标准解读

《YC/T 365-2010 烟草病毒的测定 逆转录-聚合酶链反应法》是一项针对烟草中病毒检测的技术标准，该标准详细规定了利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术来鉴定和定量分析烟草植物中的病毒。此方法适用于多种烟草病毒的检测，包括但不限于烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)等。

标准首先明确了实验所需的基本条件与材料准备，包括但不限于RNA提取试剂盒、逆转录酶、Taq DNA聚合酶以及其他相关生物化学试剂的选择与使用要求；还特别强调了实验室环境控制的重要性，如防止交叉污染的具体措施。此外，对于样品采集也有具体指导，确保所取样本能够准确反映烟草植株的整体健康状况。

接着，文档详尽描述了从烟草叶片或其他组织中提取总RNA的过程，并进一步通过逆转录步骤将RNA转化为cDNA。这一转化是后续PCR扩增的基础，也是整个检测流程中的关键环节之一。随后，基于特定病毒序列设计引物进行PCR扩增，通过对扩增产物的电泳分析或荧光信号监测等方式实现对目标病毒的存在与否及其相对含量的判断。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2010-10-11 颁布
  • 2010-10-15 实施
©正版授权
YC/T 365-2010烟草病毒的测定逆转录-聚合酶链反应法_第1页
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文档简介

ICS65160

X85.

备案号29841—2010

:

中华人民共和国烟草行业标准

YC/T365—2010

烟草病毒的测定

逆转录-聚合酶链反应法

Tobaccovirusdetection—Reversetranscription-polymerasechainreaction

2010-10-11发布2010-10-15实施

国家烟草专卖局发布

YC/T365—2010

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任

。。

本标准由国家烟草专卖局提出

。

本标准由全国烟草标准化技术委员会农业分技术委员会归口

(SAC/TC144/SC2)。

本标准起草单位中国烟草总公司黑龙江省公司牡丹江烟草科学研究所

:。

本标准主要起草人颜培强武常青闫新甫万秀清乔婵孙剑萍郭兆奎李丽杰邱恩建

:、、、、、、、、、

王春军元野刘德育陈荣平黄磊

、、、、。

Ⅰ

YC/T365—2010

烟草病毒的测定

逆转录-聚合酶链反应法

1范围

本标准规定了用逆转录聚合酶链反应法测定烟草种子幼苗及鲜烟叶样品中的烟草花叶病毒

-、

马铃薯病毒黄瓜花叶病毒和烟草蚀纹病毒

(TMV)、Y(PVY)、(CMV)(TEV)。

本标准适用于烟草种子幼苗和鲜烟叶样品中烟草花叶病毒马铃薯病毒黄瓜

、(TMV)、Y(PVY)、

花叶病毒和烟草蚀纹病毒的测定

(CMV)(TEV)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

烟草及烟草制品转基因检测方法

GB/T24310—2009

3术语和定义

界定的以及下列术语和定义适用于本文件为了便于使用以下重复列出了

GB/T24310—2009。,

中的一些术语和定义

GB/T24310—2009。

31

.

聚合酶链式反应扩增polymerasechainreactionamplification

模板序列在含有种脱氧核糖核酸引物聚合酶等的反应体系中在仪器中

DNA4(dNTPs)、、DNA,

通过多次高温变性退火和延伸的循环过程最终使目标片段以几何倍数扩增

、,DNA。

定义

[GB/T24310—2009,3.6]

32

.

逆转录-聚合酶链反应reversetranscription-polymerasechainreaction

提取组织或细胞中的总以其中的作为模板采用或随机引物

RNA,mRNA,Oligo(dT18)(5.1)

利用逆转录酶反转录成再以为模板进行扩增而获得目的基因或检测

(5.2)cDNA,cDNAPCR,

基因表达

。

33

.

阳性对照positivecontrol

经鉴定为含有检测目标成分的对照烟草样品

。

定义

[GB/T24310—2009,3.11]

34

.

阴性对照negativecontrol

经鉴定为不含有检测目标成分

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