在液相色谱实验中常见问题以及解决办法_第1页
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文档简介

常见问题-基线漂移/噪音-峰型-保留漂移第1页/共12页第一页，共13页。基线噪音可能的原因：流通池脏检测器灯有问题如果是周期性的，则起源于泵的脉冲温度对检测器的影响有气泡经过检测器Time(min.)第2页/共12页第二页，共13页。基线漂移梯度洗脱流动相中有污染物柱中的流动相没有平衡好体系中有污染物流出可能的原因：第3页/共12页第三页，共13页。鬼峰色谱图上出现的未知的色谱峰，我们称之为“鬼峰”。

出现这种现象的原因包括：1、流动相中的杂质或是流动相中各组分不互溶；2、上一次进样的未流出的组份。3、样品中的未知组份。第4页/共12页第四页，共13页。双峰正常峰双峰可能原因：1、柱中有死体积2、过滤片部分堵塞3、只有一个双峰——组分的共洗脱4、样品与溶剂不匹配第5页/共12页第五页，共13页。峰展宽所有的峰都展宽柱效降低——柱死体积进样量过大，柱子超载流动相粘度过大部分峰展宽前次进样后流出的组分大分子量样品——蛋白或聚合物样品与流动相不匹配第6页/共12页第六页，共13页。拖尾峰NormalTailingNormalTailing原因：部分峰拖尾二次保留效应——残留硅醇基的反应小峰紧跟在大峰的后面流出柱头有污染所有峰拖尾额外的柱效应柱损坏不适当的样品量/溶剂第7页/共12页第七页，共13页。前伸峰NormalFronting可能的原因柱过载在大峰前，有小峰流出样品溶剂不适当柱死体积过滤片部分堵塞第8页/共12页第八页，共13页。I.所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物）-键合相流失-流动相不稳定(可能性较小)-溶剂输送系统(流速变化)II.所有峰都向高保留值方向漂移-在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少-

柱改变(可能性较小)-溶剂输送系统(流速变化)III.离子型化合物的色谱峰的保留值漂移-流动相中挥发性组分损失(离子强度,pH漂移)-

柱改变(键合相或污染)保留值漂移第9页/共12页第九页，共13页。I.与流动相有关的问题-使用新鲜的流动相

?pH ?电导

?色谱性能测试II.与色谱柱有关的问题-测试新柱-

用标准的测试混合样测试新柱-“清洗”色谱柱后再测-考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响保留值漂移第10页/共12页第十页，共13页。

总结如果使用时加以注意，大部分的液相色谱柱的问题是可以预防的

-柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；流动相必须是互溶的，无颗粒要注意流动相的脱气；-使用保护柱和在线过滤器，并定期更换-使用恰当的样品制备方法-使用恰当的色谱柱清洗程序-不同类型的色谱柱，请选择不同的操作条件色谱柱需保存在有机溶剂中(乙腈，甲醇)尽量避免使用高粘度的溶剂作为流动相第11页/共12页第十一页，共13页。谢谢您的观看！第12页/共12页第十二页，共13页。内容总结常见问题。1、流动相中的杂质或是流动相中各组分不互溶。3、只有一个双峰——组分的共洗脱。柱效降低——柱死体积。大分子量样品——蛋白或聚合物。二次保留效应——残留硅醇基的反应。-在水/有机溶剂的混合体系中，有机

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