实验五血浆凝固酶实验与肥达实验

关于实验五血浆凝固酶实验与肥达实验第1页，共17页，2023年，2月20日，星期三目录一血浆凝固酶实验二、肥达氏反应实验第2页，共17页，2023年，2月20日，星期三熟悉血浆凝固酶试验的意义。目的：一血浆凝固酶实验材料：菌种：金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌其他：新鲜兔血浆(或人血浆)、

NS等第3页，共17页，2023年，2月20日，星期三纤维蛋白原+血浆凝固酶不溶性纤维蛋白玻片法原理：一血浆凝固酶实验细菌形成凝块黏附于细菌第4页，共17页，2023年，2月20日，星期三

充分混合，观察结果。结果：阳性——无法混匀，细菌在血浆中聚集成团块；阴性——呈均匀混浊；

血浆+NS+细菌1血浆+NS+细菌2

方法：一血浆凝固酶实验金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌意义：

鉴定致病性与非致病性葡萄球菌。第5页，共17页，2023年，2月20日，星期三目的：二、肥达氏反应实验1、掌握肥达试验的原理，操作方法及结果判断。2、熟悉其临床意义。第6页，共17页，2023年，2月20日，星期三一、肥达氏反应实验材料：1．标本感染待测血清（稀释度1：20）。2．试剂伤寒沙门菌菌体抗原（O）及鞭毛抗原（H）、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原及乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原。3．其他微孔反应板、50μl移液器、吸头、水浴箱等。第7页，共17页，2023年，2月20日，星期三原理：一、肥达氏反应实验第8页，共17页，2023年，2月20日，星期三（1）在微孔反应板编号4排6列。（2）每孔加入生理盐水50μl。（3）吸取待检血清50μl加入每排第1孔，连续倍比稀释到第5孔。从第5孔吸出50μl弃去。第6孔为对照管。这样每排从第1孔至第5孔的血清稀释度为1：40,1：80,1：160，1：320,1：640。（4）每排每孔加入对应的伤寒菌液50μl。（5）混匀，置于52℃水浴箱中1h后观察。方法：二、肥达氏反应实验第9页，共17页，2023年，2月20日，星期三50实验方法5050505050505050501:401:801:1601:3201:64050弃掉1234550650NS(μl

)待测血清对照管50505050①②③④灭活的伤寒菌液50μl

50μl

50μl

50μl

50μl

50μl

抗体稀释度彻底混匀52℃,1h二、肥达氏反应实验第10页，共17页，2023年，2月20日，星期三结果：

先观察对照管，应无凝集现象。“++++”—细菌全部凝集，液体清澈，孔底形成大片凝集物。“+++”—细菌大部分凝集，液体澄清，孔底明显凝集物。“++”—细菌部分凝集，液体半澄清，孔底有明显凝集物“+”—少量细菌凝集，液体较混浊，孔底少量凝集物。“-”—液体混浊，细菌无凝集。与对照孔相同。二、肥达氏反应实验第11页，共17页，2023年，2月20日，星期三

效价（滴度）的判定：

产生明显凝集反应（++）的最高血清稀释度为血清中所测抗体的效价。效价愈高，表示血清中所含该抗体愈多。如血清的最低稀释度仍无凝集，或血清效价低于1：80，则为阴性，应报“<1：80”；如果血清的最高稀释度1：1280仍呈“++”或更强凝集，则血清效价应报“>1：1280”。二、肥达氏反应实验第12页，共17页，2023年，2月20日，星期三实验预期结果+很小的凝集颗粒混浊-无凝集现象与对照相同++小、部分凝集块中等混浊+++大多凝集管底轻度混浊++++大的凝集块清亮凝集程度沉淀上清第13页，共17页，2023年，2月20日，星期三H与O抗体的性质及其消长意义预防接种；非特异性回忆反应感染早期、其他沙门菌引起的交叉反应患肠热症可能性大高低高出现较晚，维持时间长IgGH抗体低高高出现较早，维持时间短IgMO抗体体内出现情况体内出现情况抗体类型第14页，共17页，2023年，2月20日，星期三管底沉淀凝集程度最高稀释比例待测血清的滴度效价第15页，共17页，2023年，2月20日，星期三思考题1.李某发热、全身不适，体温持续升高，最高达40℃，采血进行肥达氏实验检测，检测结果是O