rnai用于基因功能的鉴定和确证课件

RNAi(shRNA/miRNA)用于基因功能的鉴定和确证FulenGenGainoffunctionORFexpressionclonesTansfection/TransductionLossoffunctionshRNA/miRNAChemicalgeneticsInhibitorsandactivatorsofbiologicalprocessAutomatedread-outmechanismTherapeuticstrategycellFulenGenGeneFunctionScreeningMechanismofRNAi(shRNA/miRNA)FulenGenshRNA的设计与构建shRNA的验证miRNA的克隆与检测miRNA靶标的确证基因沉默后的功能拯救FulenGenFulenGen保证高表达抑制效率和最低的脱靶效应；慢病毒载体和以哺乳动物细胞表达载体；序列已经过测序；每个基因提供4个克隆，至少有1抑制水平达到70%以上提供包含不规则序列的阴性对照克隆来比较研究。OmicsLink™shRNA表达克隆FulenGen经过验证的人类激酶组shRNA表达克隆

350个人类激酶基因的确证shRNA表达克隆表达抑制效应都经过验证，达70％以上

低的脱靶效应。FulenGenshRNA克隆用于信号通路研究ExonicNon-codingMicroRNAs由RNAPolymeraseII转录IntronicNon-codingandcodingLee,etal.,EMBOJ.23:4051-602004/~-OHmatureandprimarymicroRNA的结构Pri-miRNADroshaCleavagesiteMatureVector-BasedmicroRNAExpressionClonesPromoter5’miRflank3’miRflankPre-miRTerFulenGenOmicsLink™HumanPrecursormiRNAExpressionClonespEZ-MR02650种前体miRNA表达克隆涵盖了miRBase（11.0版本）中已知的678种miRNA的95%miRNA表达框已完全测序确证基于慢病毒载体系统的表达克隆可转染未分化细胞和难转化的细胞，获得与普通分化细胞类似的转染效率提供被转染细胞的存活性的筛选基因，可用于稳定或瞬时表达调控通过应用eGFP可以监测病毒和质粒载体的转染效率FulenGenmicroRNA

肿瘤发生

miR-9

神经母细胞瘤miR-10b乳腺癌miR-15、miR-15a白血病、垂体腺瘤

miR-16、miR-16-1

白血病、垂体腺瘤

miR-17-5p、miR-17-92肺癌、淋巴瘤miR-20a肺癌、淋巴瘤miR-21乳腺癌、胆管腺癌、头颈癌、白血病、宫颈癌miR-29、miR-29b白血病，胆管腺癌miR-31结肠直肠癌miR-34a胰腺癌

miR-96结肠直肠癌miR-98头颈癌

miR-103胰腺癌miR-107

白血病、胰腺癌

miR-125a、miR-125b神经母细胞瘤、乳腺癌miR-128胶质母细胞瘤miR-133b结肠直肠癌miR-135b结肠直肠癌miR-143结肠癌、宫颈癌miR-145乳腺癌、结肠直肠癌miR-146甲状腺癌miR-155乳腺癌、白血病、胰腺癌miR-181、miR-181a、miR-181b、miR-181c肺癌、白血病、胶质母细胞瘤、甲状腺癌

miR-183直肠结肠癌miR-184

神经母细胞瘤miR-196a-2

胰腺癌miR-221胶质母细胞瘤、甲状腺癌、胰腺癌

miR-222甲状腺癌miR-223

白血病miR-301胰腺癌miR-376

胰腺癌let-7、let-7a、let-7a-1、hsa-let-7a-2、let-7a-3肺癌、结肠癌miRNA与肿瘤miRNA的检测和定量检测方法

NothernblotMicroarrayQuantitativeReal-timePCR检测对象Primary-miRNAPre-miRNAMaturemiRNAFulenGenqPCR检测miRNA的特异性qPCR检测miRNA的特异性miRNA

Target的分析研究发现，在哺乳动物中，miRNAs的基因抑制作用是通过其5’一段长为6－8nt的核苷酸与mRNAs3’端非翻译区域相结合实现的。一般这段核苷酸位于miRNA序列5’的2~8个nt，被称为seed区。2007年，美国约翰·霍普金斯大学发现miR-29b5’的6个核苷酸与该miRNA的细胞定位有关。FulenGenmiRNA5’的seed区域在miRNA家族中具有很高的保守性，对脊椎动物的miRNAtarget的识别具有重要的作用，尤其是第2-8个碱基。FulenGenRenillaLuciferasedataFireflyLuciferasedatamiRNA的编辑及其靶标的变化seedelment：

A

ImiR376a-5p经过编辑后，其靶标的变化FulenGenOmicsLink™HumanmiRNATargetSequence(3’UTR)ExpressionClonesSV40hLucRLucCMVpolyApolyApUCoriKan/Neo3’UTRSV40GLucsAPCMVpolyApolyApUCoriKan/Neo3’UTRpEZX-MT01pEZX-MT02FulenGenGaussialuciferaseexpressioninCHOcellsFulenGen构建克隆转染细胞分泌表达Luciferase取上清加入底物读取荧光值FulenGenmiRNADeliverintocell,tissueoranimalRestorethesilencegenefunctionmRNA

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