瘦肉精监测技术要点及注意事项

瘦肉精监测技术要点及注意事项2023/2/161第一页，共四十二页，2022年，8月28日瘦肉精？瘦肉精与兽医工作的关系？“瘦肉精”监管关键点控制2023/2/162第二页，共四十二页，2022年，8月28日“瘦肉精”??“瘦肉精”最初是盐酸克伦特罗的俗称

1964年由美国氰胺公司首次合成，作为一种治疗呼吸道疾病的药物。20世纪80年代初，美国研究人员意外发现盐酸克伦特罗可以促进动物机体蛋白质合成和肌肉组织生长，减少脂肪尤其是皮下脂肪的沉积，从而提高瘦肉率和饲料转化率。之后，美国开始将其用于畜禽养殖，并逐渐推广到世界其他国家，并于20世纪80年代末传入我国。2023/2/163第三页，共四十二页，2022年，8月28日盐酸克伦特罗专指泛指泛指养殖业非法使用的具有促进动物生长、提高瘦肉率的含β-肾上腺能受体激动剂类的一类物质2023/2/164第四页，共四十二页，2022年，8月28日我国禁止瘦肉精的种类第176号公告（二〇〇二年二月九日）第193号公告（二○○二年四月九日）第235号公告（二〇〇二年十二月二十四日）第1519号公告（二〇一〇年十二月二十七日）2023/2/165第五页，共四十二页，2022年，8月28日第176号公告：盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林第193号公告：克仑特罗、沙丁胺醇、西马特罗及其盐、酯及制剂第235号公告克仑特罗、沙丁胺醇、西马特罗及其盐、酯及制剂2023/2/166第六页，共四十二页，2022年，8月28日第1519号公告

苯乙醇胺A、班布特罗、盐酸齐帕特罗、盐酸氯丙那林、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、酒石酸阿福特罗、富马酸福莫特罗、盐酸可乐定、盐酸赛庚啶2023/2/167第七页，共四十二页，2022年，8月28日2023/2/168第八页，共四十二页，2022年，8月28日其他赛庚啶：抗组胺药物，H1受体拮抗剂，也是5-羟色胺受体拮抗剂，可在下丘脑食欲中枢拮抗5-羟色胺，具有刺激食欲的功能，以达到促进动物增重的作用。可乐定：一种抗高血压药物，肾上腺素能α2-受体激动剂，通过促进下丘脑生长腺素神经元合成和释放生长腺素，从而调控生长激素的分泌，从而促进动物生长。2023/2/169第九页，共四十二页，2022年，8月28日瘦肉精与兽医工作？？兽医工作的主要内容？动物卫生监督工作的主要内容？2023/2/1610第十页，共四十二页，2022年，8月28日OIE世界动物卫生组织-向各国政府通告全世界范围内发生的动物疫情以及疫情的起因，并通告控制这些疾病的方法。-在全球范围内，就动物疾病的监测和控制进行国际研究。-协调各成员国在动物和动物产品贸易方面的法规和标准。保证动物及其产品的国际贸易卫生安全2023/2/1611第十一页，共四十二页，2022年，8月28日OIE发展的新趋势近几年来，增加了动物福利、抗生素耐药性监测、食品安全的内容专门成立了食品安全工作组加强了与FAO、WHO、CAC等国际组织在有关动物产品质量安全安全方面的合作2023/2/1612第十二页，共四十二页，2022年，8月28日我国新时期对兽医工作的定位：

“以有效控制动物疫病和保障动物产品质量安全为目标，着力推动实现动物疫病从有效控制到逐步根除的质的跨越，着力推动实行动物产品质量安全全过程监管……确保动物产品生产供应安全、动物产品质量安全和公共卫生安全，……”（全国兽医事业发展十二五规划）2023/2/1613第十三页，共四十二页，2022年，8月28日兽医工作动物产品供给动物产品安全公共卫生安全动物卫生监督机构目标动物防疫法农产品质量安全法食品安全法2023/2/1614第十四页，共四十二页，2022年，8月28日中央编办发【2010】105号“农业部牵头负责“瘦肉精”监管工作，负责生猪养殖、收购、贩运、定点屠宰环节对“瘦肉精”的检验、认定和查处……”国务院食安办印发了《“瘦肉精”专项整治方案》食安办【2011】14号开展了“瘦肉精”源头整治、养殖环节、收购贩运环节、屠宰环节等7个环节的整治工作2023/2/1615第十五页，共四十二页，2022年，8月28日农业部文件农业部关于深入推进“瘦肉精”专项整治工作的意见（农牧发【2011】12号）农业部关于加强生猪定点屠宰环节“瘦肉精”监管工作的通知（农医发【2011】18号）

进一步明确了畜牧兽医主管部门对“瘦肉精”的监管职责2023/2/1616第十六页，共四十二页，2022年，8月28日如何做好“瘦肉精”监管工作？依法、合法工作到位，不出位、不越位检测监督抽检立案查处科学的检测结果是正确执法办案的前提2023/2/1617第十七页，共四十二页，2022年，8月28日“瘦肉精”监督抽检可靠检测试剂适宜的场所科学的检测流程样品的抽取现场筛选阳性确证正确的抽样方式具有资质的检测机构移送公安机关2023/2/1618第十八页，共四十二页，2022年，8月28日样品抽检养殖环节？贩运环节？屠宰环节？2023/2/1619第十九页，共四十二页，2022年，8月28日《农产品质量安全监测管理办法》2012年明确规定：第二十一条：抽样人员在抽样前应当向被抽样人出示执法证件或工作证件。具有执法证件的抽样人员不得少于2名。抽样人员应准确、客观、完整填写抽样单。加盖抽样单位印章，并由抽样人员或被抽查人签字或捺印；被抽查人为单位的，应加盖被抽查人印章或由其工作人员签字或捺印。2023/2/1620第二十页，共四十二页，2022年，8月28日农医发【2011】18号样品抽样方法：《猪肉、猪肝、猪尿抽样方法》NY/T763-2004检测方法、限量标准、确证方法按照国家和农业部有关规定阳性样品的确证：由省级兽药监察机构、农产品质量安全检测机构或省级畜牧兽医主管部门指定的有资质的检测机构承担2023/2/1621第二十一页，共四十二页，2022年，8月28日胶体金检测试纸条ELISA试剂盒液质联用仪气质联用仪“瘦肉精”检测

筛选确证第二十二页，共四十二页，2022年，8月28日检测方法灵敏度检测时间保存条件测试对象技术要求假阳性率检测成本其他胶体金试纸条2-5μg/kg5-10min4-30℃尿样、组织操作简便较高低

酶联免疫试剂盒0.05-0.2μg/kg1.5-2h2-8℃尿样、血清、组织、饲料等操作相对复杂、需简单培训较低较低

气相色谱-质谱联用法0.5μg/kg1天—全部样品需系统知识、技术培训确证方法高需衍生化液相色谱-质谱联用法0.05μg/kg1天—全部样品需系统知识、技术培训确证方法高不需衍生化2023/2/1623第二十三页，共四十二页，2022年，8月28日标准文号公告名称1SN/T1924-2007

进出口动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测液相色谱-质谱/质谱法2农业部公告[2007]958号

动物源食品中莱克多巴胺残留量的测定高效液相色谱法-质谱法3农业部公告[2007]958号动物组织及动物尿液中莱克多巴胺残留检测方法气相色谱-质谱法4农业部公告[2008]1025号

动物性食品中莱克多巴胺残留检测酶联免疫吸附法5农业部公告[2008]1025号猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱－串联质谱法6农业部公告[2008]1025号动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱－串联质谱法7农业部公告[2008]1031号猪肝和猪尿中β-受体激动剂残留检测气相色谱－质谱法8农业部公告[2008]1063号动物尿液中11种β—受体激动剂的检测液相色谱——串联质谱法9农业部公告[2008]1063号饲料中13种β—受体激动剂的检测液相色谱——串联质谱法10农业部公告[2008]1063号饲料中8种β—受体激动剂的监测气相色谱——质谱法11农业部公告[2010]1486号饲料中苯乙醇胺A的测定

高效液相色谱-串联质谱法12GB/T5009.192-2003动物源食品中克伦特罗残留量的测定13GB21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱质谱法14GB-T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法15GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法16NY/T468-2006

动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱-质谱法2023/2/1624第二十四页，共四十二页，2022年，8月28日农业部审查、备案制度自2005年10月起，农业部对快速筛选试剂盒、胶体金试纸条实行了审查、备案制度，对符合相关规定的酶联免疫检测试剂盒、胶体金试纸条准予备案，允许生产和用于全国兽药残留监控计划的检测。（农业部公告第558号）快速筛选检测试剂2023/2/1625第二十五页，共四十二页，2022年，8月28日农业部公告号公告名称网址第1483号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/201012/t20101207_34910.htm第1432号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/201008/t20100813_34263.htm第1387号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/201006/t20100604_34026.htm第1344号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/201003/t20100312_33628.htm第1260号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/200910/t20091025_32982.htm第1172号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/200903/t20090313_31938.htm第1098号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/200812/t20081209_30729.htm第1044号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/200812/t20081209_30761.htm第964号兽药残留检测试剂盒备案目录/gg/200812/t20081209_30801.htm第797号关于克伦特罗酶联免疫试剂盒质量标准等/gg/200812/t20081209_30866.htm第558号关于准予克仑特罗等14种酶联免疫检测试剂盒备案的公告/gg/200812/t20081209_30972.htm农业部有关兽药残留检测试剂盒备案的相关规定2023/2/1626第二十六页，共四十二页，2022年，8月28日如何筛选出符合要求的检测试剂？第二十七页，共四十二页，2022年，8月28日胶体金试纸条筛选考核指标：

灵敏度重复性稳定性交叉反应性假阴性率假阳性率与液相色谱质谱联用仪比较第二十八页，共四十二页，2022年，8月28日胶体金试纸条保存条件

室温（25℃左右最好），不宜暴晒和冷藏、冷冻测试过程试纸条从包装撕开取出后，请尽快测试，时间不宜过长，一般应在1h内检测完成；滴加尿液并非越多越好，实际滴加量请按说明书执行，一般以100µL为宜；加样后一般观察时间为5~10min。第二十九页，共四十二页，2022年，8月28日结果判定

阳性：C线显色，T线不出现红色条带，判为阳性阴性：C线显色，T线出现红色条带，判为阴性无效：C线不显色，判为无效第三十页，共四十二页，2022年，8月28日第三十一页，共四十二页，2022年，8月28日1.空白样品2.标准溶液克伦特罗，纯度为98.5%莱克多巴胺，纯度为97.0%沙丁胺醇，纯度为99.5%3.标准溶液配置均购自德国Dr.E公司标准品

称取适量标准品分别于10mL棕色容量瓶中，甲醇定容，稀释成1000µg/mL的标准储备液。

分别吸取适量标准储备液至100ml容量瓶中，用纯水定容，稀释成200µg/L，放于4℃冰箱中保存备用。生猪屠宰场采集并经LC-MS/MS法检测为不含待测物的空白猪尿。-20℃保存备用第三十二页，共四十二页，2022年，8月28日序号测试药物测试药物浓度（µg/L）1盐酸克伦特罗0，2，3，5，8，10，152莱克多巴胺0，3，5，8，10，15，203沙丁胺醇0，4，5，8，10，15，20根据试纸条所标注的灵敏度及预实验结果，每种试纸条选择7个浓度（n=6）进行敏感性和重复性测试，并进行批内重复试验（n=3）和批间重复试验（n=3）各检测试纸条灵敏度、重复性测试浓度灵敏度、重复性测定第三十三页，共四十二页，2022年，8月28日2023/2/1634第三十四页，共四十二页，2022年，8月28日稳定性2-8℃和室温保存性试验37℃和-20℃老化试验

将待测的3类胶体金检测试纸条在60℃的烘箱中保存（根据报道，胶体金免疫检测试纸条60℃条件下保存一天，相当于常温保存一个半月，以此类推。），分别于第2、4、8天后取出（分别相当于常温保存3、9、12个月），选择不同浓度的猪尿添加样品进行试验（n≥6）。第三十五页，共四十二页，2022年，8月28日试纸条种类测试药物浓度（µg/L）盐酸克伦特罗莱克多巴胺沙丁胺醇盐酸克伦特罗―20、5020、50莱克多巴胺20、50―20、50沙丁胺醇20、5020、50―选择两个浓度的含结构相似物的猪尿添加样品进行试验（n=7），各厂家的三种检测试纸条具体选择猪尿添加样品及浓度如下表，判断检测试纸条的特异性。检测试纸条特异性测试浓度特异性测定（交叉反应实验）D公司该产品与克伦特罗有“强”交叉反应高度特异，不与其他两种结构相似的“瘦肉精”发生交叉反应假阳性第三十六页，共四十二页，2022年，8月