新城疫病毒诱导鸡胸腺法氏囊细胞凋亡的初步研究img,alt,stylemargin

本文格式为Word版，下载可任意编辑——新城疫病毒诱导鸡胸腺法氏囊细胞凋亡的初步研究,,img,alt,stylemargin新城疫病毒诱导鸡胸腺、法氏囊细胞凋亡的初步研究李翔房慧伶曾芸广西大学动物科学技术学院广西南宁530005摘要新城疫NewcastleDisease,胭是由副粘病毒科新城疫病毒NewcastleDisaasVirus,胭r引起的烈性传染桂疾病。最近研究说明，NDV可在体外谤导淋巴细胞凋亡，但NDV在体内诱导淋巴细胞凋亡尚未见报道．本研究用新城疫病毒标准强毒F48E株感染鸡，通过光镜和电镜查看鸡的胸腺和法氏囊中淋巴细胞凋亡的形态特征并在光镜下计数和举行统计学分析．光镜下，对照组胸膝争法氏囊凋亡淋巴细胞数量较少；

感染蛆脾腺和珐氏囊琳巴细胞展现了明显的细胞凋亡．无论是对照组还是感染组，凋亡细胞的数量在皮质多于髓质，而且在皮质与越质交界处最多．电镜下可以领会地查看到细胞凋亡过程和多种形态的凋亡细胞及凋亡小律的形成与除掉．意肇后期，在脚腺和法氏囊组织中察觉有细胞变柱，坏死．胸腺和法氏囊淋巴细胞平均凋亡率变化曲线图显示胸腺和法氏囊淋巴细胞的凋亡率变化规律的一样的．1感染组的凋亡率显著高于对照组；

2对照蛆凋亡率随着天数的增加而增大3感染组的凋亡率随着天数的增加而增大，并于第三天达成最大．以后逐步回落．统计举分析说明胸腺和法氏囊淋巴细胞的凋亡率感染姐与对照蛆对比呈枫显著差异p0．01。

测验姑果说明NDV标准强毒F45B人I感皋呜后可以请导胸朦和法氏囊淋巴细胞凋亡，同时引起鸡胸腺和法氏囊淋巴细胞坏曩，造成淋巴细胞数量裁减，导致免疫抑制．关键词t断城疲病毒胸朦法氏囊细胞凋亡新城痰Newcast]eD1sesse,刀是由副牯病毒科新城疫病毒Newcast]eDiseaseVirus,彻n引起的烈性传染性疾病。NDV能够引起胸腺和法氏囊淋巴细胞大量坏死，导致严重的免疫抑制。对NDv引起ND的病理学入们已经作过较细致的研究，但对NDV引起胸腺和法氏囊淋巴细胞凋亡的研究较少。最近研究说明，NDV可在体外诱导淋巴细胞凋亡，使淋巴细胞数量裁减，导致免疫抑制，但NDV在体内诱导淋巴细胞凋亡尚未见报道。本试验通过对人工感染NDV的鸡脾腺和法氏囊举行光镜和电镜查看，直接查看至0胸腺和法氏囊淋巴细胞呈现细胞凋亡的典型特征．为表明NDV引起免疫抑制的机理供给了直接证据。

1，材料和方法1．1材料1．1．1鸡北海风翔畜禽有限公司供给。30只，品种中麻鸡。

L1．2NDV毒株F48F．8株，广西大学动科院禽病研究室供给。

1．2方法1．2．1检测母源抗体血清学试验，呈阴性。

．124i．2．2测验鸡分组，攻毒，饲养测验鸡随即分为两组感染组和对照组，每组15只，隔离饲养。25日龄攻毒将新城疫标准强毒F48E8举行l10稀释，每只鸡肌肉注射0．5ml。

1．2．3取材攻毒后ld，2d，3d，4d，5d连续取材。每天剖杀6只，对照组和感染纽各3只。取鸡的肝，脾，胸腺，法氏囊举行姐清学试验。取鸡的胸腺和法氏囊举行如下固定】光镜查看的材料用lo％的福尔马林溶液固定。

2电镜查看的材料用3％的戊二醛固定。

l2。4新城疫病毒的检测血清学试验，呈阳性。

1．2．5光镜制样，查看常规石蜡切片，HE染色，光镜查看，拍照。

1．2．6电镜制样，查看1％锇酸固定，环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色，透射电镜查看，拍照。

1．2．7凋亡指数％的计算光学显微镜下查看，随机选择10个视野，计数凋亡细胞，并计算凋亡指数。

凋亡指数％该范围内凋亡细胞数／该范围细胞总数*100％2．结果2．1光镜查看对照组胸腺和法氏囊凋亡淋巴细胞数量较少；

感染组胸腺和法氏囊淋巴细胞展现了明显的细胞凋亡。无论是对照组还是感染组，凋亡细胞的数量在皮质多于髓质，而且在皮质与髓质交界处最多。凋亡早期的淋巴细胞嗜碱性巩固，体积缩小，胞浆浓缩，并与周边淋巴细胞脱离。随后细胞核染色质凝集，边集，裂解成致密的球形染色质团块凋亡小体，结果被巨噬细胞吞噬。感染后期，在胸腺和法氏囊组织中察觉有细胞变性、坏死。

2．2电镜查看在电镜下可以领会地查看到了细胞凋亡过程及形成的凋亡小体。由于在同一组织中细胞凋亡并不是同时发生的，所以处在不同凋亡阶段的凋亡细胞均可见到。细胞凋亡早期，染色质浓缩，边集，核膜和胞膜完整，线粒体，高尔基复合体等细胞器无明显变化，但数量裁减。细胞凋亡中期，细胞变形，细胞膜仍完整。凋亡细胞的细胞核展现各种各样的形态新月形、半月形、“c”形、花瓣状、圆环状或圆斑状等。后期细胞核碎裂，细胞膜出泡，芽生形成膜包裹的凋亡小体。凋亡小体常包含浓染的染色质团块及片面胞浆成分。最后凋亡细胞和凋亡小体被巨噬细胞吞噬、除掉。个别凋亡细胞的细胞器和胞浆内展现空泡，还有些凋亡细胞发生继发性坏死。

．125．2．3统计分析，计算凋亡率，绘制曲线图2．3．1对胸腺和法氏囊凋亡细胞计数举行统计分析。

表1胸腺淋巴细胞平均凋亡率％Groupld2d3d4d5dControl0．169-士0．10l0．246士0．0710．408士0．1850．462士0．1660．685t0．147TreatmenI1．139-0．2681．315￡-0．3003．8390．2523．339-I-0．3562．915士O．559PpO．OlpO．Olp0．01p0．01D0．01表2法氏囊淋巴细胞平均凋亡率％Group1d2d3d4d5dContr011．23士0．2631．61￡-0．2862．26t0．3072．6l士o．4322．80士o．477Treatment2．03i-0．3423．8IL-0．6324．64t0．5924．13t9．8123．73士-0．499Pp0．01p0．01p0．01pO．01pO．01从表1、表2可以看出，胸腺和法氏囊淋巴细胞的凋亡率感染组与对照组对比呈极显著差异pO．01。感染后第三天细胞凋亡率达成最高。对照组凋亡率随着天数的增加而增大。法氏囊无论是对照组还是感染组，其淋巴细胞的平均凋亡率都高于胸腺。

2．3．2凋亡率及其曲线图．126．图1胸腺淋巴缅胞平均凋亡率变化曲线图图2法氏囊淋巴细胞平均凋亡率变化曲线图从瞌线圈可以看出胸腺和法氏囊淋巴细胞的凋亡率变化规律的一样的。

1感染组的凋亡率显著高于对照组；

2对照组凋亡率随着天数的增加而增大；

3感染组的凋亡率随着天数的增加而增大，并于第三天达成最大，以后逐步回落。

3．议论3．1测验结果说明，对照组和感染组的胸腺和法氏囊的淋巴细胞都发生了细胞凋亡。胸腺和法氏囊的皮质和髓质，在光镜下可以查看到染色质凝集形成的圆形，半月形等外形的凋亡细胞及细胞核裂解形成的凋亡小体；

在电镜下除查看到多种外形的凋亡细胞外，还可以查看到凋亡小体的形成和消亡过程细胞皱缩，胞质电子密度增大一染色质凝集并裂解为数个圆形团块，然后散开一细胞膜内陷，逐步将含有致密染色体团块和片面胞浆的凋亡小体释放出去，结果被巨噬细胞吞噬。光镜与电镜查看结果～致，从不同角度显示了胸腺和法氏囊的淋巴细胞发生细胞凋亡的形态变化过程。

3．2NDV能在体内同时引起鸡胸腺，法氏囊淋巴细胞坏死和凋亡。这与LamKM报道的鸡新城疫病毒感染在导致细胞凋亡的同时又伴随着细胞坏死的结果是一致的⋯。细胞凋亡与细胞坏死是细胞死亡的两种不同形式，两者的超微布局变化明显不同细胞发生坏死时，细胞器的变化早于细胞核的交化，细胞胞质肿胀，细胞体积增大，胞膜破损，线粒体、内质网明显扩张；

当细胞核坏死时，染色质嗜碱性减弱，呈稀疏细颗粒状，分布无规律，边界不清；

细胞急速展现肿胀和溶解。而细胞发生凋亡时，细胞皱缩，胞膜完整，胞浆内的细胞器变化发生较迟且变化不明显，细胞核染色质早期即发生凝集、边集、嗜碱性巩固、细胞核固缩、碎裂成数个圆形颗粒。

3．3凋亡细胞的数量，在皮质多于髓质，而且在皮质和髓质的交界处凋亡细胞的数量最多。这是由于皮质和皮髓交界处为淋巴细胞举行阳性选择和阴性选择的部位”1，所以在皮质或皮髓交界处展现细胞凋亡的几率就大一些。未成熟的淋巴细胞是～种双阳性细胞，即．127CD4--CDa双阳性细胞，与胸腺上皮细胞的姗IC分子相互作用，发育成单阳性细胞，这一过程为淋巴细胞的阳性选择。未成熟的淋巴细胞与自身悯c分子和自身抗原共同作用，启动细胞凋亡程序，导致细胞被除掉，此过程即为阴性选择。淋巴细胞的阳性选择，导致了CD4域Cm细胞的展现和正常发育，而阴性选择导致了凋亡”1。李玉谷、辛朝安等，通过对鸭胸腺细胞自然凋亡的电镜查看，察觉鸭自然凋亡的胸腺细胞多位于胸腺皮质“’，这与本测验结果好像。

3．4从胸腺、法氏囊的淋巴细胞平均凋亡率变化曲线图可以看出，人工感染新城疫病毒后的第三天，感染组的细胞凋亡率达U最大值，以后逐步回落，这可能与NDv诱导的时间有紧密关系。刘胜旺、陈洪岩等，在新城痰F48E9病毒体外诱导鸡T细胞程序性死亡的试验中，用流式细胞仪检测，随着诱导时间的增加，凋亡细胞的数目也明显增加“3。以后逐渐回落可能与细胞坏死有关。病毒感染除了能引起细胞凋亡，还引起细胞坏死。细胞凋亡是病毒损伤细胞的最直接机制，而有些细胞为了抗争病毒诱导的凋亡而以坏死形式发生死亡，因而在病毒感染的早期，坏死细胞不多见，但随着病程的延长，细胞坏死的程度也随之增加”1。

陈志胜、王丙云、潘患雄等，通过对鸭肝炎病毒诱导雏鸭细胞凋亡的研究。察觉DttV强毒株在接种后24h即可诱导免疫器官有明显的细胞凋亡，而接种后72h凋亡处境逐步停【上。脾、胸脓、法氏囊凋亡率在36h达颠峰。然后逐步被坏死代替，透露了雏鸭发病过程中，免疫细胞的凋亡先于病理性损伤发生。DIN可诱导胸腺、法氏囊细胞及脾脏胸腺凭借及非凭借区淋巴细胞均发生