第三章药物杂质检测技术

第三章药物杂质检测技术第一页，共一百二十四页，2022年，8月28日学习目标1.掌握一般杂质的检查原理、方法及杂质限量计算2.熟悉特殊杂质的检查方法3.了解药物杂质检查的意义及药物杂质的来源及分类4.学会药物中常见一般杂质检查和特殊杂质检查的操作第二页，共一百二十四页，2022年，8月28日导学情景情景描述：一天，小娟发现阿司匹林长毛了，小娟轻轻一抹，毛没了，正打算把脱了小毛的药片放入瓶里，恰好她表姐进来了，看到此情景制止了小娟的行为，把长毛的药片装好，准备交到药店的过期或变质药品回收处。学前导语：药品在生产、贮存过程中由于各种因素影响，会发生变质反应，产生多种杂质，这些杂质不仅没有治疗作用，往往还对人体有害。第三页，共一百二十四页，2022年，8月28日第一节杂质的来源与杂质检查方法一、杂质的来源及分类杂质（impurities）是指：

1.有毒副作用的物质

2.本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质

3.本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质第四页，共一百二十四页，2022年，8月28日药物的纯度和化学试剂的纯度的区别

前者主要从杂质对用药安全、有效性及药物的稳定性的影响方面考虑，后者是从杂质可能引起的化学变化对试剂的使用范围和使用目的的影响来考虑。药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。不能用化学试剂的规格代替药品标准，不能将化学试剂当做药品直接用于临床治疗。第五页，共一百二十四页，2022年，8月28日（一）药物中杂质的来源1.生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物

（2）试剂、溶剂、催化剂类

（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质第六页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.贮藏过程中产生

水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等第七页，共一百二十四页，2022年，8月28日易发生水解反应的结构：

酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等易发生氧化反应的结构：

醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等第八页，共一百二十四页，2022年，8月28日（二）药物中杂质的分类1.按杂质的产生和分布特点分类（1）一般杂质自然界中分布广泛容易引入的杂质氯化物硫酸盐水分重金属等（2）特殊杂质特定药物中产生，如阿司匹林中水杨酸硫酸阿托品中莨菪碱。2.按杂质作用特点分类（1）信号杂质（2）有害杂质3.按杂质结构特点分类分为无机杂质和有机杂质第九页，共一百二十四页，2022年，8月28日二、药物杂质限量与杂质检查方法（一）杂质限量指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。限量检查定义：不测定杂质的含量，只检查杂质是否超过限量的方法。第十页，共一百二十四页，2022年，8月28日杂质量≤杂质限量＜杂质量药品合格药品不合格第十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日（二）药物杂质检查方法对照法灵敏度法比较法第十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日1.对照法限量检查法（LimitTest）方法：取一定量待检查杂质的对照液与一定量供试品液在相同条件处理后，比较反应结果，从而判断供试品中所含杂质是否超限。要求：遵循平行操作原则特点：不需知道杂质的准确含量第十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日杂质限量计算杂质限量=杂质的最大允许量/供试品量杂质限量=标准溶液的浓度X标准溶液的体积/供试品量L=CV/S×100%第十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日例1对乙酰氨基酚中硫酸盐的检查：取本品2.0g，加水100ml，加热溶解后，冷却、过滤、取滤液25ml，依法检查，与标准硫酸钾溶液1.0ml（1ml相当于100µg的硫酸根）制成的对照液比较、浊度不得更大。求硫酸盐的限量为多少？第十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日例2丙磺舒中检查重金属：取丙磺舒1.0g，依法检查，重金属不得超过百万分之十，应取标准铅液多少ml？（每ml相当于10µg的pb）第十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日例3检查氯化钠中砷盐，规定取标准砷液2.0ml（1ml相当于1ug的As）制备标准砷斑，要求砷含量不得超过0.00004%。问应取供试品多少克。第十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日例4磷酸可待因中吗啡检查：取本品0.1g，加盐酸溶液使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15分钟，加氨试液3ml，所显颜色与吗啡溶液【取无水吗啡2.0ml，加盐酸使溶解成100ml】5.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得变深，问限量为多少？第十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日灵敏度法是以反应的灵敏度来控制杂质的限量。系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。特点：不需对照品。第十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日例：纯化水中氯化物检查，在50ml中纯化水中加入硝酸5滴，及硝酸银试液1ml，要求不得发生浑浊。氯化物的限量就是测定条件下不产生氯化银的浑浊为限。第二十页，共一百二十四页，2022年，8月28日比较法方法：取供试品一定量依法检查，测定待检杂质的吸收度或旋光度等与规定的限量比较，不得更大。特点：准确测定杂质的吸收度或旋光度并与规定限量比较，不需要对照物。第二十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日第二节一般杂质检查

药物中杂质的检查是利用药物与杂质之间性质（包括物理、化学性质）的不同，选择适当有效的方法进行检查测定。药典2015年版将一般杂质的检查方法收载于四部通则中，药典正文中各药品的质量标准不再重复记叙这些方法，而是直接引用。第二十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日一般杂质检查要求：1.遵循平行操作原则（1）仪器的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致。（2）对照品与供试品的同步操作第二十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.正确的取样及供试品的称量范围（1g不超过±2%，＞1g不超过±1%）3.正确的比色、比浊方法及检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份第二十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日一、氯化物检查法一）检查原理（对照法）利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银试液作用，生产氯化银白色浑浊，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成氯化银浑浊比较，以判断供试品中氯化物是否超过限量。第二十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日二）操作方法（药典附录）1.供试液：除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。第二十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.对照溶液：另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照溶液。3.比浊：于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比浊。第二十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日（三）注意事项标准NaCl溶液

10ugCl/ml，50ml溶液中含50～80ug的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液5～8ml。2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。

第二十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日（1）加速AgCl浑浊的形成；（2）产生较好的乳浊；（3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。第二十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日

3.试剂：硝酸银

4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀

5.避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。

6.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。第三十页，共一百二十四页，2022年，8月28日

7.若供试品有色，需经处理后方可检查。

（1）内消色法：分为两等分量，一份加硝酸银，出现沉淀，过滤。再加标准氯化钠和水，作为对照溶液。

（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。第三十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日二、硫酸盐检查法检查原理(对照法)利用硫酸盐在盐酸酸性溶液中与氯化钡生成白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下与氯化钡生成的浑浊比较，以判断药物中硫酸盐是否超过限量。第三十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日二）操作方法取规定量的供试品，加水溶解使成约40ml（如溶液显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试液。另取各药品项下规定量的标准硫酸钾溶液，按同样方法制成对照液于供试液与对照液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释至50ml，摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较。第三十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日三）注意事项标准K2SO4溶液:每1ml相当于0.1mg的SO42－，50ml溶液中含0.1～0.5mg的SO42－所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液1.0～5.0ml。2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。第三十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日3.试剂：氯化钡4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀5.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。第三十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日四）干扰及排除加入盐酸，排除碳酸离子等干扰。温度太低，水浴加热，加快浑浊产生。若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。供试液不澄明，用成酸性的水洗过的滤纸过滤。

第三十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日三、铁盐检查法1.原理对照法在盐酸酸性溶液中，铁盐与硫氰酸铵生成红色可溶解硫氰酸铁配位离子，与标准液用同法处理，进行比较，观察颜色。第三十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.检查方法（药典附录）除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀（供试液及处理）；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液比较，即得。第三十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日对照液：取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀第三十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日3.测定条件（1）标准铁溶液及对照液用FeNH4(SO4)2·12H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10gFe3+/ml，50ml溶液中含10～50g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.0～5.0ml第四十页，共一百二十四页，2022年，8月28日

（2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。

（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行（4）检查Fe2+和Fe3+

第四十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日

（5）铁盐检查时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+

（6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。第四十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日4.干扰及排除

（1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。

（2）干扰离子的影响（增加酸度，增加硫氰酸铵等

（3）具环状结构的有机药物，需经700～800℃炽灼破坏处理后再依法检查。第四十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日四、重金属（铅）检查法

重金属主要指银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、镍等，通常在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠试液作用而显色的金属杂质。重金属可以影响药物的稳定性及安全性。重金属的检查以铅的检查最为代表。第四十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日重金属检查药典2000收载了四种方法第一法：该法也称硫代乙酰胺法第二法：炽灼残渣法第三法硫化钠法第四法微孔滤膜法第四十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日第一法（也称硫代乙酰胺法）1.原理对照法

适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。

CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2SPb2++H2S→PbS+2H+（PH3.5）第四十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.操作方法取25ml纳氏比色管两只，甲管中加入标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲溶液（pH3.5）2ml后，加水或规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入按各药品项规定下的方法制成的供试液25ml；再分别于甲、乙两管中加入硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，比色。第四十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日

3.测定条件

（1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10gPb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含10～20g的Pb2+，相当于标准铅溶液1~2ml。第四十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日（2）本法用2mlpH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为3～3.5，此时硫化铅沉淀较完全。（酸度大，颜色浅甚至不显色）

（3）显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂

第四十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日3.干扰及排除（1）供试品如有色，需经处理后方可检查。

A.外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。

B.内消色法

C.改用第四法，微孔滤膜过滤法第五十页，共一百二十四页，2022年，8月28日（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸Vc或盐酸羟胺（0.5～1.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰（3）若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽Zn2+后（生成稳定配合物），依第三法检查（加入硫化钠）。第五十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日第二法炽灼残渣法

适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。

1.原理对照法

500～600℃炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。第五十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.操作方法

取炽灼残渣，加硝酸，放冷，加盐酸，加水，加氨水对酚酞显示中性，再加醋酸盐缓冲液，加水稀释作为供试液。另根据规定配置标准液，用第一法检查，可得。含钠及氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）。第五十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日第三法硫化钠法

适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。

1.原理对照法在氢氧化钠碱性条件下，重金属杂质与硫化钠生成有色硫化物，再与标准铅溶液同法处理的颜色进行比较，来判断重金属的含量。第五十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.测定条件

（1）NaOH碱性条件下（2）显色剂：硫化钠用于难溶于稀酸能溶于碱水的药物。如巴比妥类。第五十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日第四法微孔滤膜法

适用于含2～5g重金属杂质及有色供试液的检查。依一法检查，微孔滤膜过滤后比较色斑。（含量低，难以比色）第五十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日五、砷盐检查法（一）古蔡法1.原理对照法

锌与酸生成新生态的氢，砷化氢遇HgBr2试纸生成黄色～棕色的砷斑，与标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较第五十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日第五十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.操作方法（1）标准砷溶液制备（2）标准砷斑制备（3）供试品砷斑制备（4）比色（5）结果判断第五十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日3.注意事项（1）标准砷溶液（三氧化二砷）临用新配（2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml。第六十页，共一百二十四页，2022年，8月28日B.碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行；C.氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生；D.可抑制微量锑化氢的干扰，在实验条件下，100gSb存在也不干扰测定。（3）酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是：A.还原As5+为As3+，加快反应速度；

第六十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日（4）醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰，醋酸铅棉花60mg装管高度60～80mm。（5）锌粒应无砷（6）砷斑不稳定，应立即观察第六十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日4.干扰及排除（1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，加HNO3，△，使氧化成硫酸盐，以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐的检查。

第六十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日（2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+。如枸橼酸铁铵中砷盐的检查。（3）具环状结构的有机药物，要先行有机破坏后再进行检查。常用的有机破坏方法：碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作第六十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日（4）本法适用于不含Sb（锑）或含Sb量小于100g的供试品。第六十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日七、干燥失重测定法

干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，通常以百分率表示。主要是水分，挥发性物质。方法：一）常压干燥法、二）干燥剂干燥法、三）减压干燥法第六十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日一）常压干燥法

适用于受热较稳定的药物。操作：将供试品置相同条件已干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定，于烘箱内在规定温度下干燥至恒重（连续两次干燥后重量差在0.3mg以下），根据减失的量和取样量计算供试品的干燥失重。第六十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日注意事项：1.干燥温度一般为105℃，干燥时间2~4小时，取出于干燥器中冷却至室温称重。2.第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。3.供试品平铺于称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松物质不超过10mm，颗粒大的需研细4.含结晶水的可提高干燥温度。第六十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日5.供试品易熔化的，可先在低温下干燥，然后在规定温度下干燥6.受热易分解而达不到恒重的，采用一定温度干燥一定时间减失的重量代表干燥失重。第六十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日第七十页，共一百二十四页，2022年，8月28日二）干燥剂干燥法适用于受热易分解或挥发的供试品。将供试品置于干燥器内，利用干燥器内的干燥剂吸收供试品中的水分，干燥至恒重。干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5

。第七十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日第七十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日三）减压干燥法

适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。

除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。减压干燥器或恒温减压干燥器第七十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日第七十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日六、酸碱度检查法溶剂：新沸冷水为溶剂，不溶于水的药物可以用中性乙醇等有机溶剂溶解，或将药物与水混摇，使所含酸碱性杂质溶解，滤过，取滤液检查。第七十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日一）酸碱滴定法原理：在规定的指示液条件下，用规定浓度的酸或碱滴定液滴定供试品溶液中碱性或酸性杂质，以消耗酸或碱滴定液的毫升数作为限度指标。第七十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日例：检查氯化钠的酸碱度取本品5.0g，加水50ml溶解后，加溴麝香草酚蓝指示液2滴，如显黄色（示为酸性），加氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.10ml，应变为蓝色；如显蓝色或绿色（示为碱性），加盐酸滴定液（0.02mol/L）0.20ml，应变为黄色。第七十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日二）指示剂法原理：利用规定指示剂的变色pH范围控制供试液中酸碱杂质限量。例：纯化水的酸碱度检查取本品10ml，加甲基红指示液2滴，不得显色（控制酸度）；另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色（控制碱度），即纯化水酸碱度控制在pH4.2-7.6.第七十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日三）pH测定法采用电位法直接测定溶液的pH.,准确度高，用于注射液等的检查。第七十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日第三节特殊杂质检查特殊杂质——是指该药物的生产和贮存过程中，根据药物的性质、生产方法和工艺条件，有可能引入的杂质。例：阿司匹林中游离的水杨酸；肾上腺素中的酮体；硫酸阿托品中的莨菪碱等。第八十页，共一百二十四页，2022年，8月28日

药物中特殊杂质的检查，主要是根据药物和杂质在物理和化学性质上的差异来进行的，方法的专属性十分关键：物理法：嗅味、颜色、溶解行为化学法：酸碱差异、氧化还原、杂质与一定试剂产生沉淀（颜色、气体）等旋光法：比旋度、旋光度分光光度法：紫外、比色原子吸收、红外等色谱法：纸色谱、薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱第八十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日物理法1.嗅味及挥发性差异（杂质有特殊嗅味）例：乙醇中检查杂醇油，将乙醇滴在无嗅清洁的滤纸上，待乙醇自然挥发后，不应留有杂油醇异嗅；麻醉乙醚中检查异嗅：取本品10ml，置瓷蒸发器中，使自然挥发，挥散完毕，不得有异味第八十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日例如：黄凡士林中异性有机物检查：本品2.0g,直火加热无辛味。浓过氧化氢中不挥发性杂质检查：10ml水浴蒸干残渣＜15mg第八十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.颜色的差异（控制有色杂质）参照溶液颜色检查法。例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品2.0g，加NaOH试液10ml，加水25ml，与黄色3号比色液比，不得更深。第八十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日3.溶解行为差异（杂质和药物的可溶性不同）例，检查硫酸钡中的酸中溶解物：将供试品加稀盐酸与纯化水煮沸，滤除硫酸钡后，滤液蒸干，遗留残渣不得超过规定限量。例，磺胺嘧啶中原料2-氨基嘧啶等碱性杂质检查：利用磺胺嘧啶溶于碱，杂质不溶液碱，供试品加氢氧化钠后澄清为合格。第八十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日化学法1.酸碱性差异例：苯巴比妥中检查巴比妥酸：供试品加水煮沸，滤液加甲基橙指示液，不得显红色为合格。2.氧化还原性差异例：氯化钠中碘化物的检查：供试品中加淀粉混合液（硫酸、亚硝酸、淀粉）湿润，日光下观察，5分钟内不得显蓝色痕迹。第八十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日酸碱性的差异

1.规定消耗滴定液体积例如己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸检查：(NaOH0.02mol/L)

取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚蓝微蓝色＜0.50ml2.pH法例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸检查：0.01g/mlpH3.0～4.5.3.指示剂法

例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查：其水溶液不得使甲基橙显红色。第八十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日氧化还原性的差异例如：NaCl中I-和Br-检查EOCl/2Cl-=+1.3595V＞EOBr/2Br-=+1.065V

＞EOI/2I-=+0.5345V,因此+NaNO2+H2SO4+淀粉显蓝色

再例如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化生成水溶性绿色化合物。因此ChP规定：本品50mg+4mlH2O+1dI2+5ml乙醚乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。第八十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日3.杂质与一定试剂产生沉淀氯化钠中检查钡盐药物中草酸盐的检查4.杂质与一定试剂产生颜色5.杂质与一定试剂产生气体药物中微量硫化物：酸性条件下放出H2S气体，与醋酸铅试纸形成棕色硫斑，与标准硫斑比较。氰化物检查（改进普鲁士蓝法，气体扩散三硝基苯酚锂法）第八十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日杂质与一定试剂反应产生沉淀例一、间苯二酚中邻苯二酚检查：后者+Pb(Ac)2

白色∴ChP规定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸+0.5mlPb(Ac)2

不得发生混浊，即为合格。例二、硝酸毛果芸香碱中其他生物的检查：后者+氨水+K2Cr2O7∴ChP规定：本品0.2g+20mlH2O两份；I份+数滴氨试液；另

1份+数滴K2Cr2O7试液，均不得发生混浊。第九十页，共一百二十四页，2022年，8月28日杂质与一定试剂反应产生颜色例一、盐酸普萘洛尔中游离α-萘酚检查：利用后者可与重氮盐发生重氮化-偶合反应，生成偶氮染料。∴ChP规定：供试品20mg+乙醇与10%NaOH液各2ml+重氮苯磺酸试液1ml,放置3min；如显色，与0.3mlα-萘酚对照液（20μg/ml)比较不得更深。例二、碘他拉酸中氨基化合物的检查：利用重氮化-偶合反应∴ChP规定：供试品2.5mg/ml经重氮化-偶合反应后，在波长

485nm测得A＜0.25第九十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日杂质与一定试剂反应产生气体

ChP附录中收载氰化物的两种检查方法：第一法：改进普鲁士蓝法原理：CN-+酒石酸HCN[Fe(CN)6]4-Fe4[Fe(CN)6]第二法：气体扩散-三硝基苯酚锂法原理：HCN扩散进入三硝基苯酚锂试液，生成异红紫酸盐，在

500nm波长处测定吸收度。△Fe2+Fe3+第九十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日药物经有机破坏后检查杂质某些环状有机药物在生产中可能引入磷、硫、卤素及硒等杂质，这些杂质与有机分子中的碳原子以共价键结合，需进行有机破坏后检查，各国药典所采用的方法为氧瓶燃烧法。

第九十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日旋光法具有旋光活性的药物，测定旋光度或比旋度来控制杂质限量。例如：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4第九十四页，共一百二十四页，2022年，8月28日分光光度法由于药物和杂质的结构不同，对光吸收的性质就有差异，因此，利用杂质与药物对光选择性吸收的差异，检查药物所含杂质。一）紫外分光光度法二）比色法三）原子吸收分光光度法四）红外分光光度法第九十五页，共一百二十四页，2022年，8月28日一）紫外分光光度法原理：利用紫外分光光度法检查杂质限量，通常是采用检查杂质吸收度的方法。配制一定浓度的供试品溶液，选择在药品无吸收而杂质有吸收的波长处测定吸收度，规定测得得吸收度不得超过某一限制。第九十六页，共一百二十四页，2022年，8月28日地蒽酚（二羟基蒽醌）λ432nm地蒽酚基本无吸收二羟基蒽醌最大吸收规定：0.01%的供试溶液在432nm处的A≤0.12第九十七页，共一百二十四页，2022年，8月28日再如：苯丙醇中苯丙酮的检查：可利用供试液的吸收度比来控制杂质;纯品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%时A247nm/A258nm=0.79;

因此规定供试品A247nm/A258nm

＜0.79;即所含苯丙酮＜0.5%.第九十八页，共一百二十四页，2022年，8月28日二）比色法原理：对照法目视比色分光光度计测定吸收度后进行比较第九十九页，共一百二十四页，2022年，8月28日三）原子吸收分光光度法原理：是利用待测元素灯发出的特征谱线通过供试品蒸汽时，被蒸汽中待测元素的基态原子所吸收，通过测定辐射光强度减弱的程度可求出供试品中待测元素的含量。通常借比较标准品和供试品的吸收度，求得样品中待测元素的含量。第一百页，共一百二十四页，2022年，8月28日仪器——原子吸收分光光度计。光源：待测元素作为阴极的空心阴极灯原子化器：雾化器和燃烧灯构成，作用是产生原子蒸汽单色器：检测器：第一百零一页，共一百二十四页，2022年，8月28日特点：灵敏度高，专属性强，主要用于金属元素的测定。方法：取供试品按规定配制成供试液B；另取等量供试品，加入限量的待测元素溶液，制备成对照液A。先将A液喷入火焰，调节仪器使具有合适读数a；在相同条件下，喷入供试液B，记录读数b。b相当于供试品溶液中待测元素的含量，a-b相对于对照溶液中加按限量加入的待测元素的量。当b<(a-b)时，表示供试品中所含杂质元素符合规定，当b>（a-b）时，表示供试品中所含杂质元素超过限量，为不合格。第一百零二页，共一百二十四页，2022年，8月28日限量检查时：对照品液=供试品+限量-----a

供试品液=------------------b

符合规定时b＜(a-b);b＞(a-b)不合格。第一百零三页，共一百二十四页，2022年，8月28日例：肝素钠中检查钾盐：取本品0.10g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释置刻度，摇匀，即为供试品溶液B；另取标准氯化钾溶液5ml，置50ml量瓶中，加B溶液稀释至刻度线，摇匀，作为对照液A。在766.5nm波长处测定a和b，如果b<(a-b)则肝素钠中钾盐含量合格。供试液供试液+标准KCl原子吸收λ766.5nm测定ba则应b<a-b第一百零四页，共一百二十四页，2022年，8月28日四）红外分光光度法原理：某些多晶型药物由于晶型不同，某些化学键的键长、键角发生不同程度的变化，可导致红外吸收光谱中某些特征带频率，峰形和强度出现显著差异。第一百零五页，共一百二十四页，2022年，8月28日特点：主要用于药物中无效或低效晶型检查。例：无味氯霉素混悬剂中A晶型的检查、甲苯咪唑中A晶型检查第一百零六页，共一百二十四页，2022年，8月28日

A晶型C晶型在640cm-1有强吸收吸收很弱在662cm-1吸收很弱有强吸收

662cm-1640cm-1662cm-1640cm-1

对照品+10%A晶型D2D1

供试品D2D1＜10%R=D1/D2

＞R’=D’1/D’2甲苯咪唑中A晶型检查第一百零七页，共一百二十四页，2022年，8月28日色谱法色谱法可以利用药物与杂质的吸附或分配性质的差异，将它们分离、检测，因而广泛应用于药物的杂质检查中。色谱法检查特殊杂质的方法有：纸色谱法、薄层色谱法，高效液相色谱法，气相色谱法。第一百零八页，共一百二十四页，2022年，8月28日一）纸色谱法（纸层析法，PC)

常用于极性大的药物的分离、分析，如地高辛中的有关杂质的检查。第一百零九页，共一百二十四页，2022年，8月28日方法：取一定量的供试品溶液及杂质限量对照液，于同一色谱滤纸上点样，展开，处理后比较杂质斑点的个数、颜色或荧光强度等，从而判断供试品中所含杂质是否符合限量规定。第一百一十页，共一百二十四页，2022年，8月28日例：地高辛中检查洋地黄毒苷分别点加供试品溶液及洋地黄毒苷对照品溶液于同一色谱滤纸上，以新制的甲酰胺饱和的二甲苯-丁酮溶液上行展开，120℃烘干、放冷、喷新配制的三氯醋酸-氯仿溶液，再于100℃烘干后，在365nm紫外灯光下检视，供试品溶液所显斑点的荧光强度与对照液的斑点比较，不得更强。特点：纸色谱展开时间长，斑点较为扩散，应用不如TLC广泛。第一百一十一页，共一百二十四页，2022年，8月28日二）薄层色谱法在特殊杂质检查中应用很多，具有灵敏（ug）、简便、快速、不需特殊设备的优点。第一百一十二页，共一百二十四页，2022年，8月28日1.在一定供试品和检测条件下，不允许有杂质色斑，是利用显色剂对杂质的最小检出量控制其限量。（需要显示剂，不需要对照）例：马来酸噻吗洛尔中检查有关杂质取本品，加甲醇制成每ml含25mg的溶液，吸取上液5µl，点于硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-浓氨溶液为展开剂，展开后，晾干，在饱和的碘蒸气中显色，除主斑点外，不得显其他斑点。第一百一十三页，共一百二十四页，2022年，8月28日2.选用实际存在的杂质作为对照品（待检杂质是明确的，具备该杂质对照品）方法：取一定浓度已知杂质的对照液和供试液，分别点加在同一薄层板上，展开和定位后检查，供试品所含该杂质的斑点，