瑞氏染色原理及操作步骤

瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法一、原理： 瑞氏试剂中之酸性和碱性美篮混合经化学作用后，变成中性之化美蓝久置后经氧化而含有天青此三种分别和细胞核及浆中的NH3+和C-等结合，使细胞核及胞浆由于系中性又有缓冲液调节酸碱度所以细胞受染后等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。二试剂配制：瑞氏试剂 瑞氏（粉1克加不含醋酮之甲醇0毫升溶解过滤后即成。混合方式可将瑞氏置于研钵内，加适量甲醇混合研磨，使溶解，将已溶解的液体倒入清洁玻瓶，再放入甲醇继续溶解剩下，直至及甲醇均用完为止，然后过滤以深色中性之玻璃瓶储备待用亦可将1克一次加入0毫升甲醇中盛深色玻璃瓶内塞好瓶口置于温暖而之处或7度温箱内，每日振荡mn，连续7天以上，然后过滤储备用。染液宜久置后使用通常存放愈久染色效果愈好缓冲液 由%的磷酸氢二钠和%的磷酸二氢钾各0毫升加蒸馏水0毫升配成或以上两药各10毫升左右蒸馏水制成。以石蕊试纸检验、调整酸碱度，使PH在57之间即可。缓冲液亦可永新鲜蒸馏水或气中之二氧化碳而使PH值变低，影响染色，故不宜使用。染色步骤1将已编号之涂片水平置于染色板或者染色片两端各划一道蜡笔线主要防止染液外溢。2滴加瑞氏48。染液不宜过少，否则，挥发后，易产生沉淀；不可过312（染液与缓冲液的比例约为.51124自缓冲液滴入-5分钟后用自来水冲洗冲洗时应将玻片持平以流水滴入使染液及缓冲液自玻片边缘溢出，沉淀即随水浮去冲洗时切忌水力过大，以免将标本并染液同时冲走冲洗前切不可先将染液倾去，否则沉淀将附于标本上不能除去染色时间与染液的性质酸碱度气温等关系甚大因此应灵活掌握。最好先冲洗一张，于低倍镜下初步检查，如细胞核浆分明，颗粒清楚，表示染色满意，此时，始可将其余涂片全部冲洗如染色过浅则需延长染色时间5 冲洗待干、镜检如天冷或空气湿度大可用吸水纸吸水加快干燥速度但切忌用力重压或擦拭以免将标本中的细胞成分擦去或破坏。 四、优缺点 其主要优点是染色方法简单、省时、易于推广，且染色较清晰，特别是胞浆及其中颗粒受染良好根据我们的体会在细胞学检查中，除个别情况外瑞氏染色基本上可以解决绝大部分常见病的诊断问题其不足之处是核染质及核膜的结构往往不如巴氏染色清楚。五染色不佳的原因及纠正方1、染色过 A表 镜下细胞变小，核与浆均呈深蓝或蓝黑色结构不清，红细胞呈碱性色。B原因染色时间过长；染液过多或缓冲液过少；染液或缓冲液偏碱；夏季染色过程中甲醇挥发。C纠正用甲醇脱色后重复染色。亦可用甲醇或瑞氏染液脱色数秒后冲 A表现 B原因 C纠正 3、染色偏碱较常见A表现红细胞呈蓝色或绿色，细胞核、细胞浆及颗粒，结构不清。酸性颗粒亦蓝染，淋巴细胞呈灰色。B原因基本与染色过深之原理相同，玻璃片偏碱、冲洗时间不足亦为可能之原因。C纠正如染色过碱，可于其中加1%醋酸少许，或将涂片浸于95%数秒中，然后冲洗。4、染色偏酸较少见A表现镜下一片红色，胞核及嗜碱性颗粒亦红染或不。B原因放置过久或与空气接触后氧化而成甲酸；玻片或缓冲液偏酸。C纠正新旧染液混合使用，借以调整其PH值，或于染液中加1%碳酸钠适量。5、沉渣过多；主要表现为涂