大三上课程内容-诊断学甲2013实验

实验诊断学实验2浙江大学医学院附属第一医院杨大干内容1.白细胞分类计数*2.尿蛋白定性试验（加热醋酸法）*3.尿糖定性试验（班氏糖还原试验）*4.尿液镜检*5.脑脊液蛋白质定性试验（潘氏试验）示教6.浆膜粘蛋白定性试验（Rivalta试验）示教7.瑞氏染色方法1.取1滴血于洁净的玻片上推制成长约3~4cm的薄血片，要求头、体、尾清晰可见。

2.室温中自然干燥.3.瑞氏染色：加染液A3-5滴于血膜上，待覆盖全部血膜后30秒，加染液B3-5滴，30秒后用水冲洗干净待干。

4.选择体尾交界的区域，用油镜计数100个白细胞，根据形态特征分类并计算出百分比。(保留好玻片，下节实验课做)大小约6-9um,双面微凹，染粉红色，中央有小淡染区，无细胞核，溶贫、白血病、MDS、骨纤或缺铁贫、巨幼贫治疗期会出现幼红细胞。1.白细胞分类计数1为嗜中性分叶核，细胞胞体圆形，约10-13um，胞质丰富，染粉红色，含较多细小均匀的淡粉红色中性颗粒，核2-3叶居多，核间核丝相连。2为杆状核核呈弯曲杆状1.白细胞分类计数1.白细胞分类计数1.白细胞分类计数1为嗜中性杆状核2为嗜酸性分叶核，细胞胞体圆形，一般分两叶，约13-15um，胞质内充满粗大的橘黄色颗粒。1.白细胞分类计数嗜碱性粒细胞，细胞胞体圆形，约10-12um，胞质紫红色，内有少量粗大但大小不均的黑色嗜碱性颗粒，常覆盖于核上。1.白细胞分类计数淋巴细胞，可分为大淋巴和小淋巴，前者直径10-15um，圆形，胞浆丰富，内含少量嗜天青颗粒。后者直径6-10um，胞体呈圆形，胞浆量少，染色质较固缩。1.白细胞分类计数1为单核细胞，胞体大，直径14-20um，圆形或不规则形，胞质较多，灰兰色，胞核大，核形不规则。2为嗜中性分叶核粒细胞。1.白细胞分类计数根据细胞大小、核形、胞浆颜色、颗粒特点等特征进行分类2.尿液分析方法学和检测方法的类别物理检查颜色、浊度、比重

化学成分粗筛葡萄糖（GLU）、蛋白质（PRO）、胆红素（BIL）尿胆原（URO）、PH、红细胞（BLD）、酮体（KET）亚硝酸盐（NIT）和白细胞（LEU）有形成分细筛有形成份（颗粒），如：上皮细胞、血细胞结晶、管型、细菌、精子、粘液等

目视或自动分析外观,颜色,浊度折射率仪,渗透压仪尿干化学分析仪(手工,半自动或全自动)尿流式分析仪显微镜检查和染色技术RBC、WBC、EC、CAST、BACT、P-CAST、SRC、YLC、CRYSTAL、SPERM、MUCUS、COND.红细胞形态学信息、尿电导率分级、UTI信息UF-1000i半导体激光流式细胞/核酸荧光染色技术全新DNA/RNA染色细胞分析)草酸钙结晶最常见的形状是八面体形状。这些结晶可在健康个体的酸性和中性的尿液中发现。在病理学上，草酸钙可在严重的慢性肾病中发现。结晶–草酸钙结晶(CAOX)IQ200报告结果画面2.尿液标本采集方法2.尿液测定湿化学法--尿蛋白定性检查

加热醋酸法（灵敏度5~10mg/dl）

原理加热使蛋白质变性凝固，加稀醋酸使PH下降，约达到蛋白质等电点（PH4.7左右），有利于蛋白质沉淀。加酸还可以消除因尿液受热而出现的磷酸盐结晶等。试剂5﹪醋酸：冰醋酸5ml，加蒸馏水至100ml方法

1.取试管1支，加清晰尿液至试管的2/3处。2.夹住试管下部，使试管倾斜，用酒精灯在尿液的上1/3处，逐渐加热至煮沸。3.在尿液中滴加5％醋酸2～3滴，观察结果。【判断】：（1）：煮沸、加酸后尿液仍清晰透明者为阴性反应。（2）：煮沸后产生混浊，加酸后混浊消失而不生气泡者为磷酸盐。（3）：煮沸后产生混浊，加酸后混浊消失并有气泡生成者为碳酸盐。（4）：加酸后混浊反而增加，表示尿内含热凝固性蛋白（白蛋白，球蛋白）。根据混浊程度，按下表判断标准报告结果。

煮沸醋酸结果判断标准定性结果煮沸所见蛋白约含量（g/dl）

－仍清晰，浊度不增加无

±仅在黑色背景下，有轻微混浊极微量

+白色混浊，无颗粒及絮状沉淀0.01～0.05

++有明显白色颗粒状混浊，但无絮状沉淀0.05～0.2

+++大量絮片状混浊，一般不见出现凝快0.2～0.5

++++出现块状凝固，并有大量絮片状沉淀＞0.5【参考值】阴性【注意事项】1.醋酸加的过多，PH低于蛋白质的等电点时，已经沉淀的蛋白质又可溶解，可使阳性减弱或呈假阴性。因此醋酸用量要控制在2～3滴（约50~100ul）之内。2.不要在试管下部加热，以便用下部尿液作对比。3.如尿液中电解质含量太低（如限制食盐的病人）时，因缺乏盐析作用，在煮沸时蛋白质部易生成沉淀，遇此情况须先加相当于尿量1/6量的饱和盐水溶液，混匀后再作检查。4.应在煮沸加酸后，立即观察结果，延长时间会影响结果的判断。【原理】葡萄糖醛基在碱性环境中加热，能使二价硫酸铜还原为一价氧化亚铜，出现黄至砖红色沉淀物。【试剂】班氏试剂3.尿糖定性试验--班（Benedict）氏法（灵敏度100mg/dl）【操作】:取班氏试剂约2ml至一中试管中,煮沸。加尿液0.2ml（比例约10：1）,直接在火焰上或沸水中煮2分钟。【判断】:如尿中有糖,则因糖量的不同,试剂由蓝色变为黄绿色,直至砖红色,可根据颜色判定结果.或在放冷后,根据沉淀的程度按下述标准判定结果糖定性结果判断表

反应表现符号大致糖量(g/dl)仍呈蓝色－冷却后有少量微绿色沉淀±煮沸2分钟有少量绿黄色沉淀(以绿色为主)+<0.5煮沸1分钟即有较多黄绿色沉淀（以黄为主)++0.5～1煮沸15秒,显土黄色沉淀+++1～2开始沸腾即显棕红色沉淀++++>2

尿沉渣检查是用显微镜或仪器对尿沉淀物进行检查，以识别尿液中各种细胞，各类管型，粘液丝，结晶，细菌，寄生虫等各种病理成分，是重要的常规检验项目。这些有形成分的识别对泌尿系统疾病的诊断、病情观察、判断预后有重要意义。

4.尿沉渣镜检尿沉渣检验的操作步骤标本收集随机尿

门诊、急诊标本过筛试验晨尿

尿常规检查(特别是对蛋白、细菌、细胞及管型检查)离心离心管中倒入充分混均的尿液10ml，2000转，离心5分钟。离心后倾倒上清液，留0.2ml镜检。镜检充分混匀标本，取1滴（约50ul），均匀置于玻片上用低倍镜（10×10）观察全片，再用高倍镜（10×40）仔细观察并计数各类细胞在10个视野内的最低和最高数目。在某些生理或病理情况下，沉渣尿中主要有以下几种有形成分，现介绍如下：尿中红细胞增多见于：a.肾病包括急、慢性肾小球肾炎、肾盂肾炎、狼仓性肾炎、肾肿瘤、肾结石、肾盂积水、多囊肾等b.下尿道疾病包括急、慢性感染，尿道狭窄、肿瘤、结石c.肾外疾病，如急、慢性胰腺炎、亚急性细菌性心内膜炎、白血病等d.磺胺药物、水杨酸药物引起的中毒反映活体正常红细胞经阿利新兰-中性红染色，不着色或淡黄色，胞体呈现圆盘状有折光尿液中常见红细胞A正常红细胞B大红细胞C小红细胞棘状红细胞尿白细胞见于膀胱炎、尿路感染、肾盂肾炎、前列腺炎等疾病

尿中常见白细胞A中性粒细胞，多见于新鲜尿液中，外形完整，圆形，浆内颗粒清晰可见，胞核清楚，常分散存在B淋巴细胞C单核细胞脓细胞团见于炎症时，由白细胞变性、坏死粘连而成A活体中性粒细胞B脓粒细胞上皮细胞表层鳞状上皮细胞：多见于女性尿液。移行上皮细胞：肾盂肾炎和膀胱炎时可见。肾小管上皮细胞：正常尿中无此细胞，一旦出现往往表示肾小管病变，如急性肾小管坏死性肾炎、肾病综合症、肾小管间质性炎症。

表层鳞状上皮细胞细胞较大，形态不规则，扁平似鱼鳞，含有小而圆或椭圆形的核。此细胞常成堆出现。经阿利新兰-中性红染色，核呈紫红色，胞浆红色。

中层移行上皮细胞体积大小不一，常呈梨形、纺锤形或带尾形，又名尾形上皮细胞。核较大呈圆或椭圆形。

底层移行上皮细胞体积较小，形态较圆，和肾小管上皮细胞统称为小圆上皮细胞。底层移行上皮细胞核相对较小，整个胞体较肾小管上皮细胞为大。肾小管上皮细胞肾小管上皮细胞群，由多个肾小管上皮细胞组成，形似管型。

管型透明管型:在正常人清晨浓缩尿中偶可见到，在激烈运动后、高热、全身麻醉等情况下，可一过性出现，肾小球肾炎时，可见明显增多。颗粒管型：增多时表示肾有实质性病变。细颗粒管型:多见于肾小球肾炎，少数可见于无肾脏疾病者尿中，特别在运动后，发热或脱水时。粗颗粒管型:多见于慢性肾小球肾炎、肾病综合症时。细胞管型:1.红细胞管型：常见于急性肾小球肾炎、慢性肾小球肾炎急性发作期、急性肾小管坏死、肾出血、肾移植术后急性排斥反应。2.白细胞管型：提示肾有炎性变化，多见于肾盂肾炎或急性肾炎。3.肾小管上皮细胞管型：各种原因所致肾小管损伤时出现，如急性肾小管坏死、肾淀粉样变性、肾移植后排斥反应。脂肪管型:可见于肾病综合症、慢性肾小球肾炎急性发作、肾小管中毒等。蜡样管型:出现时表示肾脏有长期而严重的病变，见于慢性肾炎晚期、肾衰竭和肾淀粉样变时。红细胞管型可见未完全溶解的红细胞红细胞管型管型内红细胞呈圆盘、气泡状，大小不一白细胞管型管型内充满白细胞，一般为中性粒细胞，呈球形。因白细胞黏附性强，过多时呈集团性粘合，有时白细胞破碎呈颗粒状。白细胞管型A白细胞管型B红细胞C小圆上皮细胞透明管型可见黏附少量白细胞，应与白细胞管型区别上皮细胞管型管型内含有肾小管上皮细胞，但大部分已变性，细胞大小不一。尿液中如大量出现上皮细胞管型，表示肾小管有病变和肾小管腔受到阻塞。细颗粒管型管型较长而窄，内含有许多细颗粒，不透明。管型内颗粒主要是肾上皮细胞的分解产物，开始颗粒大而粗，再降解为细颗粒粗颗粒管型橘黄色，颗粒粗大，出现于胆红素尿液中结晶尿是机体的代谢产物，大量的无机盐随尿液排出体外，维持机体的酸碱平衡。尿中折出的各种无机盐类主要取决于这些物质在尿液中的溶解度.浓度.PH，温度及药物等因素的影响。当任何一种因素失衡时，可有盐类或结晶析出，大量时可使尿液混浊。尿中盐类及结晶可分为三类：1.酸性尿液：（PH＜6.0)常见的结晶为尿酸结晶，草酸钙，硫酸钙及各种氨基酸结晶和胆固醇结晶；盐类为非结晶性尿酸盐。在新鲜尿液中如大量出现酸性尿结晶，特别是尿酸和草酸钙结晶又伴有红细胞时，多为肾或膀胱，输尿管结石。2.碱性尿液：（PH＞8.0）常见的结晶为磷酸钙，碳酸钙，尿酸铵，尿酸钙和非结晶形磷酸盐。这类结晶一般无临床意义。3.药物结晶：一种无定形的结晶，特别为磺胺类药物，如大量持续出现磺胺类结晶时，并同时有红细胞，管型存在，多表示肾已受磺胺类药物损害，应立即停用磺胺药。

尿酸结晶草酸钙结晶

为折光性强的八面体，两条对角线在中间交叉，大小不一，边缘较厚。如同时伴有较多红细胞时应考虑有尿结石可能。尿粘液丝及其他成份尿粘液丝：形状呈长丝状，粗细不等，边缘不整齐，两端尖细也可一端尖细，弯曲，易误认为管型，应引起重视。正常人尿中少见，出现大量粘液丝时，表示尿道受刺激或有炎症反应。其他成份：尿液沉渣中有时还可发现霉菌，滴虫，精子等有形成分，这也应引起注意。束状黏液丝可见于正常人尿中，尤其是女性尿中。大量出现表示尿道受刺激或有炎症反应真菌孢子西瓜子样，圆形或椭圆形，不着色或微绿色，折光性强，大小不一。真菌菌丝菌丝呈树枝状生长，有折光性双球菌球菌成双排列精子A精子B白细胞C红细胞杆菌(左)、球菌(中)、霉菌孢子(右)[报告方式]

5.脑脊液蛋白质定性试验

潘氏（Pandy‘s）试验原理

脑脊液中球蛋白与苯酚结合，形成不溶性蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。生理状态下，由于血脑屏障的作用，只允许少量白蛋白进入脑脊液，因此，正常脑脊液有时也可呈弱阳性反应。试剂5%—7%苯酚液方法

取饱和苯酚溶液2mL于试管内，加脑脊液一滴，于黑色背景下观察。