岛津LC-20AT液相色谱操作步骤

岛津LC-20AT高效液相色谱操作步骤1、流动相的处理共有5个流动相储液瓶。一般RP-HPLC中，A〔无机相〕、B〔有机相〕为分析流动相；C〔水〕、D〔甲醇〕用于柱子后处理清洗；50%甲醇-水用于清洗自动进样针流动相体积VAB=100+总流速x比例系数x分析时间〔mL〕；Vc＞300mL；、VD-350mL；V50细『300mL〔根据有机相和无甲机醇相选用相应滤膜〕，清洗储液瓶，不能在清洗过程中留下污迹，并超声30min，超声完成后禁止剧烈摇晃2、开机开启插座电源一＞电脑开机翻开仪器电源〔LC—20AT最后翻开，等待数秒后“control”指示灯亮〕翻开软件［Labsolution—＞仪器一＞LC—20A〕，假设连接正常那么软件显示LC就绪3、自动排气将各流动相过滤头缓慢放入流动相中在简单设置界面设置总流速为0.2mL/min；在自动排气界面设置自动排气参数［A、B、C、D各流动相＞5min,自动进样器＞25min］，不勾选“排气结束后运行控制器”“下载〃一►“执行自动排气〃等待排气结束4、样品处理稀释后的样品〔浓度约1mg/mL,不宜过高〕用注射器经过滤器注入样品瓶样品应＞2/3样品瓶体积［1.5mL样品瓶〕按序号依次将样品瓶放入自动进样器的样品架上切记：将样品架推到底！5、系统平衡及设置分析条件自动排气完成后，设置柱温、检测波长等参数（建议柱温高于环境10℃），用梯度洗脱初始流动相平衡柱子［流动相比例与梯度洗脱初始比例一致〕“下载〃--“激活/取消激活仪器〃，此时系统显示：等待柱温稳定缓慢增加总流速至样品分析所需流速，V=1ml/min〔每隔1分钟增大0.2mL/min,注意每次增大都点击“下载〃及'在时间程序界面设置梯度洗脱条件假设要保存方法文件：文件一＞方法文件另存等待基线平稳〔留意泵压力是否稳定〕，待系统显示：LC就绪，右击，进行基线测试斜率〔一般＜3000即可〕开始测样6.“单次分析开始〞或“批处理〞依次输入样品名〔样品ID可有可无〕、样品瓶、瓶架〔1〕、进样体积等注意数据文件所在文件夹，输入数据文件名一翻开确定“向导〞“新建〞，样品组号〔1〕，选择“未知样品〞，依次输入文件名及其他注意批处理文件所在文件夹，勾选“数据文件名自动递增〞、不勾选“自动创立文件名〞完成选中全部序列开始批处理:先用易溶解样品的流动相清洗（一般用高比例有机相洗15min），10%甲醇洗30min，再用90%甲醇洗30min；长期不使用保存于纯甲方法一：在简单设置界面设置：流动相C-90%；流动相D-10%一^下载切换柱温箱off30min后设置：流动相C-10%；流动相D-90%一下载方法二〔推荐〕：设置洗柱程序“下载〞“单次分析开始〃一►样品瓶输入“-1〃文件名“洗柱〃系统提示“禁用采集〃一►确定（翻开Labsolution 再解柝”►准曲线数据处理一＞翻开文件一＞“向导〃勾选特征峰、外标法依次输入最大级别数〔标曲的点数〕、单位、化合物名、浓度等一＞完成应用到方法一►方法另存为主工程一►批处理一►翻开批处理文件填写表格：首行〔标准、初始化标准点〕，〔标准样数与前面的最大级别数相对应，剩下的为未知〕、〔文件方法为先前保存的方法，向下填充〕、〔标准样品级别号分别未知样品0〕批处理再解析开始一►批处理文件另存主工程一►校准曲线〔可找到已做成的标曲〕8.2生成报告翻开要生成报告的数据文件视图一►手动积分栏，处理数据文件生成报告右击“属性〞进行调整，预览、打印8.3检测限、定量限确实定、扣除背景〔略〕.实验结束后，切换泵ON/OFF〃确认泵泵压力降为零一关软件一再关仪器.电脑关机一关闭插座电源。＞考前