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文档简介

1、菌种培养1.1、母种（试管种）培养取蜜环菌Armillariamellea（Vahl.exFr.）Quel.保藏菌株，用PDA培养基（马铃薯200g煮熟过滤，蔗糖20g，硫酸镁0・75g,磷酸二氢钾0.75g,琼脂20g,配置1000ml）培养。灭菌条件：110°C,0.IMP,灭菌30分钟。培养温度26-28C，培养周期7-10天。1.2、摇床扩大培养（液体菌种培养）取培养好的母种（试管种）,转接于三角瓶液体摇床培养,培养基为PDA培养基不加琼脂，500ml三角瓶装量250-300ml。接种（母种）后于摇床上110n/m振荡培养。灭菌条件：110C,0・1MP,灭菌30分钟。培养温度26-28C，培养周期3-4天。1.3、种子罐培养培养好的三角瓶液体菌种转接于种子罐进行发酵培养，培养基同液体菌种培养基。灭菌条件：110C,0.1MP，2小时。培养温度26-28C，培养周期4-6天。1.4、发酵培养基：麦麸200g，玉米粉10g，蔗糖20g，酵母粉10g，水1000g。将60%体积的培养基置发酵罐中，灭菌，将种子罐菌种转接于发酵罐内进行发酵培养，待发酵液变为紫褐色，由稠变稀，部分菌丝开始自溶，菌丝颗粒变碎，pH值降至5・2—5・6,罐内亮度开始减弱，即可出罐。灭菌条件：121°C,0.IMP,2小时。培养温度26-28C，培养周期6-7天。2、滤过培养好的发酵液，板框压滤。3、浓缩将上述滤液置真空减压浓缩罐内，减压浓缩至相对密度1.18（20C）。4、检验。4.1性状本品为棕褐色粘稠液体，味微酸、苦、微甜。（无发酵变质、长霉等现象）4.2鉴别4.2.1取本品2.0ml,加甲醇10ml,密塞，时时振摇，浸渍1小时，滤过，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述溶液5卩1，点样于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇一乙酸乙酯（4：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在110C烘约10分钟，立即检视，应有蓝色斑点。4・2・2取本品约1.0ml,加水10ml,在水浴中加热溶解，过滤，取滤液2ml,加5%a-萘酚乙醇液数滴，摇匀，沿壁加入浓硫酸1ml,在两液面交界处即显紫红色环。4・3检查相对密度本品的相对密度(中国药典2010年版一部附录WA)应不低于1.15(20°C)。5、包装。洁净塑料桶包装，规格：25kg/桶

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