液相色谱法2讲课稿

液相色谱法2特点：灵敏度高对温度和流速不敏感，可梯度淋洗结构简单2荧光检测器具有对称共轭结构的有机芳环分子受紫外光激发后，能辐射出比紫外光波长较长的荧光。卤化钨灯发出连续波长的强激发光，280nm透镜激发滤光片流通池与激发光成90度的荧光聚焦发射滤光片光电倍增管差示折光检测器借连续测定流通池中溶液折射率的方法来测定试样浓度的检测器溶液的折射率是纯溶剂和纯溶质的折射率乘以各物质的浓度之和。因此溶有试样的流动相和纯流动相之间的折射率之差，表示试样在流动相中的浓度。如果工作池和参比池都通过纯流动相，光束无偏转，左右两个光电管的信号相等。此时输出平衡信号。如果工作池有试样通过，由于折射率改变，造成了光束的偏移，从而使到达棱镜的光束偏离棱口，左右两个光电管接收的的信号不等，因此输出一个代表偏转角大小，或试样浓度的信号而被检测。当介质中的成分发生变化时，其折射随之发生变化，如入射角不变，则光束的偏转角是介质中成分变化的函数。因此，利用测量折射角偏转值的大小，便可以测定试样的浓度。电导检测器根据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质的含量。电导池内的检测探头是一对平行的铂电极组成，将两电极构成电桥的测量臂。电导检测器的响应受温度的影响较大，因此要求严格控制温度。一般在电导池中放置热敏电阻器进行监测。高效液相色谱法的主要类型

及分离原理1液液分配色谱法2液-固色谱法3离子交换色谱法4离子对色谱法5离子色谱法6空间排阻色谱法1液液分配色谱法流动相和固定相都是液体。从理论上说，流动相与固定相之间应互不相溶，两者之间有一明显的分界面。试样溶于流动相后，在色谱柱内经过分界面进入固定液中，由于试样组分在固定相和流动相之间的相对溶解度存在差异，因而溶质在两相间分配。K=cs/cm=kVs/VmK-分配系数Cs-溶质在固定相中的浓度Cm-溶质在流动相中的浓度k–容量因子Vs-溶质在固定相中的体积Vm-溶质在流动相中的体积分离的顺序取决于分配系数的大小分配系数大的保留值大2液-固色谱法

流动相为液体，固定相为吸附剂。根据物质吸附作用的不同来分离。其作用机理是溶质分子（X）和溶剂分子（S）对吸附剂活性表面的竞争吸附。Xm+nSa=Xa×nSmXm-在流动相中的溶质分子Xa-被吸附的溶质分子Sa-被吸附在表面的溶剂分子Sm-在流动相中的溶剂分子K=[Xa][Sm]n/[Xm][Sa]nK为吸附平衡系数液固色谱适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有不同官能团的化合物和异构体有较高的选择性。3离子交换色谱法基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子对交换剂具有不同的亲合力而将它们分离的。阳离子交换M++(Na+-O3S-树脂)(M+-O3S-树脂)+Na+阴离子交换X-+(Cl-+R4N-树脂)(X-+R4N

-树脂)+Cl-4离子对色谱法将一种与溶质分子电荷相反的离子加到流动相或固定相中,使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而控制溶质离子的保留行为。用于阴离子的对离子为氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵。用于阳离子的对离子为烷基磺酸类。待分离的有机离子X+在流动相或固定相中带相反电荷的对离子Y-X+水相

+Y-水相

=X+Y-有机相

（KXY）KXY平衡常数KXY=[X+Y-]有机相

/[X+]水相

[Y-]水相

DX=[X+Y-]有机相

/[X+]水相

=KXY[Y-]水相

DX分配系数正相离子对色谱反相离子对色谱5离子色谱法

高效液相离子交换

色谱仪的结构

高压输液系统进样系统分离系统检测系统贮液器高压泵梯度洗脱装置

废液收集器检测器记录仪色谱柱进样器压力表离子交换色谱仪色谱柱填料：用苯乙烯－二乙烯基苯的树脂制成的多孔微球

1高压泵送系统由于固定相颗粒很小，柱阻力很大，为了得到高速的液流，必须有很高的柱前压。系统压力：1.52×104－3.04×104kPa流速1－2ml/min高压泵的优点：液流无脉冲，稳定。例如：离子交换色谱仪使用的双往复泵储备液－淋洗液

1超纯水－清洗系统管路2碳酸氢钠和碳酸钠混合溶液－测阴离子3盐酸－测定阳离子4草酸和氢氧化锂混合溶液－测定过渡金属离子梯度淋洗淋洗液120％淋洗液230％淋洗液350％t=0.6秒－120秒，使用淋洗液1＋2t=120秒－300秒，使用淋洗液2＋3目的是改变载液中不同极性溶剂的配比，以改变载液的极性；或改变载液的浓度、离子强度和pH值。改变分离组份的分离系数，提高分离效果。2进样系统针管3分离系统1保护柱2分离柱3抑制柱保护柱分离柱抑制柱3.1保护柱由于高分子的有机物会污染分离柱。保护柱的目的是使污染分离柱的高分子物质在保护柱中被吸附，防止影响分离柱。待测液的组份未知，也不知道是否含有高分子的物质？因此，待测液拿到后，首先稀释100倍。3.2分离柱AS4A-阴离子分离柱CS3-阳离子分离柱CS5-过渡金属离子分离柱分离柱内径1－6mm分离柱柱长10－30cm厚壁玻璃管，不锈钢管。填充剂小于20微米，采用湿法装柱填充剂大于20微米，采用干法装柱3.2.1阴离子分离柱柱填料：苯乙烯－二乙烯基苯共聚物－离子交换树脂经氯甲基化反应后其苯环上接上氯甲基再与三甲胺反应，即可接上季胺基团得到强碱性阴离子交换树脂。NR4＋阴离子交换A－＋（淋洗离子）－＋NR4-R=淋洗离子－+A－＋NR4-R3.2.2阳离子分离柱柱填料：苯乙烯－二乙烯基苯共聚物－离子交换树脂与浓硫酸反应，制成带有磺酸基团的强酸性阳离子交换树脂。SO3－C＋+H＋－O3S－R＝C＋－O3S－R＋H＋3.2.3影响离子洗脱顺序的因素离子电荷离子半径淋洗液的pH值树脂的种类3.3抑制柱阳离子抑制柱阴离子抑制柱抑制柱的目的是将高电导的淋洗液变成低电导的水和碳酸。基线值越低越好。基线走直，才能测定试样。1阳离子抑制柱原理2阴离子抑制柱原理4检测器1电导检测器2脉冲安培检测器3紫外可见检测器4.1电导检测器电导池有两个电极，它们与溶液形成回路，产生电流，电流大，电导值大，在稀溶液中，溶液的浓度和电导值成正比。4.2脉冲安培检测器这是一个电化学池，两个电极加上电压，溶液中的组份在两个电极上发生氧化还原反应，产生电流，电流值的额大小与待测组份的浓度成正比。4.3紫外可见检测器这是一个比色池，待测溶液显色后，吸收氘灯发出的光，透光度在检测器中测出，从透光度可知测测组份的吸光度，吸光度的数值与待测溶液的浓度成正比。5积分仪－记录仪－计算机峰高峰面积保留时间参考保留时间水峰6标准混合溶液的配制钙、镁、钾、钠混合标准溶液Ca2+5ppmMg2+10ppmK+5ppmNa2+10ppm阴离子的测定AS4A阴离子分离柱阴离子抑制柱电导检测器淋洗液为碳酸钠