药物分析芳酸及其酯类

⊙苯甲酸类羟苯乙酯ethylparoben丙磺舒probenecid苯甲酸benzoicacid甲芬那酸mefenamicacidsodiumbenzoate第1页/共49页第一页，共50页。⊙其他芳酸类氯贝丁酯clofibrate布洛芬ibuprofen第2页/共49页第二页，共50页。⊙特点均有苯环、羧酸或其酯水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连除了酸性基团外，各自具有本身的官能团分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的酸性强度各有不同第3页/共49页第三页，共50页。紫堇色赭色↓米黄色↓pH5.0~6.0T.S.FeCl3pH4~6中性溶液鉴别三氯化铁反应第4页/共49页第四页，共50页。碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游离白色第5页/共49页第五页，共50页。布洛芬第6页/共49页第六页，共50页。⊙重氮化偶合反应具体方法见芳香胺类药物的鉴别⊙氧化反应⊙异羟肟酸铁反应甲芬那酸＋H2SO4

深蓝色△黄色并产生绿色荧光随即变为棕绿色第7页/共49页第七页，共50页。Fe/3紫色第8页/共49页第八页，共50页。⊙水解产物的反应⊙分解产物的反应⊙UV特征吸收⊙IR吸收光谱第9页/共49页第九页，共50页。特殊杂质的由来与方法检查AcetylSalicylicAcid副产物SAASA⊙Aspirin生产工艺第10页/共49页第十页，共50页。SA溶液的澄清度

酚类和酯类其他副反应产生酯类第11页/共49页第十一页，共50页。易碳化物炽灼残渣重金属第12页/共49页第十二页，共50页。⊙PAS-Na间氨基酚Ch.P

样品3.0g用乙醚提取，加入H2O，用HCl滴定液（0.02mol/L)滴定，生成杂质·HCl（转溶入H2O相，甲基橙指示剂）。滴定液不得过0.30mlUSPHPLC法

C18NaH2PO4(0.05mol/L)-Na2HPO4(0.05mol/L)-CH3OH(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425：425：150)

254nm检测内标：磺胺

第13页/共49页第十三页，共50页。

⊙羟苯乙酯供试品自身对照法BP（1998）反相TLC高低浓度对比法取羟苯乙酯丙酮液1.0%和0.01%，2ul，254nm查荧光，前一个任何第二个斑点的大小和强度不应超过后一个。第14页/共49页第十四页，共50页。a.杂质对照品法

方法：供试品→供试品溶液杂质对照品→对照品溶液

第15页/共49页第十五页，共50页。供试品对照品第16页/共49页第十六页，共50页。

判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。缺点：需要杂质对照品。

第17页/共49页第十七页，共50页。

b.高低浓度对比法

方法：

第18页/共49页第十八页，共50页。供试品对照品第19页/共49页第十九页，共50页。

判断：

②供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）

①控制杂质斑点个数，控制杂质种类第20页/共49页第二十页，共50页。⊙氯贝丁酯对氯酚（0.0025%）挥发性杂质（0.5%）GC法5%SE-302m

160℃，

N2

FID

杂质以归一化法求得第21页/共49页第二十一页，共50页。含量测定⊙酸碱滴定法

Acid-basetitrationmethod

以ASA及其制剂为例苯甲酸pKa4.20

水杨酸pKa2.98酸性较强羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；并有氢键，更增加了其极性因此，可采取直接滴定法第22页/共49页第二十二页，共50页。直接滴定法

pKa3~6

的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa6~9

的药物要用非水溶液滴定法中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定过程易水解本法特点：简单注意点：若SA不合格，不宜采用本法Aspirin丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法第23页/共49页第二十三页，共50页。水解后剩余滴定法

ResidualtitrationafterhydrolysisUSP23方法：取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4第24页/共49页第二十四页，共50页。

剩余滴定时消耗酸量

V(ml)同时做空白试验，消耗酸量V0(ml)Ch.P00羟苯乙酯的Assay亦采用bBaA第25页/共49页第二十五页，共50页。反应物质之间的化学计量关系aA+bBcC+dD被测物滴定液毫摩尔数第26页/共49页第二十六页，共50页。☆滴定度计算0.5规定的硫酸浓度为0.25mol/LT毫摩尔质量第27页/共49页第二十七页，共50页。两步滴定法

Two-steptitration用于Aspirin片测定片剂中有稳定剂水解产物水杨酸SAHAc枸橼酸Citricacid酒石酸Trataricacid为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法第28页/共49页第二十八页，共50页。Ch.P.阿司匹林片

取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4第29页/共49页第二十九页，共50页。第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步放冷后，用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOHV；

空白滴定消耗H2SO4

V0；(V0-V)

H2SO4则为用于中和水解ASA所需的

NaOH第30页/共49页第三十页，共50页。☆计算：称取10片重1.8240gCNaOH0.1032mol/L片粉重0.5312gC0.05120mol/L标示量0.1g

V3.02ml

V020.18ml第31页/共49页第三十一页，共50页。

直接水解后两步

滴定法剩余滴定法滴定法

优点

操作简便水杨酸干扰少

结果准确，避免了游离

SA以及片剂中稳定剂的干扰缺点游离水杨酸不能完全不合格时结排除干扰果偏高Ch.P氯贝丁酯的Assay采用两步滴定法第32页/共49页第三十二页，共50页。⊙双相滴定法

Titrimetryintwophases

Ch.P2005用于苯甲酸钠的测定

苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法第33页/共49页第三十三页，共50页。HCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸钠)0.5mol/L25ml1.5g50ml2d甲基橙

橙红色分出H2O层，置具塞锥形瓶，乙醚层用H2O5ml洗涤，洗液并入锥形瓶，加乙醚20ml，继续用HCl滴定，至水层显持续的橙红色第34页/共49页第三十四页，共50页。⊙柱分配色谱-紫外分光光度法

ColumnPartitionChromatogr.

ASAcapsule

等制剂除用上述两步滴定法外，最好用色谱法，可以分离酸性杂质和辅料以及稳定剂等，经分离后同时测定ASA与SA

如USP用柱分配色谱-UV测定ASACapsule第35页/共49页第三十五页，共50页。ColumnPartitionChromatography,CPC担体：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机溶剂

(洗脱前必须先用水饱和)200~300mm60mm4mm22mm层析柱玻棉压榨棒350mm21mm第36页/共49页第三十六页，共50页。CPC-UV法测定ASACapsule

SA测定供试液制备用CHCl350ml洗涤，弃去(洗去ASA)10ml冰HAc-水饱和乙醚液(1→10)(使紫色配位化合物被分解，SA析出)洗脱液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl的50ml量瓶中，继用30mlCHCl3洗，并稀释至刻度SA对照品溶液：75µg/ml，取10ml

50ml量瓶中盛有：

10ml甲醇，2滴HCl和10ml冰HAc-水饱和乙醚液(1→10)，CHCl3至刻度第37页/共49页第三十七页，共50页。测定：306nm测定供试液和SA对照品液﹡SA与试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，在柱上移动慢，带窄，色泽较深﹡﹡若有Fe3+洗下，黄色影响测定结果

消除干扰方法：迂底部拌有磷酸的硅藻土，生成不溶解的FePO4↓A供试液＜A对照品液L=75(µg/ml)×10m100mg×1000×100%＝0.75%第38页/共49页第三十八页，共50页。ASA+SA测定供试液制备洗脱

5,25mlCHCl3

，弃去CHCl3洗脱

10ml冰HAc-CHCl3(1→10)**；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀释至100ml对照品溶液50µg/ml

冰HAc-CHCl3(1→100)CPC-UV法测定ASACapsule

第39页/共49页第三十九页，共50页。测定：280nm空白：CHCl3

﹡NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上

用CHCl3洗脱的目的：

去除中性或碱性杂质﹡﹡冰HAc酸化的目的：

使ASA游离，易被

CHCl3洗脱第40页/共49页第四十页，共50页。含量测定计算公式所取胶囊细粉中ASA(mg)供试品溶液吸收度对照品溶液吸收度第41页/共49页第四十一页，共50页。CPC技术的类型利用固定相酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离第42页/共49页第四十二页，共50页。阿司匹林栓Aspirinsuppositories测定法咖啡因乙醇溶液4mg/ml对照品溶液：ASA对照品(约0.15g)50.0ml内标5.0ml供试品溶液：取本品5粒，精密称定()，40~50℃微温熔融，不断搅拌下冷却至室温，精密称取适量(ASA约0.15g)(W)内标5.0ml50.0ml乙醇50.0ml2.0ml↓2.0ml乙醇50.0ml⊙HPLC第43页/共49页第四十三页，共50页。血清中ASA&SA的测定

色谱条件C18

5μm150×4.6mm

甲醇-水-正丁醇(30:20:1)

经0.5μm滤膜减压过滤后5μlH3PO4

超声脱气

237nm内标：苯甲酸血清样品的处理血清样品100μl→加入HClO4(30%)50μl、不同