周二肾穿病人下周四签发病理报告（9天，7个工作日）。周四肾穿病人因等待电镜报告，须在下下周四签发报告（16天，14个工作